基因工程重組蛋白的分離純化放映-全文預(yù)覽
【正文】 具有選擇性高、萃取過(guò)程簡(jiǎn)單，正萃、反萃同時(shí)進(jìn)行，能有效防止大分子失活、變性 普通離子型表面活性劑可能對(duì)產(chǎn)品產(chǎn)生污染 。 而乙醇、丁醇和丙酮等有機(jī)溶劑具有一定的親水性和較強(qiáng)的親脂性，主要用于一些脂質(zhì)結(jié)合較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶 乙醇提取法溶解性能較好、溶出的水溶性雜質(zhì)少、可回收反復(fù)利用。 缺點(diǎn)：該法上樣量有限 優(yōu)點(diǎn)：條件溫和、簡(jiǎn)便、分離范圍廣、回收率高 ,對(duì)生化物質(zhì)的分離十分適宜 特點(diǎn)：常用在純化的最后一步，與其他分離方法 ( 如離子交換 ) 組合使用 超濾 原理：利用加壓膜分離技術(shù)，在一定的壓力下，使小分子溶質(zhì)和溶劑穿過(guò)一定孔徑的特制薄膜，大分子溶質(zhì)滯留，從而使大分子物質(zhì)得到部分的純化 超濾膜缺乏選擇性以及在超濾過(guò)程中易產(chǎn)生濃差極化與膜污染 超濾技術(shù)作為一種典型的膜分離技術(shù)，則具有高效率、低能耗、無(wú)相變、無(wú)需添加任何化學(xué)試劑、操作簡(jiǎn)便、條件溫和等諸多優(yōu)點(diǎn) 特點(diǎn)：在超濾過(guò)程中，所用超濾膜的孔徑約為 1 ～ 100 nm，截留相對(duì)分子質(zhì)量 ( 為 3105～ 1106，能用于蛋白質(zhì)、細(xì)菌、膠體、病毒、熱原、多糖等的分離 透析是利用小分子經(jīng)過(guò)半透膜擴(kuò)散到水 ( 或緩沖液 ) 的原理，將無(wú)機(jī)鹽等小分子與生物大分子分開(kāi)的一種分離純化技術(shù)，常和鹽析、鹽溶等方法聯(lián)合使用 必須利用不同型號(hào)透析袋，通用性不好 透析結(jié)果表明，大的蛋白質(zhì)分子和小的氨基酸分子得到初步分離。 該方法具有使蛋白質(zhì)變性 、 僅適合部分蛋白質(zhì)等缺點(diǎn) 疏水作用層析多用于大分子蛋白質(zhì)的分離純化 其他方法 反相高效液相色譜法 一種以疏水作用為基礎(chǔ)的色譜分離法 具有分辨率高 、 重復(fù)性好 、 回收率高等優(yōu)點(diǎn) 操作繁瑣 、 難放大 、 成本高 ， 在工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用受到限制 分子印跡 一種識(shí)別聚合物特殊結(jié)合位點(diǎn)的技術(shù) ， 是將生物大分子從凝膠轉(zhuǎn)移到固定基質(zhì)的過(guò)程 。 無(wú)論是單向凝膠電泳還是雙向凝膠電泳，分離度都是極高的。 反膠團(tuán)萃取法還可提取蛋白質(zhì)、酶、核酸、氨基酸和多肽。 總體來(lái)說(shuō)，蛋白質(zhì)的有機(jī)溶劑沉淀法不如鹽析法普遍。 為了沉淀目的蛋白 ， 把溶液的 pH調(diào)到目的蛋白的等電點(diǎn)即可 溶劑法 溶劑提取法包括水溶液提取法和有機(jī)溶劑提取法，其中緩沖溶液對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度大、穩(wěn)定性好，最為常用 。 ? 凝膠過(guò)濾色譜 五 .幾種主要蛋白質(zhì)分離純化的方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比 方法 原理 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 特點(diǎn) 基于分子大小差異的分離技術(shù) 凝膠層析（又稱(chēng)凝膠過(guò)濾、分子篩層析或排阻層析） 利用凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，根據(jù)分子大小差異分離混合物的方法。 層析純化 ? 預(yù)處理的產(chǎn)物可能仍與大量的雜質(zhì)混合在一起，這類(lèi)雜質(zhì)可能有病毒、熱原質(zhì)、氧化產(chǎn)物、核酸、多聚體、雜蛋白、與目的物類(lèi)似的異構(gòu)體等。利用酶溶法處理細(xì)胞時(shí)必須根據(jù)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成選擇合適的酶 .并確定相應(yīng)的使用次序，控制好溫度、 pH值和酶量。 ? 非機(jī)械破碎法包括酶溶法、化學(xué)滲透法、熱處理法、滲透壓沖擊法。在選擇處理技術(shù)，工藝和操作條件時(shí)，要確保去除有危險(xiǎn)的雜質(zhì)，保證產(chǎn)品質(zhì)量和作用安全以及生產(chǎn)過(guò)程的安全，藥品生產(chǎn)必須保證安全、無(wú)菌、病毒、熱原。 ⑤周期盡量短，因穩(wěn)定性差的產(chǎn)物隨工藝時(shí)間增加，收率、質(zhì)量會(huì)下降。必須明確嚴(yán)格控制的步驟和技術(shù)，以及允許的變化范圍。 ? 包括允許雜質(zhì)種類(lèi)和最大允許含量，特殊雜質(zhì)種類(lèi)和最大允許量 。的柱子結(jié)合 。 ⑵ .目的產(chǎn)物一般是大分子物質(zhì)，穩(wěn)定性差，具有生物活性的物質(zhì)對(duì)pH值、溫度、金屬離子、有機(jī)溶劑等十分敏感，容易失活、變性； ⑶ .種類(lèi)繁多，包括有大、中、小分子，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單或復(fù)雜的有機(jī)化合物以及結(jié)構(gòu)復(fù)雜又性質(zhì)各異的生物活性物質(zhì)。基因工程重組蛋白的分離純化 生物工程下游技術(shù) 第七組 馬夕堯 意義？？ ? 生物工程以基因工程為核心，主要產(chǎn)品為蛋白質(zhì)或多肽。含目的產(chǎn)物的初始物料組成復(fù)雜，除了目的產(chǎn)物外，還含有大量的細(xì)胞、代謝物、殘留培養(yǎng)基、無(wú)機(jī)鹽等，特別是產(chǎn)物降解酶、產(chǎn)物類(lèi)似物等對(duì)目的產(chǎn)物的分離影響很大。 二．建立蛋白質(zhì)純化工藝的依據(jù) ? ①分子量大小，大
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