【正文】 數(shù)。一般情況下，在較低的表面活性劑的濃度時(shí)，反膠團(tuán)的形狀是封閉的球形或橢圓形。由于形成反膠團(tuán)的作用力較弱，反膠團(tuán)的大小容易變化[5]。 陽(yáng)離子型反膠團(tuán)內(nèi)壁帶正電荷，蛋白質(zhì)進(jìn)入反膠團(tuán)發(fā)生在水相PH低于蛋白質(zhì)的PI時(shí)[2],這是一種協(xié)同過程,即在宏觀兩相(有機(jī)相和水相)界面間的表面活性層,同鄰近的蛋白質(zhì)發(fā)生靜電作用而變形,接著在兩相界面形成了包含有蛋白質(zhì)的反膠束,此反膠束擴(kuò)散進(jìn)入有機(jī)相中,，根據(jù)熱力學(xué)基本理論，蛋白質(zhì)從水相萃人反膠團(tuán)相中，達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)系統(tǒng)的Gibbs自由能變化應(yīng)為最小[4]。反膠團(tuán)萃取蛋白質(zhì)的動(dòng)力學(xué)：萃取過程中，蛋白質(zhì)在互不相溶的兩相間的傳遞分三步：蛋白質(zhì)從水溶液主體擴(kuò)散到界面；在界面形成包容蛋白質(zhì)的反膠束；含有蛋白質(zhì)的反膠束在有機(jī)相中擴(kuò)散離開界面[7]。 表面活性劑 表面張力是指作用于液體表面單位長(zhǎng)度上使表面收縮的力(mN/m)，它是液體的內(nèi)在性質(zhì)，其大小主要取決于液體自身和與其接觸的另一相物質(zhì)的種類，從廣義上講，能使體系表面張力下降的溶質(zhì)均可稱為表面活性劑，但習(xí)慣上只將降低表面張力作用較大的一類化合物稱為表面活性劑。CTAB是季銨鹽型陽(yáng)離子表面活性劑，在堿性介質(zhì)中不受影響[8]。表面活性劑是反膠團(tuán)萃取的一個(gè)關(guān)鍵因素，不同結(jié)構(gòu)的表面活性劑形成的反膠團(tuán)含水量和性能有很大差別。通常希望所選表面活性劑形成極性核較大的反膠團(tuán)，且反膠團(tuán)與蛋白質(zhì)的作用不應(yīng)太強(qiáng)，以減少蛋白質(zhì)的失活。表面活性劑的特點(diǎn)：雙親媒性結(jié)構(gòu)；至少溶于某一相；界面吸附；界面定向；形成膠束；多功能性(潤(rùn)濕、乳化和分散)。工業(yè)上所用的陽(yáng)離子表面活性劑都是有機(jī)氮化合物的衍生物。大致分兩類:一類是脂肪胺本身,由于在使用過程中能吸收氫質(zhì)子而生成胺鹽；另一類是季銨鹽,分子中帶正電荷。陽(yáng)離子表面活性劑很少用于清洗，然而它卻具有一些獨(dú)特的性能和作用。因?yàn)楹芏嗷|(zhì)的表面帶負(fù)電荷，如果用陽(yáng)離子表面活性劑去清洗，反而會(huì)被基質(zhì)的表面負(fù)電荷吸附而起不到清洗作用，但是這種特性可用于抗靜電，這主要是由于電性中和的作用。另外，在一定時(shí)間內(nèi)可依靠離子的電性作用吸附于基質(zhì)的表面，而把它的疏水端伸向外部，依靠這種作用產(chǎn)生的特殊用途之一就是用作織物的柔軟劑，此外，脂肪胺及季銨鹽可定向在細(xì)菌半滲透膜與水或空氣的界面上，緊密排列的界面分子阻礙了有機(jī)體的呼吸或切斷了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的來源而致使它死亡，所以陽(yáng)離子表面活性劑也可用于防霉和殺菌[9]。表面活性劑是膠體和界面化學(xué)中一類重要的有機(jī)化合物,這類化合物由非極性的“尾鏈”和極性的“頭基”兩個(gè)部分組成。非極性部分是直鏈或支鏈的碳?xì)浠蛱挤?，它們與水的親和力極弱，與油有較強(qiáng)的親和力，因此稱為憎水基或親油基(hydrophobic或lipophilic group)。極性頭基為正、負(fù)離子或極性的非離子，它們通過離子偶極或偶極偶極作用與水分子強(qiáng)烈相互作用并且是水化的，因此稱為親水基或頭基(hydrophilic group 或head group)。根據(jù)其親水基的差異，表面活性劑可分為陽(yáng)離子表面活性劑、陰離子表面活性劑和非離子表面活性劑。由于雙親性質(zhì)，表面活性劑趨向于富集在水/空氣界面或油/水界面從而降低水的表面張力和油/水界面張力，因而具有“表面活性”(surface activity).表面活性劑又稱為雙親物質(zhì)(amphiphile)、膠體電解質(zhì)等。構(gòu)成反膠團(tuán)的表面活性劑最好具有空間體積較大的疏水基團(tuán)和體積較小的親水基團(tuán)[2]。利用季銨鹽為表面活性劑的反膠團(tuán)相一般需加入油性醇，如己醇和辛醇,其作用是降低表面活性劑親水頭陽(yáng)離子間的相互排斥作用[2]，正辛醇在水中的溶解度低,[10],當(dāng)有機(jī)相與水相混合時(shí),正辛醇微溶對(duì)萃取后水相吸光度測(cè)定的影響降低。實(shí)驗(yàn)主要儀器有離心機(jī)、紫外可見分光光度計(jì)、恒溫磁力攪拌器等，離心機(jī)是生化實(shí)驗(yàn)室及生化工業(yè)廣泛使用的分離設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室用離心機(jī)以離心管式轉(zhuǎn)子離心機(jī)為主，離心操作為間歇式。離心分離是利用慣性離心力和物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的不同而進(jìn)行的一項(xiàng)分離、濃縮或提煉操作，對(duì)那些固體顆粒很小或液體黏度很大，過濾速度很慢，甚至難以過濾的懸浮液十分有效，不但用于懸浮液中液體或固體的直接回收，而且可用于連種互不混溶液體的分離，如液液萃取、和不同密度固體或乳濁液的分離[7]。這次的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)用十六烷基溴化銨(CTAB)/正辛醇：三氯甲烷(4:1 V/V)反膠團(tuán)體系對(duì)牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行萃取，通過改變萃取體系水相的PH值、離子強(qiáng)度、兩液相的體積比等因素，研究了BSA在陽(yáng)離子表面活性劑體系的萃取機(jī)理，實(shí)驗(yàn)表明：，水相與有機(jī)相體積比為2：1時(shí)，在210nm時(shí)萃取率高達(dá)95%，具有較高的應(yīng)用價(jià)值。2 實(shí)驗(yàn) 表1 實(shí)驗(yàn)主要儀器儀器名稱產(chǎn)地UV1100紫外可見分光光度計(jì)北京瑞利分析儀器公司HJ3恒溫磁力攪拌器江蘇醫(yī)療儀器廠800型電動(dòng)離心機(jī)沉淀器鹽城實(shí)驗(yàn)儀器廠TG268B型光學(xué)讀數(shù)分析天平湘儀天平儀器廠HCTP12型架盤天平天津市天馬儀器廠表2 實(shí)驗(yàn)用試劑試劑名稱產(chǎn)地十六烷基溴化銨(CTAB)分析純北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司牛血清白蛋白 (BSA,PI=)分析純上海藍(lán)季科技發(fā)展有限公司正辛醇分析純天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司三氯甲烷分析純天津市凱通化學(xué)試劑有限公司甘氨酸(氨基乙酸)生化試劑天津市大茂化學(xué)試劑廠甲酸分析純天津市凱通化學(xué)試劑有限公司無水乙酸鈉分析純北京化工廠冰乙酸分析純天津市凱通化學(xué)試劑有限公司氯化銨分析純天津市巨星圣源化學(xué)試劑有限公司濃氨水分析純唐山市路北區(qū)化工廠濃鹽酸分析純唐山市路北區(qū)化工廠氫氧化鈉分析純天津市北方化玻購(gòu)銷中心溴化鉀分析純天津市化學(xué)試劑三廠氯化鈉分析純天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠蒸餾水自制表3 緩沖溶液的配制方法[1112]緩沖溶液PH值緩沖溶液的名稱配制方法氨基乙酸鹽酸取15g溶于50ml水，加濃鹽酸8ml，稀至100ml甲酸氫氧化鈉，溶解后，稀至100ml醋酸醋酸鈉,加冰醋酸6ml,稀釋至100ml氯化銨氨水取氯化銨10g溶于適量水中，稀至100ml氯化銨氨水，加濃氨水35ml，稀至100ml；氫氧化鈉蒸餾水自制反膠團(tuán)體系的配制：：三氯甲烷(4:1 V/V)溶液中,。 水相的確定 ，用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，取一定體積的試樣和空白樣，空白樣用不含BSA的緩沖溶液，PH=，每隔1nm測(cè)一組吸光度值，找到最大吸收波長(zhǎng)λmax及其吸光度A。 萃取方法將一定體積的反膠團(tuán)溶液與一定體積的濃度、PH值及離子強(qiáng)度都確定的BSA溶液混合，經(jīng)恒溫磁力攪拌器攪拌3min后，在離心機(jī)上離心30min。用分液漏斗分出其下層水相并測(cè)定其吸光度A，用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法測(cè)出濃度c1并計(jì)算萃取率R%。標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法要求每一個(gè)比色管均做一個(gè)空白管，一個(gè)已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，一個(gè)樣品，空白管是不加入BSA的緩沖溶液，樣品是萃取后的水相。萃取工藝如下圖：↓↓加入4ml反膠團(tuán)體系溶液↓恒溫磁力攪拌器攪拌3min↓倒入離心管中10ml，離心30min↓