微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量-全文預(yù)覽
【正文】 約10min后，在冷凝管末端小玻璃管的位置放上一個(gè)盛硼酸指示劑混合液的錐形瓶，將瓶?jī)A斜，以保證冷凝管末端連接的小玻璃管完全浸于液體內(nèi)。消化完成后，將消化液轉(zhuǎn)入凱氏定氮儀反應(yīng)室，加入過(guò)量的濃氫氧化鈉，將NH4+轉(zhuǎn)變成NH3，通過(guò)蒸餾把NH3驅(qū)入過(guò)量的硼酸溶液接收瓶?jī)?nèi)，硼酸接收氨后，形成四硼酸銨，然后用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，直到硼酸溶液恢復(fù)原來(lái)的氫離子濃度。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定，可由物質(zhì)含氮量計(jì)算其蛋白質(zhì)含量，故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。該方法在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無(wú)機(jī)銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨，隨水蒸氣餾出并為過(guò)量的酸液吸收，再以標(biāo)準(zhǔn)堿滴定，就可計(jì)算出樣品中的氮量。凱氏定氮法首先將含氮有機(jī)物與濃硫酸共熱，經(jīng)一系列的分解、碳化和氧化還原反應(yīng)等復(fù)雜過(guò)程，最后有機(jī)氮轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)機(jī)氮硫酸銨，這一過(guò)程稱(chēng)為有機(jī)物的消化。以甘氨酸為例，其反應(yīng)式如下：NH2CH2COOH+3H2SO4 →2CO2+3SO2+4H2O+NH3 （1） 2NH3 +H2SO4 →(NH4)2SO4 （2） (NH4)2SO4+2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3 ↑ （3）三、 實(shí)驗(yàn)器材和試劑實(shí)驗(yàn)器材：凱氏定氮蒸餾裝置、50ml錐形瓶3個(gè)、酸式滴定管、酒精燈實(shí)驗(yàn)試劑
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