實(shí)驗(yàn)三血清γ-球蛋白的分離、純化及鑒定七年制-全文預(yù)覽
【正文】 純化 γ 球蛋白 四 、 醋酸纖維素薄膜電泳法鑒定 γ 球蛋白的純度 【 基本原理 】 蛋白質(zhì)的分離、純化及鑒定 是研究蛋白質(zhì)化學(xué)性質(zhì)及生物學(xué)功能的重要手段之一。 分離蛋白質(zhì)的方法 分離方法 沉淀法 鹽析法 有機(jī)溶劑沉淀法 層析法 電學(xué)法 電泳法 等電聚焦 超速離心法 離子交換層析 吸附層析 凝膠過(guò)濾（分子篩） 親和層析 在分離純化時(shí)，根據(jù)情況選用幾種方法，相互配合才能達(dá)到分離純化一種蛋白質(zhì)的目的。 本實(shí)驗(yàn)在 半飽和硫酸銨 溶液中 ， 清蛋白溶解 ， 球蛋白將沉淀 析出 ， 經(jīng)離心所得的沉淀即為球蛋白的粗提液 。 鹽析法 鹽析步驟 取離心管一支加入血清 2ml 加入 2ml %氯化鈉搖勻 邊攪拌混勻邊緩慢滴加飽和 (NH4)2SO4 4ml 上清液（主要含清蛋白）傾去 靜置 10min，再離心（ 5000轉(zhuǎn) /分） 10min 沉淀用 1ml %氯化鈉攪拌溶解 逐滴加飽和 (NH4)2SO4 2ml,搖勻 靜置 10min，再離心（ 5000轉(zhuǎn) /分） 10min 傾棄上清液（主要含α 、 β 球蛋白） 沉淀即為初步純化的 γ －球蛋白 加入 （ pH=)1ml溶解 γ －球蛋白 粗提液 二、葡聚糖凝膠柱層析脫鹽 欲去除鹽析法分離得到的球蛋白粗提液中大量鹽，通常有兩種方法： 凝膠層析法、透析 本試驗(yàn)采用 葡聚糖凝膠 —— Sephadex G 25層析 方法除去球蛋白粗提液中的鹽 硫酸銨 ，以便下一步用離子交換層析方法進(jìn)一步提純球蛋白。 凝膠層析法脫鹽 凝膠柱層析脫鹽 數(shù)學(xué)模型 Vo Vi Vt Vi— 凝膠孔內(nèi)水（內(nèi)水） Vo— 顆粒間水（外水） Vg— 凝膠體積 總體積 Vt= Vi +Vo+Vg Kd — 分配系數(shù)：精確衡量混合物中某一待分離成分在凝膠柱內(nèi)的洗脫行為，反映物質(zhì)分子進(jìn)入凝膠顆粒的程度，是溶質(zhì)分子大小的一個(gè)函數(shù) Ve— 洗脫體積：分離物被洗脫時(shí)所用的洗脫液體積 Kd=(VeVo)/Vi
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