牛乳中抗生素殘留的檢測本科生畢業(yè)論文設(shè)計-免費閱讀
【正文】 在此，向給予我不倦教誨和關(guān)懷的錢鐳老師表示忠心的感謝。傳統(tǒng)微生物檢測法經(jīng)濟(jì)簡便，但國標(biāo)TTC法檢測限低于歐盟法典規(guī)定的MRL殘留濃度，經(jīng)國標(biāo)法檢測合格的奶樣，抗生素含量仍舊超標(biāo)，對食品加工及消費者食用安全有很大潛在的危害，所以在實際檢測過程中，可以選用特異性、靈敏度與檢測限達(dá)到MRL規(guī)定的紙片法作為國標(biāo)TTC法的補(bǔ)充[18]。紙片法易出現(xiàn)假陽性，微生物的量及操作不規(guī)范等因素會引起結(jié)果的不準(zhǔn)確性。%；紙片法檢測可檢出2份，%；快速試劑盒法檢測可檢出8份，%。＋/－90－1013177。樣品115為對照實驗，均顯紫色，為陽性，青霉素抑制微生物生長；樣品117為對照實驗，均顯黃色，為陰性，說明無抗生素。陽性對照試驗115結(jié)果未顯色，為陽性，說明有抗生素殘留。角，記住不同性質(zhì)濾片的安放位置。各作2個濾片，標(biāo)記不同的濾片位置。 紙片法(1)枯草芽孢桿菌芽孢懸液的制備從新制備的斜面培養(yǎng)基上挑取一滿環(huán)試驗菌，接種到盛有150 mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的三角瓶中，于(64177。1℃水浴30min不顯色紅色 色 顯色者抗生素陰性報 告報 告抗生素陰性不顯色者 抗生素陽性圖21 TTC法操作順序(1)準(zhǔn)備工作：確定被檢樣品和數(shù)量后，開啟恒溫器電源加熱升溫，待恒溫器溫度上升至64℃（177。1℃水浴中培養(yǎng)30min后取出，觀察結(jié)果。 滅菌脫脂乳培養(yǎng)基制備，置4℃冰箱過夜，然后棄去上層乳脂，將脫脂乳分裝大試管，10磅20min滅菌備用。TTC水溶液：稱取1gTTC，溶于5ml滅菌蒸餾水中，裝入褐色瓶內(nèi)與7℃冰箱保存，臨用時用滅菌蒸餾水以1:5稀釋。本實驗通過國標(biāo)TTC法和試劑盒法、紙片法檢測結(jié)果的比較為抗生素殘留快速檢測方法的補(bǔ)充提供理論依據(jù)。 本實驗研究的目的與意義牛奶是營養(yǎng)最全面的營養(yǎng)品 。Delvotest MCS是DelvotestSP的微孔板格式，但營養(yǎng)試劑已直接加入瓊脂內(nèi)，使用時無需再添加營養(yǎng)藥片，操作更方便，但保質(zhì)期短，適合于大型檢測中心使用。目前GCM S 應(yīng)用較多，而 LCM S 是除 GCM S 之外，又一種集高效分離和多組分定性、定量于一體的系統(tǒng)。其靈敏度高，選擇性較好，能滿足殘留分析的一般要求。理化檢測法具有靈敏度高，可進(jìn)行準(zhǔn)確定性分析（ 給出被測組分的結(jié)構(gòu)信息）和定量分析能力的優(yōu)點，Takeba等人已經(jīng)成功地使用 HPLC 同時檢測出牛奶中三氯苯達(dá)唑及其代謝產(chǎn)物亞砜和砜；Pollmeier更是在十億分之的水平上檢測出牛奶中的阿維菌素類似物乙酰氨基阿維菌素。 DelvotestP 和DelvoXPress兩種檢測方法得出以下結(jié)論：DelvoXPress能準(zhǔn)確測定原料奶中的 β 內(nèi)酰胺類抗生素，可應(yīng)用于農(nóng)場外散裝原料奶的檢測[11]。此方法為向檢樣中加入嗜熱乳酸鏈球菌和 TTC 試劑，通過觀察顯色狀態(tài)的變化判定檢樣中有無抗生素存在。可見國內(nèi)市場中牛奶抗生素超標(biāo)現(xiàn)象十分嚴(yán)重，應(yīng)引起社會重視[7]。 在飼料中添加抗生素，可有效抑制或殺滅畜體內(nèi)的有害微生物，維持畜體胃腸道微生物的平衡，從而促進(jìn)動物的健康，提高其生產(chǎn)性能但是，奶牛如果長期食用含抗生素的飼料，很容易造成牛奶中抗生素殘留，這也是造成牛奶中抗生素殘留問題的一個重要原因。（十）具有免疫抑制作用的抗生素如環(huán)孢霉素。（二）氨基糖甙類包括鏈霉素、慶大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小諾霉素、阿斯霉素等。 抗生素簡介 由微生物或高等動植物在生活過程中所產(chǎn)生的具有抗病原體或其它活性的一類代謝物，以及甚至用化學(xué)方法合成或半合成的化合物。 實驗結(jié)果證明：快速檢測法比TTC法和微生物紙片法的靈敏度要高，國標(biāo)TTC法檢測結(jié)果不是很準(zhǔn)確；紙片法雖然較準(zhǔn)確但前序工作所耗時間特別長。因此，各個國家對牛奶的質(zhì)量與安全問題十分重視，與此同時，在檢測技術(shù)上各國都進(jìn)行大量的研究。其主要是從微生物的培養(yǎng)液中提取的或者用合成、半合成方法制造。（七）作用于G菌的其它抗生素，如多粘菌素、磷霉素、卷霉素、環(huán)絲氨酸、利福平等。 其他危害 此外牛奶中抗生素殘留會影響奶制品品質(zhì)，如果用含抗生素的原料奶生產(chǎn)酸奶或奶酪等，則殘留的抗生素將會抑制細(xì)菌的發(fā)酵，降低產(chǎn)量和質(zhì)量，給生產(chǎn)者造成經(jīng)濟(jì)損失。歐美國家多年前即已明文禁止抗生素殘留超量的牛奶上市（對青霉素類藥物的限量為 4～10μg/kg）。 常用的紙片法包括枯草桿菌紙片法和嗜熱脂肪桿菌紙片法[9]，主要用于檢測牛奶中的β內(nèi)酰胺類抗生素。 DelvotestSP（ 戴爾沃檢測法） DelvotestSP 檢測法是由荷蘭 Gistbrocades BV 公司開發(fā)的。目前仍有許多關(guān)于新技術(shù)和方法的報道，如 Gaudin 發(fā)表了生物傳感器方法測定 β 內(nèi)酰胺類抗生素殘留方法。 HPLC使用的檢測器 目前在殘留分析中使用的主要HPLC 檢測器為紫外可見（UVD）、熒光（FLD）和電化學(xué) (Echo）檢測器。張素霞等報道了用 M SPDHPLCUV 分析法檢測牛奶中四環(huán)素類藥物殘留。DelvotestSP則可以檢測包含B內(nèi)酰胺類抗生素在內(nèi)的更多抗生素(如磺胺類、泰樂霉素、紅霉素、鏈霉素、慶大霉素、三甲氧卞二氨嘧啶等)。 基于受體分析法比利時UCB Byproducts公司開發(fā)的BetaSTAR檢測法是將特定的B內(nèi)酰胺受體蛋白固定在試紙上，用膠體金有色微粒作為標(biāo)記物，5min內(nèi)可以檢測到青霉素和頭孢菌素殘留?？股貦z測的方法、 檢測技術(shù)也隨之迅速發(fā)展，只有簡便 、快速 、準(zhǔn)確 、靈敏性高的檢測方法才能滿足日趨嚴(yán)格的檢測要求。 ～ b 溶液或試劑：牛肉膏，蛋白胨，Nacl，瓊脂，1mol／L NaOH，1mol／LHCL。紙片法: 青霉素標(biāo)準(zhǔn)液，準(zhǔn)確稱取青霉素G鉀標(biāo)準(zhǔn)品20mg，用磷酸鹽緩沖液溶解，制備為1 000g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，置4℃冰箱中保存。（1）取待檢乳液9ml，置滅菌試管中，80℃水浴加熱5 min。操作順序如下圖：檢 樣80℃，加熱5min冷卻37℃以下加菌液，36℃177。（4）樣品保溫檢測：將被檢樣品加入到各個反應(yīng)管中后，全部插入到已達(dá)到64℃的恒溫器樣品孔內(nèi)，開始計時間。2)℃培養(yǎng)3～4 h，以青霉素陽性對照得到可見的抑菌圈為宜。 mL于5 mL試驗中混勻并用濾片浸漬，把濾片輕輕接觸樣品容器內(nèi)壁以滴干多余牛乳，立即把各個濾片放在瓊脂表面，輕輕壓迫以很好接觸。與此相反 ，被檢牛奶中如果沒有抗生素殘留， 加入的嗜熱鏈球菌則可以進(jìn)行增殖，TTC被還原而顯紅色，呈陰性結(jié)果。綠黃色或者黃色表示抗生素不存在（陰性），藍(lán)紫色表示抗生素存在（陽性）。樣品紙片如有明顯的抑菌圈，直徑14 mm，表示確診有抑菌物質(zhì)，為陽性，并結(jié)合青霉素濾片的抑菌情況來確證是否為青霉素所致(如≤14 mm則為陰性)。紙片法測得結(jié)果：有抑菌圈的奶樣有奶樣2和13，大約15mm的抑菌圈，為陽性，有抗生素存在；奶樣8和10有大約13mm左右的小圈,為可疑對象；其他奶樣均無抑菌圈存在，為陰性說明無抗生素存在。在檢測時間方面，采用試劑盒法較試管檢測的TTC法和紙片法鑒定平皿要節(jié)省時間[17]。紙片法判斷較簡單，但易出現(xiàn)假陽性。參考文獻(xiàn)[1] [J].中國奶牛,2001(6):47,48.[2] [J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,1997,15(3):232234.[3] 劉健華,陳杖榴．動物性食品中抗菌藥殘留對人體腸道菌群的影響及其研究模型與方法 [Ｊ].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2003,24(2)
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