牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)本科生畢業(yè)論文設(shè)計(jì)(文件)
【正文】 內(nèi)酰胺類(lèi)和頭孢菌素類(lèi)抗生素?？股氐挠绊懯顾崮?、奶酪等一些高質(zhì)量的牛乳產(chǎn)品無(wú)法加工生產(chǎn)，造成大量的原料奶浪費(fèi)，致使企業(yè)遭受很大的經(jīng)濟(jì)損失。 抗生素的檢測(cè)方法很多， 主要可以分為微生物測(cè)定法、理化測(cè)定法和免疫學(xué)測(cè)定法[15] 等。表22 對(duì)照樣品表對(duì)照樣品編號(hào)來(lái)源脫脂乳+青霉素14脫脂乳: 東北農(nóng)大食品實(shí)驗(yàn)室提供青霉素: 天林藥業(yè)有限公司提供滅菌生理鹽水+青霉素15NaCL: 天林藥業(yè)有限公司提供青霉素: 天林藥業(yè)有限公司提供無(wú)抗脫脂乳16市售滅菌生理鹽水17市售嗜熱乳酸鏈球菌，由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品研究中心提供；枯草芽孢桿菌，由黑龍江東方學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。 蛋白胨 水（3）試劑TTC指試劑：4% 2,3,5氯化三苯基四氮唑（TTC）批號(hào)830222。其中：檢測(cè)反應(yīng)管 502營(yíng)養(yǎng)藥片 100 片取樣注射器 1支取樣吸頭 100支鑷子 1支使用說(shuō)明書(shū) 1份 試驗(yàn)方法 原料預(yù)處理 TTC法: 依據(jù)GB4789 2794方法檢測(cè)抗生素殘留。 TTC法 按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的TTC實(shí)驗(yàn)法并參考有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。再轉(zhuǎn)接2~3次，以活化菌種脫脂乳培養(yǎng)基，經(jīng)36177。1℃水浴培養(yǎng)2h后，向試管內(nèi)加4%，36177。（見(jiàn)表24）表 24 顯色狀態(tài)判斷標(biāo)準(zhǔn)（GB4789）顯色狀態(tài)判斷未顯色者陽(yáng)性微紅色者可疑桃紅色～紅色陰性（4）每份檢樣作兩份，同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照各一份，陽(yáng)性對(duì)照用無(wú)抗生素乳8ml加1ml青霉素溶液（／ml）及菌液1ml和4%。1℃水浴30min36℃177。盡量放置于基質(zhì)中央?！娣磻?yīng)時(shí)間：~3小時(shí)判讀結(jié)果：含有被檢樣品的反應(yīng)管固體基質(zhì)顏色由紫色變?yōu)辄S色者，證明無(wú)抗生素殘留——抗生素檢驗(yàn)陰性（—）；反應(yīng)管固體基質(zhì)顏色未變?nèi)詾樽仙撸C明有抗生素殘留——抗生素檢驗(yàn)陽(yáng)性（+）。如此反復(fù)洗滌，最后把洗滌過(guò)的芽孢懸浮于30 mL滅菌生理鹽水中，并于4℃保存，檢測(cè)前測(cè)定芽孢活力。(3)鑒別試驗(yàn)(過(guò)篩試驗(yàn)) 用清潔、干燥的無(wú)菌鑷子把紙片輕輕接觸到已充分混合的牛乳表面，紙片通過(guò)毛細(xì)管作用吸附牛乳，把紙片稍稍接觸樣品容器內(nèi)壁讓多余的牛乳滴干，立刻把紙片安放在瓊脂表面，輕輕壓迫以很好接觸。樣品紙片如有明顯的抑菌圈，直徑14 mm，表示確診有抑菌物質(zhì)，為陽(yáng)性，并結(jié)合青霉素酶濾片的抑菌情況來(lái)確證是否為青霉素所致(如≤14 mm則為陰性)。每個(gè)平皿放4個(gè)濾片，相互間隔90176。在使用紙片法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，每個(gè)濃度作4個(gè)平皿，重復(fù)3次。國(guó)標(biāo)TTC檢測(cè)法檢測(cè)結(jié)果：未顯顏色的奶樣有奶樣4，為陽(yáng)性，有抗生素存在；顯微粉色的奶樣有奶樣12，為可疑對(duì)象，可能有抗生素殘留顯桃紅色的奶樣有奶樣113，為陰性，無(wú)抗生素殘留。對(duì)照實(shí)驗(yàn)成功?？焖贆z測(cè)法測(cè)得的結(jié)果：顯紫色的奶樣有奶樣113，為陽(yáng)性，有抗生素存在；顯淡紫色奶樣有奶樣8，為可疑奶樣，可能含有抗生素殘留；顯黃色的奶樣有奶樣12，為陰性，無(wú)抗生素殘留。翻轉(zhuǎn)平皿，于(64177。－30－40－50－60－花色奶70－813177。＋1515177。 結(jié)果統(tǒng)計(jì) 以上結(jié)果可以總結(jié)為下表:表 34 結(jié)果統(tǒng)計(jì)表方法陽(yáng)性份數(shù)/份陰性份數(shù)/份可疑/份合計(jì)/份陽(yáng)性率/%TTC法18413試劑盒法84113紙片法29213合計(jì)1121739由上表可以看出，被檢13份樣品經(jīng)國(guó)標(biāo)TTC法檢測(cè)出1份陽(yáng)性樣品。而國(guó)標(biāo)TTC法需3~ h的檢測(cè)時(shí)間；。TTC法的檢測(cè)限值較高，無(wú)法適應(yīng)現(xiàn)階段乳制品抗生素的測(cè)定需要，且在實(shí)驗(yàn)中不斷的接種翻代使細(xì)菌抗藥性增加，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。TTC法及紙片法在我國(guó)應(yīng)用較多，活性試驗(yàn)在小規(guī)模工廠經(jīng)常使用。同時(shí)提高了檢測(cè)的廣度(既廣普性)、準(zhǔn)確度和精確度。結(jié) 論本實(shí)驗(yàn)采用三種微生物法檢測(cè)牛奶中抗生素的結(jié)果如下：1. TTC法檢測(cè)陽(yáng)性率為：%2. 紙片法檢測(cè)陽(yáng)性率為：%3. 試劑盒法檢測(cè)陽(yáng)性率為：%快速檢測(cè)法比TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高，國(guó)標(biāo)TTC法檢測(cè)結(jié)果判斷不方便；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時(shí)間特別長(zhǎng)。[J].中國(guó)乳品工業(yè)2003，31(4):37 40. [16] 黃怡君,姜也文,胡松華,等. TTC法檢測(cè)牛奶中的抗菌藥物[J].中國(guó)乳業(yè),2005,31(5):57 59.[17] 陳福生，高志賢，王建華．食品安全檢測(cè)與現(xiàn)代生物技術(shù)［Ｍ］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004:7579．[18] INETAK, BEANDETTH. Interactions of antimicrobials in milk and their detection by the disk diffusion method and DelovtestSP [J].Journal of AOAC international, 2003, 86(3).526533.致 謝在這短暫的實(shí)驗(yàn)期間，我學(xué)到了很多東西：老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度，一絲不茍的科研精神，淵博的知識(shí)，這一切將在我未來(lái)的人生和科學(xué)道路上產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。感謝所有給以我支持和幫助的朋友、同學(xué)們!最后，感謝在百忙之中審閱本文的專(zhuān)家、老師們!謝謝大家! 24 黑龍江東方學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）。錢(qián)鐳老師的悉心教誨，使我在學(xué)術(shù)專(zhuān)業(yè)方面有了一定的提高，更為重要的是，老師在治學(xué)為人上的那份耐心執(zhí)著和熱誠(chéng)，也深深地影響著我，并將鼓勵(lì)我在未來(lái)的路上不斷地探索、前進(jìn)!在試驗(yàn)的設(shè)計(jì)，實(shí)施和論文撰寫(xiě)過(guò)程中錢(qián)鐳老師給予了極大的幫助和指導(dǎo)。參考文獻(xiàn)[1] [J].中國(guó)奶牛,2001(6):47,48.[2] [J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,1997,15(3):232234.[3] 劉健華,陳杖榴．動(dòng)物性食品中抗菌藥殘留對(duì)人體腸道菌群的影響及其研究模型與方法 [Ｊ].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2003,24(2)3739.[4] [J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,1999,25(5):52,53[5] 陳懷宇,黃周英,[J].泉州師范學(xué)院學(xué)報(bào),2004，22(6):102 106.[6] [J].中國(guó)食品衛(wèi)生,1999,14(3)：30 32.[7] [J].中國(guó)禽業(yè)導(dǎo)刊,1999,16(2):4,5.[8] [J].中國(guó)獸藥雜志,2000,34(4):57~59.[9] 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)．食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)鮮乳中抗生素殘留量檢驗(yàn)．GB/[S]．[10] 孟昭赫．食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法注釋?zhuān)?微生物學(xué)部分）［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社,1996:873849.[11] 吳國(guó)娟．市售消毒純牛奶中抗菌藥物殘留的檢測(cè)［Ｊ］．北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002,17(2):33_37.[12] LINDEMANN G ZUNDEL Test with Triphenyletrazolium Chloride (TTC) as a Method for Bacteriologic Testing of Human Milk[J].Kinderarzu Pra
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