農桿菌介導轉化法的概述-全文預覽
【正文】 要有原生質體法、葉盤法和整株感染法等。轉化率存在問題與展望et1993年1994年取得了重大突破，Chan等（1993）以水稻開花授粉后1012天的幼胚為受體，經農桿菌感染后獲得了轉基因植株；Hiei等（1997）以水稻成熟胚愈傷組織和未成熟幼胚為受體，獲得了較多有嚴格分子生物學證據的轉基因植株，并對農桿菌介導法轉化水稻的影響因素進行了詳細研究，建立了比較成熟的農桿菌轉化水稻的技術體系，為農桿菌介導法轉化單子葉植物開辟了先河。Grimsley等（1987）首先將玉米條紋病毒(maize4原生質體法 該法轉化的健壯植株倒置浸于裝有攜帶外源目的基因的農桿菌滲入培養(yǎng)基的容器中，經真空處理，造傷，使農桿菌通過傷口感染植株，在農桿菌的介導下，發(fā)生遺傳轉化。 選取健康的無菌苗，用打孔器打出葉圓盤，將帶有新鮮傷口的葉圓盤與載有目的基因的農桿菌液進行短期共培養(yǎng)，農桿菌通過傷口使攜帶外源目的基因的Ti或Ri質粒進入植物細胞，使外源目的基因整合到植物基因組中。通常使用的是第一種方式。利用農桿菌與植物離體組織共培養(yǎng)進行轉化，一般需要經過嚴格的組織培養(yǎng)過程以再生植株，因而轉化周期比較長。TDNA整合進宿主細胞基因組，是轉化過程中最重要也最關鍵的步驟。被取代的舊鏈游離出來，與許多VirE2蛋白分子結合組成TDNA復合體。VirD基因編碼的兩個產物VirD1和VirD2直接參與加工過程．VirD1蛋白是一種拓撲異構酶，可將超螺旋型DNA變成松弛型DNA．VirD2蛋白具有特異剪切單鏈DNA以加強As對Vir基因的誘導VirGVir區(qū)基因的活化首先是從virA基因開始的。在植物受到創(chuàng)傷后，創(chuàng)傷組織的細胞釋放出酚類化合物信號，轉化過程農桿菌介導的TDNA的轉移和整合是細菌和植物細胞相互作用發(fā)生生物學效應的過程，兼具原核生物中的細菌結合轉移及真核細胞加工修飾的特點。TDNA區(qū)的TL區(qū)具有較高的穩(wěn)定性，TR區(qū)具有與生長素合成有關的基因tmsl和tms2及農桿堿或甘露堿合成基因。rhizogenes)含有Ri質粒，能夠誘導被侵染的植物細胞產生毛發(fā)狀根。在遺傳轉化過程中除了Ti質粒上的基因參與外，還有農桿菌染色體基因．染色體基因包chvA、chvB、att、pscA、chvD以及chvB．它們大多編碼一些膜相關蛋白，負責細菌向植物受傷細胞趨化移動和幫助細菌附著于植物受傷細胞上。(Con區(qū))：該區(qū)段存在有與細菌間接合轉移有關的基因(tra)，調控Ti質粒在農桿菌間轉移。(vir區(qū))：位于TDNA以外的1個3040kb的區(qū)域內，該區(qū)段編碼的基因雖然并不整合進植物基因組中，但對TDNA的轉移和整合非常重要。bp是完全保守的，分10原始的Ti質粒根據其功能的不同可分為4個區(qū)：(Transfer—DNA本文對農桿菌介導轉化法進行綜述。[1]植物轉基因技術是指把從動物、植物或微生物中分離到的目的基因，通過各種方法轉移到植物的基因組中，使之穩(wěn)定遺傳并賦予植物新的農藝性狀，如抗蟲、抗病、抗逆、高產、優(yōu)質等。農桿菌介導法起初只被用于雙子葉植物中，近年來，農桿菌介導轉化法在一些單子葉植物
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