【正文】 m = (a2)[S]如果KI在數(shù)值上等于IC50，則a = 2，a2 = 0，Km = 0，而實(shí)際上，Km并不為零。（3）用LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法，結(jié)果如下：Km與Vmax值抑制劑濃度[I] = 0[I] = 10 mmol/LKm/(mmolL1) Vmax/(mmolL1min1)抑制劑的類型：競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制劑。（2）如何確定在實(shí)驗(yàn)中測(cè)得的酶促反應(yīng)速率是真正的初速率？（3）在實(shí)驗(yàn)中使用了一種抑制劑，下表中是在分別存在與不存在抑制劑I的情況下測(cè)定的對(duì)應(yīng)不同底物濃度的酶促反應(yīng)速率，請(qǐng)利用表中的數(shù)據(jù)計(jì)算其各自對(duì)應(yīng)的Km與Vmax值，并判斷抑制劑的類型。由于該共價(jià)復(fù)合物形成與分解的反應(yīng)所需活化能均比非酶促反應(yīng)低，因此反應(yīng)速率被加快。酶與底物同時(shí)發(fā)生變化的結(jié)果是酶與底物形成一個(gè)互相契合的復(fù)合物，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)換成過(guò)渡態(tài)形式，在過(guò)渡態(tài)形式中，酶活性部位的構(gòu)象與底物過(guò)渡態(tài)構(gòu)象十分吻合，從而降低活化能，增加底物的反應(yīng)速率。（3）第65位的精氨酸與第108位的絲氨酸在酶的空間結(jié)構(gòu)中應(yīng)相互靠近，因?yàn)檫@兩個(gè)氨基酸殘基都位于酶的活性部位，根據(jù)酶活性部位的特點(diǎn)，參與組成酶活性部位的氨基酸殘基在酶的空間結(jié)構(gòu)中是相互靠近的。解答：參考本章第5節(jié)內(nèi)容。j 異構(gòu)酶類；k 水解酶類；l 轉(zhuǎn)移酶類；m 氧化還原酶類中的脫氫酶；n 合成酶類；o 裂合酶類；p 氧化還原酶類中的氧化酶；q 轉(zhuǎn)移酶類；r 水解酶類；s 合成酶類（又稱連接酶類）。解答：脂質(zhì)體是脂雙層膜組成的封閉的、內(nèi)部有空間的囊泡。而且與細(xì)胞識(shí)別、種的特異性、組織免疫性等有密切的關(guān)系。（1） 膜脂：其中磷脂、糖脂、固醇等脂質(zhì)物質(zhì)都屬于兩性分子。6．何為生物膜？主要組成是什么？各有何作用？解答：任何細(xì)胞都以一層薄膜將其內(nèi)容物與環(huán)境分開(kāi)，這層薄膜稱為細(xì)胞的質(zhì)膜。植物的葉綠體和微生物的質(zhì)膜含有大量的甘油糖脂。酸性鞘糖脂，糖基部分含有唾液酸或硫酸基的鞘糖脂。①鞘糖脂：依據(jù)糖基是否含有唾液酸或硫酸基成分，鞘糖脂又可分為中性鞘糖脂和酸性鞘糖脂。膽固醇易與毛地黃糖苷結(jié)合而沉淀，這一特性可以用于膽固醇的定量測(cè)定。介電常數(shù)高，不導(dǎo)電。膽固醇分子的一端有一極性頭部基團(tuán)羥基因而親水，分子的另一端具有羥鏈及固醇的環(huán)狀結(jié)構(gòu)而疏水。②鞘磷脂（SM）：鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷脂酰膽堿（少數(shù)為磷脂酰乙醇胺）組成?；瘜W(xué)性質(zhì)：a.?水解作用：在弱堿溶液中，甘油磷脂水解產(chǎn)生脂肪酸的金屬鹽。是由sn甘油3磷酸分子中甘油的兩個(gè)醇羥基與脂肪酸成酯，第三個(gè)醇羥基與磷酸成酯或磷酸再與其他含羥基的物質(zhì)(如膽堿、乙醇胺、絲氨酸等醇類衍生物)結(jié)合成酯。是動(dòng)物組織中含量最豐富的固醇類化合物，有游離型和酯型兩種形式。植物的葉綠體和微生物的質(zhì)膜含有大量的甘油糖脂。②酸性鞘糖脂：糖基部分含有唾液酸或硫酸基的鞘糖脂稱為酸性鞘糖脂。依據(jù)糖基是否含有唾液酸或硫酸基成分，鞘糖脂又可分為中性鞘糖脂和酸性鞘糖脂。鞘磷脂由鞘氨醇、脂肪酸和磷脂酰膽堿（少數(shù)磷脂酰乙醇胺）組成。如果用強(qiáng)堿水解，甘油磷脂水解生成脂肪酸鹽、醇（X―OH）和磷酸甘油。它們是前列腺素、血栓噁烷和白三烯等生物活性物質(zhì)的前體。③脂肪酸中的雙鍵極易被強(qiáng)氧化劑，如H2O超氧陰離子自由基（）、羥自由基（根據(jù)烴鏈?zhǔn)欠耧柡停蓪⒅舅岱譃轱柡椭舅岷筒伙柡椭舅?。脂質(zhì)在生物體中還常以共價(jià)鍵或通過(guò)次級(jí)鍵與其他生物分子結(jié)合形成各種復(fù)合物，如糖脂、脂蛋白等重要的生物大分子物質(zhì)。(2)脂質(zhì)的生物學(xué)作用：脂質(zhì)具有許多重要的生物功能。5 脂類化合物和生物膜1．簡(jiǎn)述脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和生物學(xué)作用。X已知4種血型的差異僅在X位組成成分的不同。8．人的紅細(xì)胞質(zhì)膜上結(jié)合著一個(gè)寡糖鏈,對(duì)細(xì)胞的識(shí)別起重要作用。（3）龍 膽二糖含葡萄糖，β→1，6 糖苷鍵，有還原性。雖然纖維素不能作為人類的營(yíng)養(yǎng)物,但人類食品中必須含纖維素。支鏈淀粉相對(duì)分子質(zhì)量雖大，但分支單位的長(zhǎng)度只有 20～30個(gè)葡萄糖基,故與碘反應(yīng)呈紫紅色。其顏色與糖鏈的長(zhǎng)度有關(guān)。直鏈淀粉分子的空間構(gòu)象是卷曲成螺旋形的,每一回轉(zhuǎn)為6個(gè)葡萄糖基,淀粉在水溶液中混懸時(shí)就形成這種螺旋圈。5．透明質(zhì)酸是細(xì)胞基質(zhì)的主要成分，是一種黏性的多糖,分子量可達(dá)100?000，由兩單糖衍生物的重復(fù)單位構(gòu)成,請(qǐng)指出該重復(fù)單位中兩組分的結(jié)構(gòu)名稱和糖苷鍵的結(jié)構(gòu)類型。A、B、C為D構(gòu)型，D為L(zhǎng)構(gòu)型。用β―葡糖苷酶可將其水解為兩分子βD吡喃葡糖, 說(shuō)明該雙糖是由β糖苷鍵構(gòu)成的。其旋轉(zhuǎn)角度稱為旋光度,偏振面向左旋轉(zhuǎn)稱為左旋,向右則稱為右旋。解答：書寫單糖的結(jié)構(gòu)常用D、L；d 或(+)、l或()；、表示。采用毛細(xì)管電泳法測(cè)序時(shí)，這種技術(shù)一次可測(cè)定700個(gè)左右核苷酸的序列，一臺(tái)儀器可以有幾十根毛細(xì)管同時(shí)進(jìn)行測(cè)序，且電泳時(shí)間大大縮短，自動(dòng)測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步加快了核酸測(cè)序的步伐，現(xiàn)已完成了包括人類在內(nèi)的幾十個(gè)物種的基因組測(cè)序。因此，鏈中有幾個(gè)A，就能得到幾種大小不等的以A為末端的片段。,3162。如果在4個(gè)試管中分別進(jìn)行合成反應(yīng)，每個(gè)試管的反應(yīng)體系能在一種核苷酸處隨機(jī)中斷鏈的合成，就可以得到4套分子大小不等的片段，如新合成的片段序列為CCATCGTTGA，在A處隨機(jī)中斷鏈的合成，可得到CCA和CCATCGTA兩種片段，在G處中斷合成可得到CCATCG和CCATCGTTG兩種片段。其中鏈終止法經(jīng)不斷改進(jìn)，使用日益廣泛。促進(jìn)了雜交技術(shù)在分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。隨后，Alwine等提出將電泳分離后的變性RNA吸印到適當(dāng)?shù)哪ど显龠M(jìn)行分子雜交的技術(shù)，被戲稱為 Northern印跡法，或Northern雜交。將核酸直接點(diǎn)在膜上，再與探針雜交稱點(diǎn)雜交，使用狹縫點(diǎn)樣器時(shí)，稱狹縫印跡雜交。15．概述分子雜交的概念和應(yīng)用領(lǐng)域。③ 單鏈片段的長(zhǎng)度，單鏈片段越大，擴(kuò)散速度越慢，鏈間錯(cuò)配的概率也越高。對(duì)單鏈DNA進(jìn)行電泳時(shí)，常使用上述變性劑。高pH下，堿基廣泛去質(zhì)子而喪失形成氫鍵的有力，DNA完全變性。離子強(qiáng)度較低的介質(zhì)中，Tm較低。13．哪些因素影響Tm值的大??？解答：影響Tm的因素主要有：① GC對(duì)含量。變性后，發(fā)生了螺旋線團(tuán)轉(zhuǎn)變，黏度顯著降低；③ 在氯化銫溶液中進(jìn)行密度梯度離心，變性后的DNA浮力密度大大增加，故沉降系數(shù)S增加；④ DNA變性后，堿基的有序堆積被破壞，堿基被暴露出來(lái)，因此，紫外吸收值明顯增加，產(chǎn)生所謂增色效應(yīng)。其核心作用是既可以作為信息分子又可以作為功能分子發(fā)揮作用。⑥ 原核生物功能上密切相關(guān)的基因相互靠近，形成一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位，稱操縱子，真核生物不存在操縱子。 ② 真核生物有多個(gè)呈線形的染色體；原核生物只有一條環(huán)形染色體。雖然兩種超螺旋都能釋放應(yīng)力，但是負(fù)超螺旋時(shí)，如果發(fā)生DNA解鏈（即氫鏈斷開(kāi)，部分雙螺旋分開(kāi)）就能進(jìn)一步釋放應(yīng)力，而DNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制需要解鏈。7．有一個(gè)X噬菌體突變體的DNA長(zhǎng)度是15μm，而正常X噬菌體DNA的長(zhǎng)度為17μm，計(jì)算突變體DNA中丟失掉多少堿基對(duì)？解答：（17–15） 103/ = 103bp8．概述超螺旋DNA的生物學(xué)意義。解答： （107/640）= 104nm = 13μm。3．一個(gè)雙螺旋DNA分子中有一條鏈的成分[A] = ，[G] = ，① 請(qǐng)推測(cè)這一條鏈上的[T]和[C]的情況。核苷酸和3162。2．為什么DNA不易被堿水解，而RNA容易被堿水解?解答：因?yàn)镽NA的核糖上有2162。3 核酸1．① 電泳分離四種核苷酸時(shí)，通常將緩沖液調(diào)到什么pH？此時(shí)它們是向哪極移動(dòng)？移動(dòng)的快慢順序如何? ② 將四種核苷酸吸附于陰離子交換柱上時(shí)，應(yīng)將溶液調(diào)到什么pH？③ 如果用逐漸降低pH的洗脫液對(duì)陰離子交換樹(shù)脂上的四種核苷酸進(jìn)行洗脫分離，其洗脫順序如何？為什么？ 解答：① 的緩沖液，在該pH時(shí)，這4種單核苷酸之間所帶負(fù)電荷差異較大，它們都向正極移動(dòng)，但移動(dòng)的速度不同，依次為：UMPGMPAMPCMP；② ，這樣可使核苷酸帶較多負(fù)電荷，利于吸附于陰離子交換樹(shù)脂柱。（5）從有重疊結(jié)構(gòu)的各個(gè)肽的序列中推斷出蛋白質(zhì)中全部氨基酸排列順序。解答：（1）測(cè)定蛋白質(zhì)中氨基酸組成。（2）LiBH4還原后再水解，水解液中有氨基乙醇，證明肽的C端為Gly。7．一個(gè)α螺旋片段含有180個(gè)氨基酸殘基，該片段中有多少圈螺旋？計(jì)算該α螺旋片段的軸長(zhǎng)。當(dāng)以Sanger試劑處理時(shí)分別得到DNPAla和DNPVal。 6．由下列信息求八肽的序列。若有二硫鍵存在時(shí)還需加什么試劑？（4）在芳香族氨基酸殘基羧基側(cè)水解肽鍵。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已經(jīng)變性。如鹽析或低溫下的乙醇（或丙酮）短時(shí)間作用蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)由于帶有電荷和水膜，因此在水溶液中形成穩(wěn)定的膠體。3．指出下面pH條件下，各蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中向哪個(gè)方向移動(dòng)，即正極，負(fù)極，還是保持原點(diǎn)？（1）胃蛋白酶（pI ），在pH ；（2）血清清蛋白（pI ），在pH ；（3）α脂蛋白（pI ），在pH ；解答：（1）胃蛋白酶pI ＜環(huán)境pH ，帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)；（2）血清清蛋白pI ＜環(huán)境pH ，帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)；（3）α脂蛋白pI ＞環(huán)境pH ，帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)；α脂蛋白pI ＜環(huán)境pH ，帶負(fù)電荷，向正極移動(dòng)。被釋放的氨基酸數(shù)目與種類隨反應(yīng)時(shí)間的而變化。肼解法：蛋白質(zhì)或多肽與無(wú)水肼加熱發(fā)生肼解，反應(yīng)中除C端氨基酸以游離形式存在外，其他氨基酸都轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的氨基酸酰肼化物。在酸性有機(jī)溶劑中加熱時(shí)，N―末端的PTC―氨基酸發(fā)生環(huán)化，生成苯乙內(nèi)酰硫脲的衍生物并從肽鏈上掉下來(lái)，除去N―末端氨基酸后剩下的肽鏈仍然是完整的。由于DNFB與氨基形成的鍵對(duì)酸水解遠(yuǎn)比肽鍵穩(wěn)定，因此DNP―多肽經(jīng)酸水解后，只有N―末端氨基酸為黃色DNP―氨基酸衍生物，其余的都是游離氨基酸。①―二硝基氟苯(DNFB或FDNB)法：多肽或蛋白質(zhì)的游離末端氨基與―二硝基氟苯（―DNFB）反應(yīng)（Sanger反應(yīng)），生成DNP―多肽或DNP―蛋白質(zhì)。③ 苯異硫氰酸脂（PITC或Edman降解）法：多肽或蛋白質(zhì)的游離末端氨基與異硫氰酸苯酯（PITC）反應(yīng)（Edman反應(yīng)），生成苯氨基硫甲酰多肽或蛋白質(zhì)。（2）C―末端測(cè)定法：常采用肼解法、還原法、羧肽酶法。③ 羧肽酶法：是一類肽鏈外切酶，專一的從肽鏈的C―末端開(kāi)始逐個(gè)降解，釋放出游離的氨基酸。%%，問(wèn)其最低相對(duì)分子質(zhì)量是多少？解答：（1）血紅蛋白：（2）酶：因?yàn)榱涟彼岷彤惲涟彼岬南鄬?duì)分子質(zhì)量相等，所以亮氨酸和異亮氨酸的殘基數(shù)之比為：%:%=2:3，因此，該酶分子中至少含有2個(gè)亮氨酸，3個(gè)異亮氨酸。蛋白質(zhì)變性后的表現(xiàn)：①?生物學(xué)活性消失； ②?理化性質(zhì)改變：溶解度下降，黏度增加，紫外吸收增加，側(cè)鏈反應(yīng)增強(qiáng)，對(duì)酶的作用敏感，易被水解。蛋白質(zhì)的沉淀可以分為兩類：（1）可逆的沉淀：蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)未發(fā)生顯著的變化，除去引起沉淀的因素，蛋白質(zhì)仍能溶于原來(lái)的溶劑中，并保持天然性質(zhì)。蛋白質(zhì)變性后，有時(shí)由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在，并不析出。（3）不含二硫鍵的蛋白質(zhì)的可逆變性。解答：（1）異硫氰酸苯酯；（2）丹黃酰氯；（3）脲；巰基乙醇還原二硫鍵；（4）胰凝乳蛋白酶；（5）CNBr；（6）胰蛋白酶。（3）胰蛋白酶處理得Ala，Arg，Thr 和 Leu，Met，Phe，2Val。所以八肽為：AlaThrArgValValMetLeuPhe。試問(wèn)這四肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)是由哪幾種氨基酸組成的？解答：（1）四肽與FDNB反應(yīng)后，證明N端為Val。9．概述測(cè)定蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的基本步驟。（4）分離提純所產(chǎn)生的肽，并測(cè)定出它們的序列。拆開(kāi)二硫鍵可用過(guò)甲酸氧化，使胱氨酸部分氧化成兩個(gè)半胱氨磺酸。靜電吸附與非極性吸附共同作用的結(jié)果使洗脫順序?yàn)椋篊MP AMP UMP GMP。環(huán)磷酸酯，繼續(xù)水解產(chǎn)生2162。OH基，不能形成堿水解的中間產(chǎn)物，故對(duì)堿有一定抗性。4．對(duì)雙鏈DNA而言，① 若一條鏈中(A + G)/(T + C)= ，則互補(bǔ)鏈中和整個(gè)DNA分子中(A+G)/(T+C)分別等于多少？② 若一條鏈中(A + T)/(G + C)= ，則互補(bǔ)鏈中和整個(gè)DNA分子中(A + T)/(G + C)分別等于多少 ？解答：① 設(shè)DNA的兩條鏈分別為α和β則： Aα= Tβ，Tα= Aβ，Gα= Cβ，Cα= Gβ，因?yàn)椋?Aα+ Gα)/（Tα+ Cα）= (Tβ+ Cβ)/（Aβ+ Gβ）= ， 所以互補(bǔ)鏈中（Aβ+ Gβ）/（Tβ+ Cβ）= 1/ =；在整個(gè)DNA分子中，因?yàn)锳 = T， G = C，所以，A + G = T + C，（A + G）/（T + C）= 1；② 假設(shè)同（1），則Aα+ Tα= Tβ+ Aβ，Gα+ Cα= Cβ+ Gβ，所以，（Aα+ Tα）/（Gα+ Cα）=（Aβ+ Tβ）/（Gβ+ Cβ）= ；在整個(gè)DNA分子中，（Aα+ Tα+ Aβ+ Tβ）/（Gα+Cα+ Gβ+Cβ）= 2（Aα+ Tα）/2（Gα+Cα）= 5．T7噬菌體DNA(雙鏈BDNA)107，計(jì)算DNA鏈的長(zhǎng)度(設(shè)核苷酸對(duì)的平均相對(duì)分子質(zhì)量為640)。解答：每個(gè)體細(xì)胞的DNA的總長(zhǎng)度為： 109 = 109 nm = ，人體內(nèi)所有體細(xì)胞的DNA的總長(zhǎng)度為：1014 = 1011km，這個(gè)長(zhǎng)度與太陽(yáng)―地球之間距離（109 km）相比為： 1011/ 109 = 99倍，每個(gè)核苷酸重1 1018g/1000 = 1021g，所以，總DNA 1023 1021 = 102 = 640g。雙螺旋過(guò)度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致正超螺旋，而旋轉(zhuǎn)不足將導(dǎo)致負(fù)超螺旋。原核生物DNA含量低，不含組蛋白，稱為類核體，只有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。⑤ 真核生物的RNA是細(xì)胞核內(nèi)合成的，它必須運(yùn)輸穿過(guò)核膜到細(xì)胞質(zhì)才能翻譯，這樣嚴(yán)格的空間間隔在原核生物內(nèi)是不存在的。11．如何看待RNA功能的多樣性?它的核心作用是什么?解答：RNA的功能主要有: ① 控制蛋白質(zhì)合成；② 作用于RNA轉(zhuǎn)錄后加工與修飾；③ 參與細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)；