【正文】 相對(duì)電導(dǎo)率的變化Fig45 Effect of slow cooling chill stress on relative electrical of broadleaf holly leaves根據(jù)朱根海等(1986)有關(guān)組織半致死溫度的計(jì)算方法，可以計(jì)算出“S”形的拐點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的溫度——即大葉冬青葉片組織的半致死溫度(LT50)，不同的處理時(shí)間“S”曲線的曲率不同。由于電導(dǎo)率的大小表示細(xì)胞膜的破壞程度，說明驟然降溫下6℃低溫即對(duì)大葉冬青葉片造成了傷害。圖44驟然降溫下大葉冬青葉片相對(duì)電導(dǎo)率的變化Fig44 Effect of rapid cooling chill stress on relative electrical of broadleaf holly leaves由圖44可見，驟然降溫下大葉冬青葉片電導(dǎo)率的變化同緩慢降溫時(shí)的變化趨勢(shì)基本一致，都呈雙峰的變化曲線，在脅迫24h時(shí)電導(dǎo)率變化最大，其中6℃處理變化明顯，%。在各低溫處理下24h 后電解質(zhì)滲出都不同程度的升高，溫度越低，電解質(zhì)滲出越多。細(xì)胞膜是防止細(xì)胞外物質(zhì)自由進(jìn)入細(xì)胞的屏障，是細(xì)胞物質(zhì)交換的主要通道，對(duì)逆境傷害反應(yīng)比較敏感。到72h時(shí)，12℃、18℃%、%，葉綠素含量下降明顯。圖41 緩慢降溫下大葉冬青葉片葉綠素含量的變化Fig41 Effect of slow cooling chill stress on chlorophyll content of broadleaf holly leaves 由圖41可知，0℃、6℃處理下大葉冬青植株葉片中葉綠素含量先降后升。丙二醛含量（） ＝ [（A532－A600）－ A450] V W 式中：V——上清液體積（ml） W——樣品鮮重（g）用Office 200SPSS 。先加入2ml濃度為5％的三氯乙酸（TCA）和石英沙進(jìn)行研磨。△A V△tμW酶活力 = 式中：△A——吸光度的差值△t——反應(yīng)的時(shí)間差（min）W——樣品鮮重（g）V——反應(yīng)液體積（ml） μ——加入的酶液體積（ml）(MDA)含量的測定采用李合生（2000）的硫代巴比妥酸法測定丙二醛（MDA ）的含量。儀器：研缽；分光光度計(jì)。儀器與用具：研缽；分光光度計(jì)。反應(yīng)結(jié)束后，用黑布遮蓋終止反應(yīng)。，（重復(fù)三次），充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，準(zhǔn)確保溫1min，取出后自然冷卻至室溫，在630nm波長下測其吸光度（A630）。步驟 ：可溶性糖的測定采用蒽酮比色法（李合生，2000）?？扇苄蕴堑臏y定采用蒽酮比色法（李合生，2000）。試劑：去離子水；蒸餾水取各處理相同位、長勢(shì)一致的葉片，用去離子水沖洗干凈并用濾紙吸干外附水分，（避開葉主脈），將葉片用紗布包好放置于大試管底部，加入10ml的蒸餾水，并使之完全浸入水中。 試驗(yàn)方法葉綠素含量的測定——參照鄒琦（2000）的方法進(jìn)行測定MDA——硫代巴比妥酸法SOD活性的測定——抑制氮藍(lán)四唑法（NBT）光化還原法POD活性的測定——愈創(chuàng)木酚法CAT活性的測定——紫外吸收法 實(shí)驗(yàn)步驟(Chl)的測定分別將各處理的葉片清洗干凈吸干外附水分，剪碎后混勻。每3天澆1次處理液，以澆透土壤為度。設(shè)4種脅迫處理：采用PEG6000溶于霍格蘭營養(yǎng)液，分別為CK(霍格蘭營養(yǎng)液)、S1(100 g試驗(yàn)將苗木在溫度21℃（4月份平均氣溫），光照強(qiáng)度為12 000 Lx，光照培養(yǎng)箱中，保持24h。對(duì)苗木進(jìn)行低溫處理前先用光照培養(yǎng)箱進(jìn)行逐步低溫鍛煉，光照時(shí)間為7：30—19：30，光照強(qiáng)度為12000Lx，每天下降3℃，直至6℃時(shí)，穩(wěn)定3天。試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)溫度處理，25℃（CK）、 0℃、6℃、12℃、18℃。 試驗(yàn)方法200903下旬將大葉冬青二年生苗移栽至河南農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)場，直接入盆。近年來，由于世界氣候變化，一些雨水充沛的地方也發(fā)生了長期干旱等極端氣候現(xiàn)象。不同低溫，不同低溫持續(xù)時(shí)間，溫度的下降速度等對(duì)大葉冬青造成的影響也各不相同。因此引進(jìn)常綠闊葉樹種，對(duì)園林工作者來說是一項(xiàng)重要的責(zé)任。另外，大葉冬青也有很好的藥用價(jià)值，可消炎殺菌、健胃消積、清勢(shì)解毒、降血壓、降低膽固醇等藥用保健功能（文永新，1990；梁月榮，1992；劉祖生，1991；戴素賢，1998）。這是因?yàn)槌趸镒杂苫倪^量生成超過了抗氧化酶系統(tǒng)的清除能力，從而造成活性氧類物質(zhì)的累積，啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化物，并進(jìn)入鏈?zhǔn)窖h(huán)反應(yīng)系統(tǒng)，同時(shí)產(chǎn)生類似丙二醛（MDA）的脂質(zhì)氧化降解產(chǎn)物。 干旱脅迫與植物保護(hù)酶系統(tǒng)的變化近年來，人們對(duì)干旱脅迫下植物體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生以及活性氧對(duì)植物的傷害和植物抗氧化防御系統(tǒng)的作用進(jìn)行了大量研究，而堪稱植物膜保護(hù)的三大酶系即超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)和過氧化氫酶(CAT)具有清除活性氧自由基的作用。 干旱脅迫與植物丙二醛（MDA）的變化植物器官衰老或遭受逆境，常會(huì)發(fā)生膜脂過氧化作用，MDA是膜脂過氧化的最終產(chǎn)物之一，其積累是活性氧毒害作用的表現(xiàn)，目前常用MDA的含量作為脂質(zhì)過氧化的主要指標(biāo)。劉玉英等（2007）測定了7個(gè)茶樹品種葉片中的葉綠素a和葉綠素b含量在干旱脅迫下的變化情況，結(jié)果表明各個(gè)茶樹品種的葉綠素a，b及總的葉綠素含量總體呈下降趨勢(shì)，并發(fā)現(xiàn)葉綠素b的下降速度要比葉綠素a的快，即葉綠素ａ/ｂ的值呈上升趨勢(shì)。也有研究表明，干旱脅迫下樹木的根莖比沒有提高，甚至有所下降（Seiler J R，1985）。PEG滲透脅迫法簡單易行，條件容易控制，重復(fù)性好，試驗(yàn)周期短，適于大批量品種(系)苗期抗旱性早期鑒定。這種方法簡單易行，卻耗時(shí)費(fèi)力，只適用于小批量苗期抗旱性研究。都能使植物產(chǎn)生水分虧缺，特別是二者同時(shí)產(chǎn)生時(shí)，植物的水分虧缺將更為嚴(yán)重（湯章城，1999）。由于連年干旱，雨量過少，每年降雨量約在200~300 mm，地下水位又較低，土壤中水分根本不能滿足植物生長，如無灌溉，植物將受干旱之害。1997年在阿根廷召開的“聯(lián)合國世界水大會(huì)”上，人們斷言：水將成為一個(gè)深刻的社會(huì)危機(jī)，世界上石油危機(jī)之后的下一個(gè)危機(jī)就是水危機(jī)（羅其友，1998）。研究表明CAT活性低的植株中抗病相關(guān)蛋白表達(dá)量增加，抗病原菌的能力增強(qiáng)，在植物防御反應(yīng)及抗衰老過程中起重要作用。王榕楷等（2001）認(rèn)為，在不良的低溫條件下，植物的抗寒能力與植物體內(nèi)能否維持較高的SOD活性有關(guān)。沈紅波（2002）在杏品種抗寒性研究證明，可溶性糖含量，隨著處理溫度的降低，呈明顯增加趨勢(shì)，抗寒性強(qiáng)的品種增加的幅度越高。傅家瑞等（1986）在研究中發(fā)現(xiàn)，低溫使煙草葉片MDA含量明顯增加，并隨低溫脅迫時(shí)間的延長呈現(xiàn)逐步升高的趨勢(shì)。 丙二醛（MDA）與植物的抗寒性 MDA是膜脂過氧化的最終產(chǎn)物，是膜系統(tǒng)受傷害的重要標(biāo)志之一。 半致死溫度與植物的抗寒性低溫半致死溫度（LT50）是指在該溫度時(shí)，植物達(dá)到半致死狀態(tài)，當(dāng)溫度繼續(xù)低于該溫度時(shí)，植物所受的傷害將不可恢復(fù)甚至死亡，LT50是評(píng)價(jià)一個(gè)物種抗寒性強(qiáng)弱比較準(zhǔn)確的指標(biāo)(朱根海等，1986；羅正榮、章文才，1994；徐康等，2005)。七十年Lyons L (1970)提出了“膜相變的寒害”假說，認(rèn)為植物低溫冷害來自于膜脂物理性質(zhì)的改變，在低溫脅迫下植物細(xì)胞膜由液晶狀態(tài)變?yōu)槟z狀態(tài)，膜脂上的脂肪酸鏈也由無序排列變成有序排列，膜的外形和厚度都發(fā)生了變化，膜上產(chǎn)生龜裂，因而膜的透性增加以及膜結(jié)合酶結(jié)構(gòu)改變，導(dǎo)致植物細(xì)胞內(nèi)生理代謝的變化和功能的紊亂，最終導(dǎo)致對(duì)植物體的傷害。低溫處理的初期(4 ℃，1 d和11℃ ，2d)，類胡蘿卜素含量明顯下降，%%；但是在以后的脅迫期間內(nèi)其含量變化不大。②膜成分分析法。 細(xì)胞膜透性的研究現(xiàn)在主要采用的是電導(dǎo)法、膜成分分析法等。 生長恢復(fù)試驗(yàn)法生長恢復(fù)試驗(yàn)法包括生長試驗(yàn)和組織褐變兩種。當(dāng)溫度迅速下降時(shí)，除了在細(xì)胞間隙結(jié)冰以外，細(xì)胞內(nèi)的水分也會(huì)結(jié)冰，一般是先在原生質(zhì)內(nèi)結(jié)冰，后來在液泡內(nèi)結(jié)冰，這就是細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。有些植物的某些組織中存在深度過冷現(xiàn)象，冰點(diǎn)可降到10～15℃?！】箖鰴C(jī)理①細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰。低溫脅迫時(shí)，質(zhì)膜上的脂類發(fā)生了變化，磷脂和游離甾醇含量增加，減少了甾醇糖苷、?；薮继擒蘸推咸烟擒罩浮? 目前，對(duì)植物的抗寒性研究主要集中在農(nóng)作物以及一些主要的園林植物當(dāng)中進(jìn)行，如農(nóng)作物當(dāng)中的小麥、玉米、棉花等。1年不當(dāng)中有2個(gè)生長高峰，分別出現(xiàn)在4月和7～8月，無明顯病蟲害發(fā)生。生于山坡竹林內(nèi)及灌木叢中；主要分布于長江下游各省及福建等地，河南南部大別山區(qū)有自然分布。葉厚革質(zhì)，長橢圓形，長8～20 cm，～5 cm，頂端銳尖，基部楔形，主脈在表面凹陷，在背面顯著隆起；葉柄粗壯， cm。試驗(yàn)表明，在驟然降溫下，6 ℃低溫脅迫三天就對(duì)大葉冬青造成了傷害，遠(yuǎn)比緩慢降溫造成的傷害要大。MDA含量和相對(duì)電導(dǎo)率在兩種降溫過程下都呈上升趨勢(shì)。特別感謝我的師兄王寧博士，趙清賀還有同窗及同門的張瑞粉，董亞芳，喬俊鵬及師妹梅海軍同學(xué)，他們對(duì)本論文的試驗(yàn)做了不少工作，給予我不少的幫助，在此表示感謝！值此論文草成之際，我的心情萬分激動(dòng)。授人以漁而非魚，置身其中，耳濡目染，潛移默化，使我不僅接受了全新的思想觀念，樹立了宏偉的學(xué)術(shù)目標(biāo)，領(lǐng)會(huì)了科學(xué)的思考方式，掌握了通用的研究方法，而且還明白了許多待人接物與為人處世的道理。本人同意河南農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩 士 學(xué) 位 論 文題 目 低溫與干旱脅迫對(duì)大葉冬青葉片生理特性影響的研究學(xué)位申請(qǐng)人姓名 夏 鵬 云 導(dǎo) 師 姓 名 蘇 金 樂 教授 學(xué) 科 專 業(yè) 園林植物與觀賞園藝 研 究 方 向 園林植物遺傳育種 中國 鄭州2010年6月分類號(hào) 密級(jí)河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目：低溫與干旱脅迫對(duì)大葉冬青葉片生理特性影響的研究英文題目：Physiological Responses of Broadleaf Holly Leaves under Low temperature and Drought Stress 學(xué)位申請(qǐng)人： 夏 鵬 云 導(dǎo) 師： 蘇 金 樂 教授 專 業(yè)： 園林植物與觀賞園藝 研究方向： 園林植物遺傳育種 論文提交 學(xué)位授予日 期： 日 期：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明、使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾書學(xué)位論文題目低溫與干旱脅迫對(duì)大葉冬青葉片生理特性影響的研究 學(xué)位級(jí)別碩 士學(xué)生姓名夏鵬云學(xué)科專業(yè)園林植物與觀賞園藝導(dǎo)師姓名蘇金樂教授學(xué)位論文是否保密如需保密，解密時(shí)間 年 月 日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人呈交論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得河南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。研究生簽名： 導(dǎo)師簽名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。研究生簽名： 導(dǎo)師簽名： 學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名：日期： 年 月 日 日期： 年 月 日 日期： 年 月 日致謝 本研究及學(xué)位論文是在我的導(dǎo)師蘇金樂教授的親切關(guān)懷和悉心指導(dǎo)下完成的，蘇老師治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)，思想深邃，學(xué)識(shí)淵博，觀察敏銳，談吐儒雅，為我營造了一種良好的精神氛圍。 同時(shí)，我還要感謝在一起愉快的度過研究生生活的07級(jí)園林植物與觀賞園藝專業(yè)的同學(xué)們，正是由于你們的幫助和支持，我才能一個(gè)一個(gè)的克服困難和疑惑，直至本文的順利完成。在緩慢降溫下，大葉冬青植株葉片中葉綠素含量在0 ℃、6 ℃處理下先降后升，驟然降溫下葉綠素含量的變化基本呈下降的趨勢(shì)。驟然降溫下大葉冬青葉片CAT活性的變化與緩慢降溫的變化趨勢(shì)基本一致，即隨著低溫脅迫時(shí)間的延長，CAT活性先升高，再降低。 關(guān)鍵詞：大葉冬青；低溫脅迫；干旱脅迫；生理特性1文獻(xiàn)綜述 大葉冬青的形態(tài)特征及地理分布 大葉冬青為常綠喬木，高可達(dá)20 m；樹皮灰黑色，粗糙；枝條粗壯，平滑無毛，幼枝有棱?；ㄆ?～5月，果熟期10月。種子休眠期可長達(dá)3年，幼苗苗期生長較緩，一般3年后進(jìn)入速生階段，～ m。大葉冬青是在最近幾年才逐漸被人們所利用，因此到目前為止，大葉冬青在園林的應(yīng)用當(dāng)中還算是一種新興樹種，人們對(duì)它的研究還非常有限，所以很少有文獻(xiàn)資料記載，目前國內(nèi)外的科研工作者對(duì)大葉冬青的研究主要集中在無性繁殖、生化指標(biāo)的