臨床基因擴(kuò)增檢驗的質(zhì)量保證-全文預(yù)覽
【正文】 是發(fā)現(xiàn)誤差的產(chǎn)生及分析誤差產(chǎn)生的原因，采取措施予以避免。 ? 如想鑒別實驗室是否發(fā)生污染，可將一個或多個空管打開靜置于標(biāo)本制備區(qū) 30～ 60分鐘，然后加入擴(kuò)增反應(yīng)混合液同時以水替代核酸樣本擴(kuò)增，如為陽性，而上述僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管為陰性，則說明實驗室以前擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。 ?應(yīng)該包括 1份 陰性原血清樣本 、1份在標(biāo)本核酸提取過程中帶入的 一個空管 和 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管 。 統(tǒng)計學(xué)質(zhì)量控制 ?理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ?測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ?統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控的特點 ?統(tǒng)計質(zhì)控方法 理想的室內(nèi)質(zhì)控樣本的條件 ? 基質(zhì)與待測樣本一致； ? 所含待測物濃度接近試驗的決定性水平； ? 穩(wěn)定； ? 靶值或預(yù)期結(jié)果已定； ? 無已知的生物傳染危險性； ? 單批可大量獲得； ? 價廉 測定中質(zhì)控樣本的設(shè)置、數(shù)量及排列順序 ? 每次檢測究竟使用幾個質(zhì)控樣本并排在臨床標(biāo)本中的哪個位置最為適宜？從理論上說，為最大可能地檢出實驗的隨機和系統(tǒng)誤差，應(yīng)每隔幾份臨床標(biāo)本插入 1份質(zhì)控樣本，但考慮國內(nèi)目前的實際情況及成本效益，一般來說，如果臨床基因擴(kuò)增檢驗的標(biāo)本量不是特別大，定性測定有一份接近 cutoff的弱陽性和一份陰性質(zhì)控樣本應(yīng)可以滿足要求。 ? 核酸提取中： 許多試劑如乙二胺四乙酸 (EDTA)、去垢劑如十二烷基硫酸鹽(SDS)和 chaotrope試劑如異硫氰酸胍和鹽酸胍等、酚、氯仿、乙醇等有機溶劑 。 ? 一般均使用去垢劑 (如 Triton100)裂解細(xì)胞，用一種蛋白裂解酶 (如蛋白酶 K)消化結(jié)合于核酸的蛋白質(zhì)，從而將靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。 ? 具體做法是將裝有 TE緩沖液并上加石蠟油的擴(kuò)增反應(yīng)管放置于擴(kuò)增儀各孔中，熱電偶探針透過擴(kuò)增反應(yīng)管蓋插至緩沖液中，然后按程序進(jìn)行一個常規(guī)的PCR擴(kuò)增，加熱模塊如為 96孔，則至少要測定 12孔不同位置孔內(nèi)的溫度，在整個擴(kuò)增過程中，可移動熱電偶探針至上述不同孔中監(jiān)測溫度，但每一孔內(nèi)溫度監(jiān)測至少要有一個擴(kuò)增周期。 帶濾塞吸頭的使用及質(zhì)檢 ? 用實驗來檢驗帶濾塞吸頭的質(zhì)量：先純化制備數(shù)份強陽性和數(shù)份陰性核酸標(biāo)本，然后將加樣器吸取量設(shè)至擴(kuò)增加樣所需的體積，使用待評價帶濾塞吸頭對一份強陽性樣本來回吸取 10次（模擬 10份陽性樣本的吸取），將最后一次的吸取液加至一含擴(kuò)增反應(yīng)液的管中，之后，換一個新吸頭，連續(xù)吸取 10份陰性樣本分別至 10個擴(kuò)增反應(yīng)管中，此過程重復(fù) 3～ 5次，最后對每一管按所用試劑方法進(jìn)行擴(kuò)增檢測。 ? 實驗室應(yīng)根據(jù)待測靶核酸的特性，對各種臨床樣本的運送條件作出相應(yīng)的規(guī)定。 ? 用于 RNA擴(kuò)增分析的樣本，則應(yīng)于上述緩沖液中 80℃ 或液氮下保存。 標(biāo)本保存 ?靶核酸 (尤其是 RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解，因此標(biāo)本的保存對于核酸擴(kuò)增測定的有效性極為重要。 采樣質(zhì)量的評價 ? 血清 (漿 )標(biāo)本 :溶血、脂血等； ? 分泌物、痰：評價內(nèi)容包括細(xì)胞組成，所需類型細(xì)胞的數(shù)量和核酸總量。 標(biāo)本的類型和采集量 ? 標(biāo)本的類型 : 血清 (漿 )、分泌物、痰、糞便、尿和腦脊液等。 ? 實驗室測定： 標(biāo)本接收、貼標(biāo)簽、樣本處理、核酸擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測、測定的有效性和臨床診療價值。 SD或 CV越大，表示重復(fù)測定的離散度越大，精密度越差，反之則越好。 ? 偏差 (Bias) 待測物的測定值與一可接受參考值之間的差異。 定 義 ? 批 (Run) 在相同條件下所獲得的一組測定。 定 義 ? 室間質(zhì)量評價 （ External Quality Assessment, EQA） 為客觀比較一實驗室的測定結(jié)果與靶值的差異 ，由 外單位機構(gòu) ， 采取一定的辦法 ， 連續(xù) 、 客觀地評價實驗室的結(jié)果 ， 發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果 ， 使各實驗室之間的結(jié)果具有可比性 。 ? 室內(nèi)質(zhì)量控制（ Internal Quality Control,IQC) 由實驗室工作人員 ，采取一定的方法和步驟，連續(xù)評價本實驗室工作的可靠性程度，旨在 監(jiān)測和控制本實驗室工作的精密度 ，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間樣本檢驗的一致性，以 確定測定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報告的一項工作 。 在以前的文獻(xiàn)中 ，EQA常描述室間質(zhì)量控制 。對一分析物重復(fù)多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏差即為測定的不準(zhǔn)確度。測定不精密度的主要來源是隨機誤差，以標(biāo)準(zhǔn)差（ SD）和 /或變異系數(shù)（ CV）具體表示。 臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室 常規(guī)測定步驟 ? 標(biāo)本收集： 選擇測定項目、標(biāo)本收集和保存。 標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備 ?血液標(biāo)本采集 ?分泌物標(biāo)本 :采集部位的清潔消毒可去掉污染的微生物或其它雜物 ,但應(yīng)適度 ,過度清潔消毒有可能會去掉或破壞靶微生物 ,故標(biāo)本采集部位的準(zhǔn)備應(yīng)由訓(xùn)
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