質(zhì)粒dna的提取、酶切及檢測(cè)-全文預(yù)覽
【正文】 ? 理解限制性內(nèi)切酶是 DNA重組技術(shù)的關(guān)鍵工具 ? 掌握酶切的基本操作 實(shí)驗(yàn)原理 ? 制性內(nèi)切酶將質(zhì)粒和外源基因用限制性內(nèi)切酶酶切，再經(jīng)過(guò) DNA連接酶連接，便可獲得攜帶外源基因的重組質(zhì)粒，重組質(zhì)?？梢赞D(zhuǎn)移到另一個(gè)生物細(xì)胞中去，進(jìn)而復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)外源基因產(chǎn)物。鉀鈉離子置換所產(chǎn)生的大量沉淀自然就將絕大部分蛋白質(zhì)沉淀了，大腸桿菌的基因組 DNA也一起被共沉淀。EDTA是 Ca2+和 Mg2+等二價(jià)金屬離子的螯合劑，配在分子生物學(xué) 試劑 中的主要作用是：抑制 DNase的活性， 溶液 II， N NaOH / 1% SDS； ? NaOH是最佳的溶解細(xì)胞的 試劑 ，這是由于細(xì)胞膜發(fā)生了從雙層膜結(jié)構(gòu)向微囊結(jié)構(gòu)的相變化所導(dǎo)致。 ? 此時(shí)，細(xì)菌染色體 DNA纏繞附著在細(xì)胞膜碎片上，離心時(shí)易被沉淀出來(lái)。 質(zhì)粒 DNA的提取、酶切及檢測(cè) 相關(guān)知識(shí) ? 基因工程又稱 DNA重組技術(shù) 外源基因通過(guò)體外重組后，導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)，使這個(gè)基因能夠在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達(dá)的操作 ? 包括基因的分離 、 重組 、 轉(zhuǎn)移 、 基因在受體細(xì)胞內(nèi)的保持 、 轉(zhuǎn)錄 、 翻譯表達(dá)等全過(guò)程 ? 基因工程四要素：目的基因 、 工具酶 、 載體 、受體細(xì)胞 常用到的工具酶 ? 限制性內(nèi)切酶 ? 連接酶 ? 聚合酶 逆轉(zhuǎn)錄酶 ? DNA酶和 RNA酶 結(jié)構(gòu)的三大要素： ? 多克隆位點(diǎn) ? 選擇標(biāo)記（耐藥性） ? 獨(dú)立的復(fù)制單位 種類： ? 質(zhì)粒 ? 噬菌體 ? 酵母人工染色體（ YAC） 載 體 質(zhì) 粒 （ plasmid） ? 是染色體外小型（ 1200kb） 的 共價(jià)、閉合、環(huán)狀的雙鏈 DNA分子（ cccDNA）， 能自主復(fù)制并能穩(wěn)定遺傳的遺傳因子。 二、實(shí)驗(yàn)原理 ? 在 EDTA存在的條件下，經(jīng)過(guò) NaOH和陰離子去污劑 SDS處理，使細(xì)胞膜崩解，從而達(dá)到菌體充分的裂解。 三、主要試劑 溶液 I， 50 mM葡萄糖 / 25 mM TrisCl / 10 mM EDTA， pH ； TrisCl控制溶液的 pH，葡萄糖使懸浮后的大腸桿菌不會(huì)快速沉積到管子的底部。
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