【正文】 e x t r a c ts o f y o un g a nd se ne sc e nt 2 BS c e l l s, w hi c h w e r e se par a te d b y S DS P AG E e l e c tr o ph o r e si s and tr a ns f e r e d to nit r o c e l l ulo se m e m br a ne . A 2 4 k Da binding pr o te i n was o bs e r v e d onl y i n yo un g c e l l s and 1 5 .5 k Da binding pr o te i n c o uld be de te c te d in bot h c e l l s.65 1000 50 100 150 200Relative SEAP activitypSEAP339。 生存率與年齡無關(guān) 毒素作用后，胰島可再生 結(jié)論 p16表達 ↑ —— 老年鼠 胰島增殖和再生能力 ↓重要原因 Krishnamurthy J, et al., p16(INK4a) induces an agedependent decline in islet regenerative potential Nature 443 : 453457, 2022 Univ North Carolina,Harvard Medical School 60 骨關(guān)節(jié)炎 (老年病 )軟骨細(xì)胞 p16表達 ?? p16特異 SiRNA轉(zhuǎn)染導(dǎo)致的 p16基因沉默 可有效抑制關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞衰老， 恢復(fù)其功能，增強軟骨細(xì)胞 DNA合成與膠原蛋白合成能力。 Janzen V, et al.（ Harvard Univ ） Stemcell ageing modified by the cyclindependent kinase inhibitor p16INK4a Nature. 443 (7110): 421426， 2022 58 干細(xì)胞衰老與 p16表達增強密切相關(guān) 年輕小鼠敲除 p16后對其造血干細(xì)胞功能（免疫表型，歸巢能力，增殖能力，自我更新能力）無影響， 老年小鼠敲除 p16→ 造血干細(xì)胞功能 顯著 ↑（優(yōu)于同齡鼠） 。 人體衰老時它的表達在皮膚中隨增齡持續(xù)增強， 維氏綜合征病人的皮膚 成纖維細(xì)胞 p16INK4A高于常人 （ Davis T, 2022 ） Ressler S, et al. p16(INK4A) is a robust in vivo biomarker of cellular aging in human skin. Aging Cell 5 (5): 379389， 2022 57 p16INK4a表達 ?是老年人造血功能 ?的重要原因 ?干細(xì)胞衰老影響組織的維持與修復(fù)。 Melzer, D。 Nakashima H等（ 2022） 發(fā)現(xiàn)：人血白細(xì)胞 端粒長度 與心血管內(nèi)皮損傷， 動脈粥樣硬化 的關(guān)系密切。 1 1 3020040060080010001200140016001800y oun g 2BS / A S p 16 2BS / ne o s e ne s c e nt3HTdR Incorporation (cpm/106 cells)老抑制p16對照年輕衰老抑制 p16 ， DNA修復(fù)能力增強 抑制 p16 ， DNA修復(fù)能力增強 48 抑制 p16，延緩細(xì)胞衰老的可能機制 p16減少 ? 細(xì)胞周期 蛋白激酶 (CDK4）活性高 ? Rb被磷酸化，失去活性 ? 轉(zhuǎn)錄因子 E2F活性高 → 多種 生命必需基因能表達 ? 維持 細(xì)胞 增殖速度 ,維持 DNA損傷修復(fù)能力 端?？s短較慢 ,延緩細(xì)胞衰老 （ 需證明 Rb是否磷酸化！ ） 49 抑制 p 16 ， Rb 蛋白磷酸化（失活）磷酸化 （ 失活 ）（有活性）段建明等 （ Duan JM, et al.） ， J. Biol. Chem. 2022 Western blot 抑制 p16 年輕 對照 中年 衰老 50 p16 影響細(xì)胞衰老機制 抑制 p16表達 → CDK4活性 ↑→ Rb蛋白（磷酸化 ↑ ） 活性 ↓ → E2F活性保持 →多種 生命必需基因表達 — DNA修復(fù)能力維持 →端?？s短較慢 （ 與端粒酶活性無關(guān) ） 延緩衰老 ， 細(xì)胞壽命 ↑ 增強 p16基因表達 → Rb 保持活力， DNA修復(fù)能力 ↓ → 端粒縮短加快 ,衰老 ↑ ， 細(xì)胞壽命 ↓ 51 結(jié)論： p16基因 是細(xì)胞衰老遺傳控制程序中的主要環(huán)節(jié) , 可影響DNA損傷修復(fù)能力與 端粒長度 。 p16為何能影響細(xì)胞衰老？ 我研究室工作： p16是如何影響端粒長度與衰老進程的？ 是否影響了端粒酶的活性？ 抑制 p16表達， 可使 細(xì)胞壽命 ↑ （ 60余代 → 80余代） 端?？s短減慢 結(jié)論： 基因干預(yù)可影響細(xì)胞衰老進程 45 端粒平均長度 (kb) 年輕 8.34 抑制 8.18 增強 7.12 衰老 6.78 抑制 p16， 端?？s短 減慢 增強 p16， 端?？s短 加快 是否影響了端粒酶的活性？ 46 TRAP assay for telomerase activity in cells陰性對照 抑制 p 16 陽性對照2BS MCF 7— — +++抑制 p16，并未活化 端粒酶 47 1 4 1 4 177。 177。 檢驗藥物抗衰作用，為中藥現(xiàn)代化提供技術(shù)支撐 ?能否確定被試物的 延衰作用？ ?能否比較被試物延衰作用的細(xì)微差別？ 35 黃芪堿 同分異構(gòu)體 以公認(rèn)有延緩衰老作用的 肌肽 （ carnosine）為陽性對照，以上述生物學(xué)指征進行定量比較。 馬 宏等 （ Ma H , et al） Exp Gerontol 2022 32 衰老細(xì)胞核出現(xiàn) “ 衰老相關(guān) 異染色質(zhì)聚集位點 ” （ senescence associated heterochromatic foci， SAHF） 染色質(zhì)在核中的分布，呈點狀聚集而非均一分布 李 倩 等： SAHF——細(xì)胞衰老生物學(xué)新標(biāo)志 。 下調(diào)的基因：參與細(xì)胞周期的基因等。 我室在國外刊物的部分相關(guān)論文 ： Duan JM, Int J Biochem Cell Biol, 2022, 37:14071420 Zheng WJ, et al. J Biol Chem 2022,279:3152431532 Guo SZ, et al. Exp Cell Res 2022,298:465472 Huang Y, et al. J Cell Physiol, 2022, 201: 483491. Zhang XW, et al. Oncogene 2022, 22 : 24052416 Wang PC, et al. Mech Age Dev 2022,124: 10251034 Duan JM, et al. J Biol Chem 2022 276: 4832548331. Li JH, et al. Mech Age Dev 1995,80:2534. Tang ZQ , et al. Mech Age Dev 1994,73:5767. 基因水平 細(xì)胞衰老指征？？ 24 % % % % % % 用 cDNA芯片檢測人二倍體成纖維細(xì)胞 衰老基因表達譜的變化 HGEC40S: 含 4096條人類基因，衰老表達差異較大的基因有 117種。 中國人外周血淋巴細(xì)胞的端粒長度每年平均縮短 35 bp。 ? 組建 一套定量的 細(xì)胞衰老 生物學(xué)年齡指征 ? 準(zhǔn)確定量細(xì)胞衰老程度，可 研究各種因素對衰老進程的影響 檢驗藥物抗衰作用，為中藥現(xiàn)代化提供技術(shù) 支撐。 如與 動物整體實驗相配合，可取長補短，相輔相成。 衰老 的 實驗性研究 —— 成果累累 13 ?細(xì)胞 生物 的 基本構(gòu)成單位 ?細(xì)胞衰老 老年病發(fā)病 的 共同基礎(chǔ) 人成纖維細(xì)胞 （ 人胚細(xì)胞可傳 6070代， 50歲成人細(xì)胞只能傳 10~20代 ） 在體外培養(yǎng)可傳代數(shù)，與供體年齡有關(guān)。一種組合可能與某一老年病 (., dementia, hypertension, and cardiovascular disease)易感性有關(guān)，或可由此將健康老人的表型分成不同亞型。 基因?qū)λダ线M程的主導(dǎo)性 10 人類“長壽基因的探索 Puca, AA （ Childrens Hosp ） 與 Perls, Thomas（ Boston Univ ） 等（ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2022） 報道： 分析 137組 (308人 )長壽同胞，百歲老人血樣 發(fā)現(xiàn)：四號染色體 D4S1564 (D代表