【正文】 件下加熱， Gly解離出來： C–末端為 Gly Gly–Tyr與（ Gly、 Ser、 Tyr） –Met：（ Gly–Tyr–Ser） –Met （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys與 Gly–Tyr–Ser–Met：（ Gly–Tyr–Ser–Met–Thr）–Lys （ Gly、 Met、 Ser、 Thr、 Tyr） –Lys–（ Ala、 Gly）： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala、 Gly） C–末端為 Gly： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–（ Ala–Gly） 該肽的氨基酸順序： Gly–Tyr–Ser–Met–Thr–Lys–Ala–Gly 酶化學(xué)習(xí)題 一 .名詞解釋 酶：生物活細(xì)胞產(chǎn)生的、具有催化能力的以蛋白質(zhì)為主要成分的生物催化劑 全酶：脫輔酶蛋白與輔因子金屬離子或有機(jī)小分子化合物結(jié)合形成的結(jié)合酶 輔酶：與酶蛋白以非共價(jià)鍵疏松結(jié)合 ,容易被透析或超濾法除去輔因子如 TPP、NAD 等。用糜蛋白酶處理得到 ① Gly、 Tyr； ② Ala、 Gly、 Lys、 Met、 Ser、 Thr。 ⑤ 絲氨酸和 丙氨酸： pH7． 0絲氨酸、丙氨酸凈電荷接近零，絲氨酸非極性小，絲氨酸先洗脫。 中性氨基酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2 酸性氨基酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′R–COO－ )/2 ＋＋堿性氨基酸： pI=(pK′α–NH3+pK′R–NH3)/2 －－ ① 谷氨酸： pI=(pK′α–COO+pK′R–COO)/2＝ (＋ )∕2＝ ② 精氨酸： pI=(pK′α–NH3＋ +pK′R–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ ③ 丙氨酸： pI=(pK′α–COO－ +pK′α–NH3＋ )/2＝ (＋ )∕2＝ 用強(qiáng)酸型陽(yáng)離子交換樹脂分離下述每對(duì)氨基酸，當(dāng)用 pH7． 0的緩沖液洗脫時(shí)，下述每對(duì)中先從柱上洗脫下來的是哪種氨基酸？ ① 天冬氨酸和賴氨酸： pH7． 0 天冬氨酸凈電荷－ 賴氨酸凈電荷＋ 1，天冬氨酸先洗脫。 水份：水參加水解、酶解、水合和加合，加速氧化、聚合、離解和霉變。溶解度法和高速離心沉降法，現(xiàn)已很少再用。吸附、萃取、沉淀法（熱變性、鹽析、有機(jī)溶劑沉淀等）、離子交換（批量吸附、胖柱交換）、親和層析等； ? 晚期分離純化 :細(xì)分級(jí)，分辨力高。 ? 分離生物大分子的方法： 以分子大小和形態(tài)差異為依據(jù)：差速離心、區(qū)帶離心、超濾、透析和凝膠過濾等。 ? 主要影響因素： 離子強(qiáng)度： ～ ～ ； pH值：避免過酸、過堿，一般 pH6～ 8，蛋白質(zhì)和酶穩(wěn)定的范圍內(nèi)，常偏離等電點(diǎn)的兩側(cè)； 溫度： 0℃ ～ 5℃ ，溫度耐受力強(qiáng)的蛋白質(zhì)和酶，可提高溫度使雜蛋白變性。 ④ 生物大分子制備的前處理 生物材料的選擇細(xì)胞的破碎生物大分子的提取 ⑤ 生物大分子的分離純化 選擇和探索分離純化方案（最困難過程）。 ? 20種氨基酸 遠(yuǎn)紫外區(qū) (220nm)：均有光吸收 近紫外區(qū) (220300nm)：酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸含共軛雙鍵苯環(huán)，在 280nm處有最大吸收峰。 ② 蛋白質(zhì)變性后親水基團(tuán)被掩埋 ,溶解度降低、失去水膜，易形成沉淀析出 。 ? 穩(wěn)定蛋白質(zhì)膠體系統(tǒng)的因素：分子表面的親水基團(tuán)與周圍水分子結(jié)合形成水化層 (水膜 )；分子表面的親水基團(tuán)可 結(jié)合或釋放 H+,帶一定電荷，水溶液中蛋白質(zhì)顆粒帶相同電荷。 蛋白質(zhì)的別構(gòu)效應(yīng) (allosterism)：一個(gè)亞基的構(gòu)象改變而引起其余亞基和整個(gè)分子構(gòu)象、性質(zhì)和功能發(fā)生改變。 不規(guī)則卷曲 (randomcoil)：沒有確定規(guī)律性的松散肽鏈結(jié)構(gòu)。 ψ＝＋ 135176。 平行 (Parallel)： φ＝－ 119176。 ψ＝－ 47176。 堿水解法： 6mol/LNaOH煮沸 6h,完全水解，消旋， Ser、 Thr、 Arg、 Lys和 Cys破壞。 ? 拆分二硫鍵。 凱氏定氮法： 100g樣品中蛋白質(zhì)含量 (g%)=每克樣品含氮克數(shù) 100 20種基本氨基酸的名稱 、結(jié)構(gòu)及縮寫。 等電聚焦電泳：外加電場(chǎng)，蛋白質(zhì)混合物在具有 pH 梯度的介質(zhì)中移向并停留聚焦在等電點(diǎn) pH處，形成區(qū)帶而將具不同等電點(diǎn)的蛋白質(zhì)分離的一種技術(shù)。 離子交換層析： IEC，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與離子交換劑（固定相）上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。 電泳：通過帶電顆粒能在電場(chǎng)中移動(dòng)，其泳動(dòng)速率取決于荷質(zhì)比（凈電荷、大小、形狀）的原理，將具不同荷質(zhì)比的分子分開的一種分離純化方法。 血紅蛋白：由四個(gè)三級(jí)結(jié)構(gòu)幾乎與肌紅蛋白相同的亞基（ α2β2）和四個(gè)血紅素輔基組成的 能結(jié)合氧并使氧從肺轉(zhuǎn)運(yùn)到外周組織的球狀寡聚蛋白。 蛋白質(zhì)復(fù)性：變性蛋白質(zhì)解除變性因素后，重新形成蛋白質(zhì)天然構(gòu)象。 分子伴娘：幫助其他含多肽結(jié)構(gòu)的物質(zhì)在體內(nèi)進(jìn)行正確的非共價(jià)的組裝的蛋白質(zhì)。 模序：多肽鏈中在空間上靠近的一些二級(jí)結(jié)構(gòu)單元彼此相互作用，形成的有規(guī)則的，在空間上能辨認(rèn)的二級(jí)結(jié)構(gòu)組合（聚集）體。）旋轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)角度 φ角和 CaC 鍵在（－ 180176。 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的排列順序。 二硫鍵：兩個(gè)半胱氨酸側(cè)鏈巰基脫氫氧化形成的共價(jià)鍵，是維持某些蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要因素。 寡肽： 25個(gè)以下氨基酸殘基形成的肽。 Sanger 反應(yīng)：堿性條件下氨基酸 αNH2 的 H 原子被 2,4二硝基氟苯的烴基二硝基苯基取代生成二硝基苯基氨基酸（黃色）的烴基化反應(yīng)。 茚三酮反應(yīng)：氨基酸與茚三酮在弱酸性溶液中加熱產(chǎn)生藍(lán)紫色（脯氨酸、羥脯氨酸黃色）有色化合物的反應(yīng)。 必需氨基酸：人體自身不能合成或合成的量不足 ,必須通過食物供應(yīng)的氨基酸。如建立 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型；興起重組 DNA技術(shù)；人類基因組研究 黃金時(shí)期（本世紀(jì)初 —）：后基因組時(shí)期。 2．生物化學(xué)經(jīng)歷了哪幾個(gè)發(fā)展階段？各個(gè)時(shí)期研究的主要內(nèi)容是什么？試舉各時(shí)期一二例重大成就。1．什么是生物化學(xué)？它主要研究哪些內(nèi)容？ 研究活細(xì)胞和有機(jī)體中存在的各種化 學(xué)成分及其所參與的化學(xué)反應(yīng) —生命現(xiàn)象化學(xué)基礎(chǔ)的一門科學(xué)。 信息生物化學(xué)：包括核酸的生物合成，蛋白質(zhì)的生物合成，物質(zhì)代謝與基因表達(dá)的調(diào)控等。如確定了生物體內(nèi)主要的物質(zhì)代謝途徑；發(fā)現(xiàn)了多種激素、必需氨基酸 ,必需脂肪酸和多種維生素 深入發(fā)展階段 (20c中葉 20c末 )：分子生物學(xué)時(shí)期。 蛋白質(zhì)的稀有氨基酸：非編碼 氨基酸，標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的衍生物。 氨基酸等電點(diǎn)（ pI）：解離成陰、陽(yáng)離子的程度及趨勢(shì)相等，氨基酸主要為兼性離子，溶液凈電荷為零時(shí)溶液 pH?？芍貜?fù)測(cè)定多肽鏈 N端氨基酸排列順序，是氨基酸自動(dòng)測(cè)序的基礎(chǔ)。 肽：氨基酸通過肽鍵相連而形成的化合物。 C端：多肽鏈具游離的羧基的一端。 寡聚蛋白：二條或二條以上肽鏈 非共價(jià)結(jié)合?！?80176。 蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)：肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu)，多肽鏈本身的折疊和盤繞形成的空間結(jié)構(gòu)單元。 蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)分子內(nèi)非共價(jià)鍵連接的各自具有獨(dú)立三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽亞基的種類、數(shù)量以及各個(gè)亞基在蛋白質(zhì)分子內(nèi)的空間排布和相互作用。 波爾效應(yīng)： CO2降低血紅蛋白對(duì)氧親和力（ CO2濃度的增加降低細(xì)胞內(nèi)的 pH，血紅蛋白結(jié)合 H＋和 CO2使得血紅蛋白對(duì)氧親和力下降） 蛋白質(zhì)變性：理化因素作用下 ,蛋白質(zhì)分子內(nèi)的二硫鍵和非共價(jià)鍵被破壞 ,分子內(nèi)部原有的高度規(guī)律性的空間排列發(fā)生變化，天然構(gòu)象發(fā)生變化 ,引起蛋白質(zhì)理化性質(zhì)和活性的改變（原有性質(zhì)發(fā)生部分或全部喪失）。 肌紅蛋白：由一條多肽鏈（ 153 個(gè)氨基酸殘基）和一個(gè)血紅素輔基（ hemeprostheticgroup）組成的能結(jié)合氧并使氧在肌肉內(nèi)迅速擴(kuò)散的球狀蛋白質(zhì)。 鹽溶：稀濃度中 性鹽使蛋白質(zhì)表面同性電荷增加，增加蛋白質(zhì)分子間的排斥 ,同時(shí)增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子與水分子間的作用 ,而使蛋白質(zhì)溶解性增加。 超濾：利用 壓力或離心力使小分子溶質(zhì)通過半透膜而蛋白質(zhì)被截留在膜上而分離的一種技術(shù)。 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳：通過變性劑十二烷基硫酸鈉（ SDS）作用使蛋白質(zhì)變性并與 SDS 結(jié) 合，形成均帶負(fù)電（ SDS 帶負(fù)電），荷質(zhì)比相同的 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物，利用帶孔凝膠珠作基質(zhì)，按照分子大小電泳分離蛋白質(zhì)或其他分子混合物的一種技術(shù)。 ?什么是凱氏定氮法？ 元素組成特點(diǎn)：由 CHONSPISe 等元素組成 :C（ 50~55%）、 H（ 6~8%）、 O（ 20~23%）、 N（ 15~18%）、 S（ 0~4%）、 ?；氮元素含量平均約 16%。 N末端分析： Sanger法、丹磺酰氯法（有很強(qiáng)熒光 ,靈敏度高）、 Edman法、氨肽酶法（外肽酶：肽鏈外切酶） C末端分析：羧肽酶法、與苯甲醛沉淀等。 酸水解法： 6mol/LHCl110℃ 加熱回流 16~24h,完全水解， Trp 被破壞， Gln,Asn酰胺基水解變成 Glu,Asp(Glx,Asx)近年來用甲基磺酸代替鹽酸。 結(jié)構(gòu)有幾種基本類型 ?各有何特點(diǎn) ? 基本類型