實驗三血清γ-球蛋白的分離、純化及鑒定七年制-預覽頁
【正文】 洗脫曲線：以洗脫體積為橫坐標，各物質(zhì)濃度 /吸光度為縱坐標作圖 （ 1）完全被排阻的極端大分子， Ve=Vo， Kd=0 （ 2）中等分子， Ve=Vo+Kd 上留 12mm的水，關(guān)閉出口。 洗脫： 加入洗脫液，打開出口，保持流速 10滴 /min，收 集洗脫液，每管收集 1ml。 ? 不用滴管 ,避免污染 ,直接倒 … ? 用 “ ”表示無現(xiàn)象，用 “ +”, “++”, “+++”等表示顏色深淺 ⑥ 回收凝膠 注意事項： 1 . 凝膠柱的制備質(zhì)量決定分離效果的好壞 。離子交換劑是通過化學反應(yīng)將帶電基團引入到惰性支持物上形成的固體物質(zhì)，在實驗中作為固定相。 DEAE－纖維素離子交換層析純化 γ －球蛋白 血清 α、 β、 γ－球蛋白 、 清蛋白的等電點為： 清蛋白 pI=， α2球蛋白 pI=， β球蛋白 pI=， γ球蛋白 pI= 本實驗采用 mol/l NH4Ac緩沖液進行洗脫 。 １ .使用離心機的操作注意事項。 ５ .加樣時動作緩慢輕柔，不要破壞柱床面的平整。 五、 γ －球蛋白鑒定 用 醋酸纖維素薄膜電泳 的方法，以血清電泳圖譜為對照，鑒定所分離的蛋白質(zhì)種類和純度（參見血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳）。 ? ? 血清蛋白質(zhì)乙酸纖維素薄膜電泳 ? ? ? ? 清蛋白 ?1 ?2 ? ? 加樣線 加樣線 純化蛋白 對照 樣品 醋酸纖維素薄膜電泳鑒定 點樣 ： 全血清：點樣一次 脫鹽后的粗蛋白溶液：點樣 3～ 5次 濃縮后的純 γ －球蛋白溶液：點樣 3～ 5次 醋酸纖維素薄膜電泳 電泳條件 ： 電壓： 90－ 110 V； 時間： 50分鐘。區(qū)分電泳箱正負極 。 通電： 110伏， 1小時。 快 + 鉛筆標記 ，垂直點樣 保持膜不下垂 半干燥態(tài) ? 按泳動快慢順序分為 ： 清蛋白、 α α β 、 γ —球蛋白 。
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