【正文】 能改變。鹽離子濃度增大，反膠團內(nèi)表面的雙電層變薄，反膠團與蛋白質(zhì)分子的靜電作用變?nèi)?。故對于陽離子表面活性劑，溶解的PH值需高于PI值時，反膠團萃取才能進行，表明蛋白質(zhì)所帶的凈電荷與表面活性劑極性頭所帶電荷符號相反，兩者的靜電作用對萃取蛋白質(zhì)有利，如果PH值很低，在界面上會產(chǎn)生白色絮凝物，并且萃取率也降低。、。圖2最大吸收波長的選取表4 不同PH值的波峰、波谷值PH值峰波長/(nm)峰值/(nm)谷波長/(nm)谷值/(nm)1″2″1′2′12，但曲線不平滑，趨于與X軸平行，在210nm左右有波峰，故選取210nm處進行測量，這樣得到萃取后的A值才能有比較。 萃取方法將一定體積的反膠團溶液與一定體積的濃度、PH值及離子強度都確定的BSA溶液混合，經(jīng)恒溫磁力攪拌器攪拌3min后，在離心機上離心30min。離心分離是利用慣性離心力和物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的不同而進行的一項分離、濃縮或提煉操作，對那些固體顆粒很小或液體黏度很大，過濾速度很慢，甚至難以過濾的懸浮液十分有效，不但用于懸浮液中液體或固體的直接回收，而且可用于連種互不混溶液體的分離，如液液萃取、和不同密度固體或乳濁液的分離[7]。構成反膠團的表面活性劑最好具有空間體積較大的疏水基團和體積較小的親水基團[2]。非極性部分是直鏈或支鏈的碳氫或碳氟鏈，它們與水的親和力極弱，與油有較強的親和力，因此稱為憎水基或親油基(hydrophobic或lipophilic group)。陽離子表面活性劑很少用于清洗，然而它卻具有一些獨特的性能和作用。通常希望所選表面活性劑形成極性核較大的反膠團，且反膠團與蛋白質(zhì)的作用不應太強，以減少蛋白質(zhì)的失活。反膠團萃取蛋白質(zhì)的動力學：萃取過程中，蛋白質(zhì)在互不相溶的兩相間的傳遞分三步：蛋白質(zhì)從水溶液主體擴散到界面；在界面形成包容蛋白質(zhì)的反膠束；含有蛋白質(zhì)的反膠束在有機相中擴散離開界面[7]。由于這些作用力在非極性溶劑的環(huán)境中較弱，反膠團形成的推動力小得多，所以形成的反膠團的聚集數(shù)也很小，一般在10以下，而且隨著表面活性劑濃度的變化而變化，但是，在很寬的濃度范圍內(nèi)聚集數(shù)并無突變，不存在明顯的臨界膠束濃度，水或其他極性雜質(zhì)的存在可以大大增加聚集數(shù)。反膠團法利用蛋白質(zhì)等生物物質(zhì)在水相和反膠團相間分配的不同進行萃取分離。反膠團體系由表面活性劑、助溶劑、水和有機溶劑構成。反膠團萃取技術具有高選擇性、易放大、萃取相(反膠團相)可循環(huán)利用以及分離和濃縮同步進行等優(yōu)點，特別適用于蛋白質(zhì)的分離[3]，既利用了溶劑萃取的優(yōu)點，又實現(xiàn)了生物物質(zhì)的有效分離，作為一種新型的生物分離技術應用于蛋白質(zhì)、氨基酸及藥物、農(nóng)藥等物質(zhì)的分離分析中，顯示了巨大的應用潛力。這些電泳法又根據(jù)是否使用凝膠載體分為凝膠電泳和自由流電泳。而疏水性相互作用層析應用普遍。水溶液中蛋白質(zhì)的溶解度一般在生理離子強度范圍內(nèi)()最大，而低于或高于此范圍時溶解度均降低，蛋白質(zhì)在高離子強度的溶液中溶解度降低、發(fā)生沉淀的現(xiàn)象稱為鹽析(Saltingout)，利用鹽析沉淀初級純化的產(chǎn)物中鹽含量較高，一般在鹽析沉淀后，需進行脫鹽處理。反膠團法分離蛋白質(zhì)，使蛋白質(zhì)始終處于有水的環(huán)境中，不致失活，有機相可循環(huán)使用，設備簡單、料液預處理簡單，不存在膜污染，對于蛋白質(zhì)分離方法的改進具有重要意義。 幾種分離方法的比較 利用基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)蛋白質(zhì)，料液中含有大量組成復雜的培養(yǎng)基、菌體代謝產(chǎn)物等，目標蛋白的含量常常不到蛋白質(zhì)總量的1%。在水溶液中，多肽鏈中的疏水性氨基酸殘基具有向內(nèi)部折疊的趨勢，使親水性氨基酸殘基分布在蛋白質(zhì)立體結構的外表面。牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin，簡寫為BSA)是由582個氨基酸殘基組成，分子量約為67000，. BSA支鏈中含有17個對維系蛋白質(zhì)空間結構穩(wěn)定性起重要作用的二硫鍵，由它們組成八對結構交叉相鄰的二硫橋鍵按物理特性溶解度來分，牛血清白蛋白屬于清蛋白，溶于水、稀鹽、稀酸及稀堿溶液，能為飽和硫酸按所沉淀。牛血清白蛋白產(chǎn)品(BSA) 是一種用途廣泛的生物產(chǎn)品，能配制細胞培養(yǎng)基；配制標準蛋白質(zhì)試劑盒；借用電泳技術測定未知蛋白質(zhì)的分子量。、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。牛血清是細胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。它是血液緩沖劑，能維持正常的血液滲透壓:并且它還可以存儲和轉(zhuǎn)運眾多的內(nèi)源性和外源性物質(zhì)。蛋白質(zhì)的結構決定了蛋白質(zhì)的性質(zhì)和功能，相對于其他蛋白質(zhì)而言，血清白蛋白的結構并不復雜，血清白蛋白(Serum Albumin)是人和哺乳動物體內(nèi)血漿中含量最豐富的蛋白質(zhì)，約占血漿總蛋白的60%。所以，血清白蛋白成為研究蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、生物學功能、體內(nèi)代謝、臨床應用和遺傳變異等方面的理想蛋白質(zhì)，從五十年代開始人們對其展開了大量的研究，以期在分子水平上揭示相關生命過程的奧秘。，起到解毒作用。在動物血液中,白蛋白分子和其他血液成分共同協(xié)調(diào)保護紅細胞,處于等滲狀態(tài),此外,白蛋白分子能運輸代謝產(chǎn)物,保持動物生理狀態(tài)。用在免疫生化的Elisa 和免疫雜交工作中,BSA 能做非專一性吸附雜質(zhì)的抑制劑,BSA 產(chǎn)品能聯(lián)結抗體抗原、受體蛋白,做親和吸附劑中的手臂(arm) [1]。因為蛋白質(zhì)是兩性高分子電解質(zhì)，主要由疏水性各不相同的20種氨基酸組成。因此，蛋白質(zhì)表面由不均勻分布的荷電基團形成的荷電區(qū)、親水區(qū)和疏水區(qū)構成[2]。大多數(shù)蛋白質(zhì)是生物活性物質(zhì)，溶液的pH值、離子強度的變化都可能使其變性失活，特別是被用作醫(yī)藥、結構研究的蛋白質(zhì)，不僅要有一定的純度，產(chǎn)品的活性保持也很重要。沉淀(precipitation)是物理環(huán)境的變化引起溶質(zhì)的溶解度降低生成固體凝聚物(aggregates)的現(xiàn)象，利用沉淀原理分離蛋白質(zhì)等生物產(chǎn)物的回收、濃縮和純化。影響分離特性的因素復雜,難放大。電泳法主要分區(qū)帶電泳、等電點電泳和等速電泳等。 反膠團體系 新近發(fā)展起來的反膠團體系使在溫和條件下大規(guī)模分離生物分子成為可能。反膠團是當油相中表面活性劑的濃度超過臨界膠束濃度后，其分子在非極性溶劑中自發(fā)形成的親水基向內(nèi)、疏水基向外的具有極性內(nèi)核(polar core)的多分子聚集體[4]。反膠團的表面活性劑分子層能夠避免蛋白質(zhì)分子與有機溶劑接觸，從而保持蛋白質(zhì)的活性。離子型雙親物質(zhì)在非極性溶劑中不能電離，只能以離子對形式存在，形成反膠團的基本推動力來源于表面活性劑分子的疏水尾之間的疏水相互作用以及親水頭基間的靜電和氫鍵等作用力。 陽離子型反膠團內(nèi)壁帶正電荷，蛋白質(zhì)進入反膠團發(fā)生在水相PH低于蛋白質(zhì)的PI時[2],這是一種協(xié)同過程,即在宏觀兩相(有機相和水相)界面間的表面活性層,同鄰近的蛋白質(zhì)發(fā)生靜電作用而變形,接著在兩相界面形成了包含有蛋白質(zhì)的反膠束,此反膠束擴散進入有機相中,，根據(jù)熱力學基本理論，蛋白質(zhì)從水相萃人反膠團相中，達到平衡狀態(tài)時系統(tǒng)的Gibbs自由能變化應為最小[4]。表面活性劑是反膠團萃取的一個關鍵因素，不同結構的表面活性劑形成的反膠團含水量和性能有很大差別。大致分兩類:一類是脂肪胺本身,由于在使用過程中能吸收氫質(zhì)子而生成胺鹽；另一類是季銨鹽,分子中帶正電