臨床基因擴增檢驗的質(zhì)量保證-全文預覽
【正文】 是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。 ? 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴增反應混合液同時以水替代核酸樣本擴增，如為陽性，而上述僅含擴增反應混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴增產(chǎn)物的存在。 ?應該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴增反應混合液的管 。 統(tǒng)計學質(zhì)量控制 ?理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ?測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ?統(tǒng)計學質(zhì)控的特點 ?統(tǒng)計質(zhì)控方法 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ? 基質(zhì)與待測樣本一致； ? 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平； ? 穩(wěn)定； ? 靶值或預期結(jié)果已定； ? 無已知的生物傳染危險性； ? 單批可大量獲得； ? 價廉 測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ? 每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應每隔幾份臨床標本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴增檢驗的標本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應可以滿足要求。 ? 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 ? 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細胞內(nèi)釋放出來。 ? 具體做法是將裝有 TE緩沖液并上加石蠟油的擴增反應管放置于擴增儀各孔中，熱電偶探針透過擴增反應管蓋插至緩沖液中，然后按程序進行一個常規(guī)的PCR擴增，加熱模塊如為 96孔，則至少要測定 12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個擴增過程中，可移動熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個擴增周期。 帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢 ? 用實驗來檢驗帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強陽性和數(shù)份陰性核酸標本，然后將加樣器吸取量設(shè)至擴增加樣所需的體積，使用待評價帶濾塞吸頭對一份強陽性樣本來回吸取 10次（模擬 10份陽性樣本的吸?。瑢⒆詈笠淮蔚奈∫杭又烈缓瑪U增反應液的管中，之后，換一個新吸頭，連續(xù)吸取 10份陰性樣本分別至 10個擴增反應管中，此過程重復 3～ 5次，最后對每一管按所用試劑方法進行擴增檢測。 ? 實驗室應根據(jù)待測靶核酸的特性，對各種臨床樣本的運送條件作出相應的規(guī)定。 ? 用于 RNA擴增分析的樣本，則應于上述緩沖液中 80℃ 或液氮下保存。 標本保存 ?靶核酸 (尤其是 RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標本的保存對于核酸擴增測定的有效性極為重要。 采樣質(zhì)量的評價 ? 血清 (漿 )標本 :溶血、脂血等； ? 分泌物、痰：評價內(nèi)容包括細胞組成，所需類型細胞的數(shù)量和核酸總量。 標本的類型和采集量 ? 標本的類型 : 血清 (漿 )、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。 ? 實驗室測定： 標本接收、貼標簽、樣本處理、核酸擴增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。 SD或 CV越大，表示重復測定的離散度越大，精密度越差，反之則越好。 ? 偏差 (Bias) 待測物的測定值與一可接受參考值之間的差異。 定 義 ? 批 (Run) 在相同條件下所獲得的一組測定。 定 義 ? 室間質(zhì)量評價 （ External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異 ，由 外單位機構(gòu) ， 采取一定的辦法 ， 連續(xù) 、 客觀地評價實驗室的結(jié)果 ， 發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果 ， 使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性 。 ? 室內(nèi)質(zhì)量控制（ Internal Quality Control,IQC) 由實驗室工作人員 ，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在 監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度 ，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以 確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作 。 在以前的文獻中 ，EQA常描述室間質(zhì)量控制 。對一分析物重復多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏差即為測定的不準確度。測定不精密度的主要來源是隨機誤差，以標準差（ SD）和 /或變異系數(shù)（ CV）具體表示。 臨床基因擴增檢驗實驗室 常規(guī)測定步驟 ? 標本收集： 選擇測定項目、標本收集和保存。 標本采集部位的準備 ?血液標本采集 ?分泌物標本 :采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物 ,但應適度 ,過度清潔消毒有可能會去掉或破壞靶微生物 ,故標本采集部位的準備應由訓
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