牛乳中抗生素殘留的檢測本科生畢業(yè)論文設(shè)計-全文預(yù)覽
【正文】 x,1957。當(dāng)前，試劑盒法是最為理想的微生物檢測方法，但產(chǎn)品的價格對中等發(fā)達國家來講相對較高。紙片法判斷較簡單，但易出現(xiàn)假陽性。 應(yīng)用場所試劑盒法適合于實際應(yīng)用現(xiàn)場測定及快速檢測,對于食品衛(wèi)生監(jiān)督部門來說是一種快速現(xiàn)場檢測抗生素殘留的有效手段，同時作為企業(yè)該方法亦可成為質(zhì)量控制的質(zhì)檢手段。在檢測時間方面，采用試劑盒法較試管檢測的TTC法和紙片法鑒定平皿要節(jié)省時間[17]。三種方法檢測結(jié)果差異顯著。紙片法測得結(jié)果：有抑菌圈的奶樣有奶樣2和13，大約15mm的抑菌圈，為陽性，有抗生素存在；奶樣8和10有大約13mm左右的小圈,為可疑對象；其他奶樣均無抑菌圈存在，為陰性說明無抗生素存在。＋/－110－120－1315177。樣品紙片如有明顯的抑菌圈，直徑14 mm，表示確診有抑菌物質(zhì)，為陽性，并結(jié)合青霉素濾片的抑菌情況來確證是否為青霉素所致(如≤14 mm則為陰性)。實驗表明試劑盒沒有問題，對照實驗成功，抗生素抑制微生物生長。綠黃色或者黃色表示抗生素不存在（陰性），藍(lán)紫色表示抗生素存在（陽性）。對照實驗成功。與此相反 ，被檢牛奶中如果沒有抗生素殘留， 加入的嗜熱鏈球菌則可以進行增殖，TTC被還原而顯紅色，呈陰性結(jié)果。翻轉(zhuǎn)平皿，于(64177。 mL于5 mL試驗中混勻并用濾片浸漬，把濾片輕輕接觸樣品容器內(nèi)壁以滴干多余牛乳，立即把各個濾片放在瓊脂表面，輕輕壓迫以很好接觸。翻轉(zhuǎn)平皿，于(64177。2)℃培養(yǎng)3～4 h，以青霉素陽性對照得到可見的抑菌圈為宜。2)℃培養(yǎng)48～72 h。（4）樣品保溫檢測：將被檢樣品加入到各個反應(yīng)管中后，全部插入到已達到64℃的恒溫器樣品孔內(nèi)，開始計時間?！妫r，取出取樣注射器、吸頭和營養(yǎng)藥片以及相應(yīng)數(shù)量的反應(yīng)管，進行編號標(biāo)記，用注射器吸頭捅破封口鋁膜，準(zhǔn)備加樣。操作順序如下圖：檢 樣80℃，加熱5min冷卻37℃以下加菌液，36℃177。（3）結(jié)果觀察 乳中有抗生素存在時，加入指示劑TTC后牛乳不顯色，即抗生素陽性；相反，如果沒有抗生素存在，則加入TTC后顯紅色，即抗生素陰性。（1）取待檢乳液9ml，置滅菌試管中，80℃水浴加熱5 min。 菌液制備將凍干保存的嗜熱性乳酸鏈球菌接種于滅菌脫脂乳培養(yǎng)基中，36177。紙片法: 青霉素標(biāo)準(zhǔn)液，準(zhǔn)確稱取青霉素G鉀標(biāo)準(zhǔn)品20mg，用磷酸鹽緩沖液溶解，制備為1 000g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置4℃冰箱中保存。如遇溶液變?yōu)榫G色或淡褐色，則不能再用。 ～ b 溶液或試劑：牛肉膏，蛋白胨，Nacl，瓊脂，1mol／L NaOH，1mol／LHCL。第二章 實驗材料和方法 實驗材料 從哈市食品商場隨即采取六個主要品牌不同品種的袋裝消毒純牛奶及其相關(guān)品牌的花色奶作為檢樣，將采集的樣品編號，送實驗室檢測，乳樣共計13份，見表21。抗生素檢測的方法、 檢測技術(shù)也隨之迅速發(fā)展，只有簡便 、快速 、準(zhǔn)確 、靈敏性高的檢測方法才能滿足日趨嚴(yán)格的檢測要求。但飲用含有抗生素殘留的牛奶可引起細(xì)菌耐藥性， 導(dǎo)致人體過敏反應(yīng)等癥狀。 基于受體分析法比利時UCB Byproducts公司開發(fā)的BetaSTAR檢測法是將特定的B內(nèi)酰胺受體蛋白固定在試紙上，用膠體金有色微粒作為標(biāo)記物，5min內(nèi)可以檢測到青霉素和頭孢菌素殘留。Snap法是美國IDEXX Laboratories Inc公司采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)原理，將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性相結(jié)合的方法，其敏感性和特異性較好。DelvotestSP則可以檢測包含B內(nèi)酰胺類抗生素在內(nèi)的更多抗生素(如磺胺類、泰樂霉素、紅霉素、鏈霉素、慶大霉素、三甲氧卞二氨嘧啶等)。 荷蘭Gistbrocades BV公司開發(fā)了DelvotestP，DelvotestSP，Delvotest Cow Test，DelvotestMCS檢測系列[14]。張素霞等報道了用 M SPDHPLCUV 分析法檢測牛奶中四環(huán)素類藥物殘留。UVD 對環(huán)境溫度，流動相組成和流速變化不敏感，能適應(yīng)等度和梯度洗脫[13]，對強紫外吸收的物質(zhì)的檢測限可以達到 1ng以下。 HPLC使用的檢測器 目前在殘留分析中使用的主要HPLC 檢測器為紫外可見（UVD）、熒光（FLD）和電化學(xué) (Echo）檢測器。但理化檢測程序復(fù)雜，且費用較昂貴。目前仍有許多關(guān)于新技術(shù)和方法的報道，如 Gaudin 發(fā)表了生物傳感器方法測定 β 內(nèi)酰胺類抗生素殘留方法。由于使用快速方便，價格更低，因此適合奶牛場的抗生素快速檢測。 DelvotestSP（ 戴爾沃檢測法） DelvotestSP 檢測法是由荷蘭 Gistbrocades BV 公司開發(fā)的。乳樣中有抗生素存在，則在向檢樣中加入菌液培養(yǎng)時細(xì)菌不增殖，此時由于加入的指示劑 TTC 不還原，所以不顯色。 常用的紙片法包括枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片法[9]，主要用于檢測牛奶中的β內(nèi)酰胺類抗生素。 牛奶中抗生素殘留檢測研究進展 微生物檢測法微生物檢測法測定原理是根據(jù)抗生素對微生物的生理代謝作用的抑制作用，來定性或定量確定樣品中抗生素的殘留[8]，如紙片法（PD法），TTC 法，拭子法（STOP）等。歐美國家多年前即已明文禁止抗生素殘留超量的牛奶上市（對青霉素類藥物的限量為 4～10μg/kg）。 某些奶牛場由于操作不規(guī)范，在尚未徹底清洗和消毒患乳房炎的奶牛使用過的擠奶工具和貯奶設(shè)備情況下，用于其它健康牛只，造成抗生素殘留問題。 其他危害 此外牛奶中抗生素殘留會影響奶制品品質(zhì)，如果用含抗生素的原料奶生產(chǎn)酸奶或奶酪等，則殘留的抗生素將會抑制細(xì)菌的發(fā)酵，降低產(chǎn)量和質(zhì)量，給生產(chǎn)者造成經(jīng)濟損失。 牛奶中抗生素殘留的危害及其產(chǎn)生的原因 產(chǎn)生過敏反應(yīng) 由于一般的抗生素對熱的穩(wěn)定性高，牛奶加熱殺菌無法將其破壞，所以混有抗生素的牛奶加工成奶制品后仍有大量的抗生素殘留[2]，如果經(jīng)常飲用此種牛奶，將反復(fù)受到抗生素的刺激而發(fā)生致敏。（七）作用于G菌的其它抗生素，如多粘菌素、磷霉素、卷霉素、環(huán)絲氨酸、利福平等。（三）四環(huán)素類包括四環(huán)素、土霉素、金霉素及強力霉素等。其主要是從微生物的培養(yǎng)液中提取的或者用合成、半合成方法制造。因此，各個國家對牛奶的質(zhì)量與安全問題十分重視，與此同時，在檢測技術(shù)上各國都進行大量的研究。In this study, through the paring in the results of three microbiological methods, it provides a theoretical basis for the supplement to rapid detection of antibiotic survival.Key words: antibiotics。實驗結(jié)果證明：快速檢測法比TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高，國標(biāo)TTC法檢測結(jié)果不是很準(zhǔn)確；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時間特別長。黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）牛乳中抗生素殘留的檢測摘 要本實驗采用國標(biāo)TTC法，紙片法和試劑盒法三種微生物方法對哈爾濱市大型超市中不同品牌的13種牛奶進行抗生素檢測,并對三種微生物法進行比較。 detection met目 錄摘 要 iAbstract ii第1章 緒 論 1 抗生素簡介 1 1 1 牛奶中抗生素殘留的危害及其產(chǎn)生的原因 2 2 3 牛奶中抗生素殘
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