【正文】 Cl等 酵母菌－山梨醇、甘露醇等 霉菌－ KCL、 NaCl等 滲透壓穩(wěn)定劑的濃度一般采用 ～ ％ mol/L。 酶解時(shí)間 原生質(zhì)體的制備質(zhì)量與酶解時(shí)間有密切的關(guān)系。 酶解溫度 溫度對酶解作用有雙重影響。 菌體的培養(yǎng)時(shí)間 為了使菌體易于原生質(zhì)體化，一般選擇對數(shù)生長期的菌體。 一般可以采用 營養(yǎng)缺陷標(biāo)記 和 抗藥性標(biāo)記 。通過細(xì)胞質(zhì)融合、核融合，而后發(fā)生基因組間的交換、重組，進(jìn)而可以在適宜的條件下再生出微生物的細(xì)胞壁來，從而獲得重組子的過程。 首先要進(jìn)行噬菌體效價(jià)的測定。 轉(zhuǎn)導(dǎo)育種的過程 操作過程如下： 先將供體菌培養(yǎng)至對數(shù)生長期，然后向其中加入噬菌體，繼續(xù)培養(yǎng)是一部分供體菌發(fā)生裂解反應(yīng)而釋放出轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體。 這兩個(gè)基因之間的距離為 （約 10kb）。 兩個(gè)鄰近的基因一起被轉(zhuǎn)導(dǎo)的現(xiàn)象稱為 共轉(zhuǎn)導(dǎo)（ co－transduction)。 由雙重溶源菌形成的裂解物稱為 HFT裂解物。 LFT裂解物在低 m . o . i .情況下感染宿主，可獲得極少量的局限轉(zhuǎn)導(dǎo)，這就是低頻轉(zhuǎn)導(dǎo)。 四、局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)（ specialized transduction） 指通過部分缺陷的溫和噬菌體把供體菌的少數(shù)特定基因攜帶到受體菌中，并獲得表達(dá)的轉(zhuǎn)導(dǎo)現(xiàn)象。 由完全缺陷噬菌體介導(dǎo)的普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)稱為完全普遍轉(zhuǎn)導(dǎo)。 過濾性因子是噬菌體（ phage） 的證明： a. 過濾性因子不會(huì)因 DNase 處理而失去活性，說明它不是裸露在溶液中的 DNA， 故可以排除轉(zhuǎn)化作用，另外由于兩個(gè)菌是隔離培養(yǎng)的因而也可以排除接合作用； b. 過濾性因子與從溶源性菌分離到的噬菌體 P22具有相同大小的質(zhì)量； c. 用抗 P22的血清或加熱處理，使 P22的感染性和過濾性因子的功能失活的速率相同； d. 抗 P22的沙門氏菌菌株同時(shí)也對過濾性因子表現(xiàn)為抗性。 獲得新性狀的受體細(xì)胞就稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)子（ transductant）。當(dāng)a+ 、 b+兩個(gè)基因位于同一 DNA片段上是， a+ b+轉(zhuǎn)化子與 DNA濃度成正比的增加；當(dāng) a+ b+基因分別位于不同的 DNA片段上是，在一定的 DNA濃度內(nèi)， a+ b+轉(zhuǎn)化子與 DNA濃度的平方成正比。細(xì)菌細(xì)胞在特定的時(shí)期產(chǎn)生一種感受態(tài)因子（ CF）， CF與膜上的受體結(jié)合，刺激核內(nèi) DNA產(chǎn)生另一個(gè)蛋白 —— 自溶素（ Autolysin）， 自溶素轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞膜和細(xì)胞壁之間的周質(zhì)內(nèi)作用于細(xì)胞膜，并改變膜的成分，使細(xì)胞膜便于 DNA的吸收。 感受態(tài)的比例 不同的細(xì)菌的感受態(tài)的比例是不同的，一般為10％～ 20％。 轉(zhuǎn)化 DNA的命運(yùn) 大量的實(shí)驗(yàn)證明，在轉(zhuǎn)化作用中遺傳重組是由供體的單鏈序列取代了受體 DNA的單鏈序列，使受體的 DNA標(biāo)記變成了供體的遺傳標(biāo)記，并恒定表達(dá)，遺傳給它的后代。在受體細(xì)胞攝取 DNA時(shí)，可能還會(huì)進(jìn)一步斷裂，所以僅僅有大約 ％的供體基因組能夠進(jìn)入受體細(xì)胞。 一、轉(zhuǎn)化過程 轉(zhuǎn)化包括兩個(gè)基本過程 （ 1）從供體菌中提取遺傳物質(zhì) DNA并轉(zhuǎn)移到受體中； （ 2）供體的遺傳物質(zhì)在受體中的作用。選擇性標(biāo)記可以用抗性標(biāo)記，也可以用營養(yǎng)缺陷型。 （四）天蘭色鏈霉菌三種致育類型與大腸桿菌的三種致育類型之間的區(qū)別 大腸桿菌中 F－ F－ 是不育的，但在天蘭色鏈霉菌中 UF UF是可育的，只是頻率較低，說明還有另外一種致育因子的存在； 大腸桿菌中 F＋ F＋ 或 Hfr Hfr雜交的可育性很低，除非使其中一個(gè)成為 F－ 的擬表型，但在天蘭色鏈霉菌中 NF NF和 IF IF雜交中一部分是高度可育的； 大腸桿菌中 F＋ F－ 的子代都是 F－ 而 Hfr F－ 的子代都是 F－ ， 但在天蘭色鏈霉菌中 IF UF的子代是IF， NF UF的子代也是 NF。 認(rèn)為 NF相當(dāng)于 Hfr的理由 （ 1） IF和 NF都產(chǎn)生對于 UF菌株具有抑制作用的次甲霉素，而 UF菌株則不產(chǎn)生這一抗菌素； （ 2） IF UF雜交子代全部都是 IF， 這種轉(zhuǎn)變和染色體基因轉(zhuǎn)移無關(guān)，但是 NF UF雜交則不同， UF轉(zhuǎn)變?yōu)?NF都伴隨著染色體重組； （ 3） NF菌株來自 IF或是 IF的雜交子代，與 一樣。另外， thr、 leu選擇性標(biāo)記應(yīng)位于前端，如位于后端則無法測序。 1957年， 。 （ 2） II型 F ′菌使本來轉(zhuǎn)移頻率差異懸殊的兩部分基因具有相同的頻率。 通過接合而獲得新性狀的受體細(xì)胞稱為接合子。 （五 ） 三種“雄性”菌株與 F－ 接合后的結(jié)果 F＋ F－ 2F＋ 由性菌毛將不同接合型的的細(xì)菌連在一起，并且在細(xì)胞間形成胞質(zhì)橋（也稱接合管）。 （四 ） F因子的三種存在形式 F＋ ： F因子在細(xì)胞中以游離狀態(tài)存在。 γ δ F因子的主要表現(xiàn)型是 細(xì)胞表面有性菌毛 ，即F＋ 細(xì)胞表面都有性菌毛。 A. 轉(zhuǎn)移區(qū)（ Transferregion）： 是一個(gè)操縱子，由 22個(gè)基因組成， 33kb， 位于 F因子結(jié)構(gòu)圖的 60～ 93kb之間。 F因子是獨(dú)立于染色體外的小型環(huán)狀 DNA分子，具有自體復(fù)制及轉(zhuǎn)移到其他細(xì)胞中去的能力。其中，供體品系相當(dāng)于雄性，而受體品系相當(dāng)于雌性。 異核體和雜合二倍體的排除 A＋ B— A— B＋ A＋ B— A— B＋ A＋ B＋ 異核體 雜合二倍體 單倍重組體 異核體和雜合二倍體的遺傳性狀不穩(wěn)定，在傳代過程中會(huì)發(fā)生性狀分離，但事實(shí)恰恰相反，原養(yǎng)型菌落的基因型是穩(wěn)定的，證明是單倍重組體。 1950年，了 U形管實(shí)驗(yàn)否定了這一推測（見右圖） 互養(yǎng)的排除 營養(yǎng)缺陷型細(xì)菌通過培養(yǎng)基交換養(yǎng)料而產(chǎn)生的現(xiàn)象稱為互養(yǎng)。 （一）接合現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn) 1946年， J. Lederberg和E. L. Tatum將來自 K12的兩種營養(yǎng)缺陷型菌株混合培養(yǎng)，其遺傳標(biāo)記如圖。 雜交（ Hybridization） :是指不同基因型的親本個(gè)體或細(xì)胞（指單細(xì)胞生物）交配而產(chǎn)生子代的過程。 重組與突變的不同點(diǎn)： 突變是指一個(gè)細(xì)胞的同一個(gè)基因組中某一點(diǎn)或某一 DNA片段發(fā)生的變異；而重組是來自兩個(gè)細(xì)胞的不同基因組間遺傳物質(zhì)交換的結(jié)果，重組可在微生物細(xì)胞不發(fā)生突變的情況下形成新的基因型與表型。 第一節(jié) 細(xì)菌、放線菌的接合及育種 一、細(xì)菌的接合作用 接合（ Conjugation） ： 指供體菌與受體菌的完整細(xì)胞經(jīng)過直接接觸而傳遞大段 DNA（ 包括質(zhì)粒）遺傳信息的現(xiàn)象。 （二 ） 接合作用的證明 轉(zhuǎn)化作用的排除 由于在報(bào)道接合試驗(yàn)結(jié)果之前轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)已經(jīng)是眾所周知，因此有人懷疑該結(jié)果是由轉(zhuǎn)