臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的質(zhì)量保證-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 練有素的人員進(jìn)行 。 ? 對(duì)于定量測(cè)定來(lái)說(shuō)，對(duì)標(biāo)本的收集要求更為精確。 標(biāo)本采集中的防污染 ?采集中要特別注意污染，防止混入操作者的頭發(fā)、表皮細(xì)胞、痰液等； ? 如使用玻璃器皿，必須經(jīng)高壓滅菌，以使可能存在的 RNase失活 。 ? 如為提取核酸后用于 DNA擴(kuò)增分析的樣本，可于 10 mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(～ )緩沖液中 4 ℃ 下保存。 ? 樣本中如加入了適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑 ,如用于RNA測(cè)定加入 GITC的血清 (漿 )樣本和用于 DNA測(cè)定的 EDTA抗凝血等 ,則可在室溫下運(yùn)送或郵寄。如果吸頭質(zhì)量好，則有色液體不應(yīng)出現(xiàn)在濾塞之上，否則說(shuō)明濾塞不嚴(yán)。 核酸提取用離心管質(zhì)檢 ?離心管 PCR抑制物質(zhì)檢 ?其他 擴(kuò)增儀孔間溫度的重復(fù)性和均一性的 檢測(cè)方法 ? 一是使用一種熱電偶探針、微伏轉(zhuǎn)換器和自動(dòng)圖示記錄儀組成擴(kuò)增加熱模塊孔內(nèi)溫度監(jiān)測(cè)記錄系統(tǒng)，當(dāng)孔間溫度變異超出 1℃ 時(shí)，其可測(cè)出來(lái)。 核酸樣本的制備、擴(kuò)增檢測(cè) 及其質(zhì)量控制 ? 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理 ? 核酸的分離純化 ? 靶核酸提取的質(zhì)量 ? 臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) ? 核酸樣本制備及擴(kuò)增檢測(cè)的質(zhì)控 ? 產(chǎn)物檢測(cè)的質(zhì)控 一般核酸提取試劑促使靶核酸從細(xì)胞內(nèi)釋出的原理 ? 靶核酸可以與宿主細(xì)胞整合，核內(nèi)游離及胞漿內(nèi)各種構(gòu)形存在于細(xì)胞內(nèi)，如測(cè)定的是病原微生物 ,則靶核酸存在于細(xì)菌、病毒、原蟲或真菌細(xì)胞內(nèi)，如果上述細(xì)胞破裂 ,則靶核酸亦可存在于細(xì)胞外。 臨床標(biāo)本及核酸提取中可能存在的抑制和干擾物質(zhì) ? 臨床標(biāo)本中： 血清或血漿中的血紅素及其代謝產(chǎn)物、痰中酸性多糖和糖蛋白成份 、降解靶核酸的核酸酶等。 ? 已知陰性質(zhì)控樣本（基質(zhì)與待測(cè)標(biāo)本相同）： 至少帶 1份，擴(kuò)增測(cè)定的結(jié)果可以判斷核酸提取過程中是否發(fā)生污染。 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控的獨(dú)特性 ?即監(jiān)測(cè)污染發(fā)生的陰性質(zhì)控的設(shè)置。 僅含擴(kuò)增反應(yīng)混合液的管 的功能 ? 監(jiān)測(cè)擴(kuò)增試劑是否發(fā)生污染，具有較強(qiáng)的污染鑒別性。 ? 隨機(jī)誤差則表現(xiàn)為測(cè)定 SD的增大，主要是由實(shí)驗(yàn)操作人員的操作等隨機(jī)因素所致，其出現(xiàn)難以完全避免和控制。以上為 批間變異 。 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式及定義 ?質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式 ?質(zhì)控規(guī)則的功能 ?常用質(zhì)控規(guī)則的符號(hào)及定義 質(zhì)控規(guī)則的表達(dá)方式 ? 通常質(zhì)控規(guī)則以符號(hào) AL來(lái)表示，其中 A為質(zhì)控測(cè)定中超出質(zhì)量控制限的測(cè)定值的個(gè)數(shù)， L為控制限，通常用均值或均值 177。 3s，其確切的含義為：在質(zhì)控測(cè)定值中，如果有一個(gè)測(cè)定值超出均值 177。 2s控制限 。 ? R4S 同一批測(cè)定中 ， 兩個(gè)不同濃度質(zhì)控物的測(cè)定值之間的 差值超出 4s控制限 。 LeveyJennings質(zhì)控圖方法 ? 也稱 Shewhart質(zhì)控圖，是由美國(guó)的Shewhart 于 1924年首先提出，并用于工業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。 ? 如以 177。 2s為失控限，假失控的概率太高，通常不能接受。 ? 最初常用的有六個(gè)質(zhì)控規(guī)則，即 12S、 13S、 22S、R4S、 41S和 10X，其中 12S規(guī)則作為告警規(guī)則。 ?假失控和假告警概率低。 177。 177。 ? 除了將 IQC數(shù)據(jù)作為日常質(zhì)控外，還應(yīng)定期評(píng)價(jià)累積數(shù)據(jù)以監(jiān)測(cè)在測(cè)定操作中的長(zhǎng)期變化趨勢(shì)。 ? 儀器的問題。 陰性質(zhì)控樣本的失控原因 ?主要為擴(kuò)增產(chǎn)物的 “ 污染 ” 和 /或臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的標(biāo)本間的交叉 “ 污染 ” . IQC的局限性 ? 在免疫測(cè)定中 IQC可能測(cè)不出的誤差 ? 測(cè)定前 測(cè)定中 測(cè)定后 樣本鑒定不對(duì) 樣本吸取不對(duì) 結(jié)果記錄錯(cuò)誤 樣本貯存中變質(zhì) 試劑加入不對(duì) ? 此類誤差的發(fā)生率在不同的實(shí)驗(yàn)室有所不同，一般要求小于 %，且應(yīng)均衡地分布于測(cè)定前、測(cè)定中和測(cè)定后的不同階段。 室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（ EQA） ? EQA ? Proficiency testing (PT) EQA 的程序設(shè)計(jì) ? 確定質(zhì)評(píng)方案 ,定期發(fā)放質(zhì)評(píng)樣本； ? 要求參加質(zhì)評(píng)實(shí)驗(yàn)室報(bào)告結(jié)果的單位要一致，以便于統(tǒng)計(jì)； ? 報(bào)告要清楚、簡(jiǎn)潔； ? 要求參評(píng)實(shí)驗(yàn)室在測(cè)定 EQA樣本時(shí)，要以與常規(guī)樣本完全相同的方式測(cè)定； ? 對(duì)測(cè)定方法、試劑及儀器等歸納總結(jié)； ? 對(duì)參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的測(cè)定要有評(píng)價(jià)； ? EQA報(bào)告要迅速及時(shí)。 相對(duì)評(píng)分和絕對(duì)評(píng)分的例子 ?相對(duì)評(píng)分：英國(guó) NEQAs ?絕對(duì)評(píng)分：美國(guó) CAP 采用何種評(píng)分方法較好？ ? 建立一個(gè)質(zhì)評(píng)體系，上述絕對(duì)評(píng)分和相對(duì)評(píng)分的方法均可以采用，其實(shí)質(zhì)內(nèi)容并無(wú)太大的差別，只不過是表現(xiàn)形式的不同，尤其是在定
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