【正文】 致謝人： 2020 年 5 月 20 日 。非常感謝劉老師的耐心指導(dǎo)，此外，本論文的完成還要感謝任光云老師、曾祥燕老師、邱海洪老師以及 等同學(xué)對我做試驗期間 給予的照顧和幫助。但是伴隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，相信會有更多高新的技術(shù)用于靈芝多糖的提取和分離，靈芝的應(yīng)用價值也會越來越具有前景。所以我們可以考慮用其他的有效提取法來代替原有的提取法，近年來半仿生提取法逐漸活躍在藥學(xué)界的視野， 半仿生提取法是根據(jù)藥物的有效成分由未知到已知的實現(xiàn)，比較符合靈芝多糖提取的初衷 ,都是由結(jié)果出發(fā)，逆向思維， 將藥物有整體和分子相結(jié)合 ,并且能夠建立模擬口服藥物和藥物流經(jīng)腸胃的運轉(zhuǎn)過程，具有很強的臨床性。取相同的 靈芝粉 ，分成 3 份，按 優(yōu)化后的工藝 組合條件進(jìn)行熱 水提取靈芝多糖，實驗所得的數(shù)據(jù)結(jié)果見表 。從正交實驗結(jié)果可以得出：最佳組合為 B2C2A1，即 紫外線照射時間 是 35 分鐘 ，物料粒度是 80 目 ， 烘烤溫度 是 75℃ 。 正交試驗結(jié)果分析 正交試驗結(jié)果直觀分析 用烘烤溫度、物料粒度、紫外線的照射時間作為本次實驗的 3 個考查因素，按 L9(34)正交表進(jìn)行正交試驗設(shè)計， 見表 。 紫外照射時間與 靈芝多糖提取率 的關(guān)系 表 紫外照射與靈芝多糖提取率關(guān)系表 紫外線照射時間（ min） 25 30 35 40 45 A1 A2 A3 OD 平均值 靈芝多糖得率（ %） 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 13 圖 紫外照射時間與靈芝多糖提取率關(guān)系圖 根據(jù) 測定結(jié)果見表 ， 縱坐標(biāo)為靈芝粉中的靈芝多糖提取率，以紫外線照射時間為橫坐標(biāo)作出相應(yīng)曲線（圖 ）。但是不斷提高的的烘烤溫度沒有利于靈芝多糖的溶出，反而具有一定的抑制作用，而且，烘烤溫度不斷增大則對靈芝多糖的生理活性有非常不利的影響，可能還會溶出其他與試驗無關(guān)成分，增加后續(xù)分離操作的難度，因此， 最佳烘烤溫度應(yīng)該選 擇 80℃ 較好。分析圖可以得出結(jié)果，在 20～ 160ug 范圍內(nèi)，葡萄糖 的質(zhì)量與靈芝多糖的吸光度值具有一定的相關(guān)線性關(guān)系。 計算見公式 。用移液器移取 mL 靈芝多糖試液，然后遵循葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制步驟進(jìn)行顯色反應(yīng)，用紫外分光光度計測其在 490 nm 處的OD 值，并且從葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的圖中求出供試液的葡萄糖質(zhì)量 M2，換算因素公式 f=M1/M2(M1 為供試液中多糖的實際質(zhì)量 50 mg， M2 為測量出的供試液的葡萄糖質(zhì)量） [25]。 配制 5%的苯酚溶液 精確稱量 5 g 苯酚，用容量刻度為 100ml 的移液管（或滴定管）量取 95 mL的水加入苯酚中，均勻連續(xù)的攪拌，使苯酚完全溶解后，將配置好的溶液轉(zhuǎn)入棕色細(xì)口瓶中，放到冰箱備用。 (3) 紫外線的照射時間與（酶法提?。╈`芝多糖提取率之間的關(guān)系 精確稱量干燥的靈芝粉 g，將其置于 250 mL錐形瓶中，然后將盛有 物料的錐形瓶放入烘箱設(shè)備中適當(dāng)?shù)臏囟群婵疽欢〞r間，取出錐形瓶，將處理后的盛有靈芝粉的錐形瓶降至室溫，然后將處理后的并稱取好的靈芝粉過最佳的目篩，將錐形瓶放于紫外線下照射（ 25 min， 30 min， 35 min， 40 min， 45 min），然后將樣品取出，按料液比 1:15加入適量的緩沖液 （ pH=）， %的纖維素酶，纖維素酶降解 80分鐘，然后按照上述提取工藝流程得到靈芝粗多糖，計算得率，探究紫外照射時間與靈芝多糖的提取率之間的關(guān)系。 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 6 2 材料與方法 實驗試劑與材料 試劑與材料可以見表 。 靈芝多糖的提取 近年來很多學(xué)者在靈芝多糖的提取上做了大量的研究，由曹澤虹 [16]等做的酶法提取靈芝多糖的工藝研究實驗可知：纖維素酶的酶量為 %，纖維素酶的降 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 5 解溫度為 55 ℃ ，時間 80 分鐘， ；果膠酶的酶含量為 %，用果膠酶酶解溫度為 40 ℃ ，果膠酶的降解時間為 80分鐘， ；植物蛋白水解酶的酶量為 %，植物蛋白酶的降解時間為 60 分鐘，酶降解溫度 55 ℃ ， 。 本論文研究的主要內(nèi)容 這部分研究靈芝子實體為原料，通過不同因素的預(yù)處理，然后利用酶法提取靈芝子實體的靈芝多糖， 最后利用紫外分光光度法測定靈芝多糖的含量。 和超濾膜的情 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 4 況下連續(xù)使用了很長一段時間也可以維持一個恒定的輸出和分離效果 [24~25]。 超聲提取是由超聲波輔助溶劑萃取 ,其特點是超聲波產(chǎn)生高速 ,強烈的空化效應(yīng)和混合功能損傷的細(xì)胞 ,能夠縮短提取的時間。 近年來，一些人提出的 “仿生提取 ”。 近年來 ,超聲波、微波和酶技術(shù) ,在生物活性成分的提取的應(yīng)用逐漸增加 ,超臨界流體萃取、超濾等高新技術(shù)的發(fā)展也提供了高效、快速和更多的新技術(shù)提取靈芝多糖。因此 ,生物體的主要免疫調(diào)節(jié)機制可能是通過激活免疫反應(yīng) ,增強宿主免疫能力 ，從而實現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)功能。實驗先建立大鼠脂質(zhì)代謝的紊亂模型和預(yù)防模型，并且以血液樣品中的 TG、 HDLC、 TC 的分子 含量和大鼠體內(nèi)脂肪的沉積情況為參考目標(biāo)。 胡太平等最先證明靈芝多糖可以拮抗 NHDPH 氧化酶酶系列的酶的活性，而此種酶系能夠促進(jìn)血管壁中 O2 根據(jù)《美國中成藥藥典與治療概要》對靈芝的記錄的綱要，同樣表明了國際醫(yī)學(xué)界和藥學(xué)界非常重視靈芝多糖的研發(fā)及應(yīng)用 [6]。 因為靈芝多糖的提取率非常之低，所以靈芝多糖的價格非常的昂貴，所以為了加大高效降壓茶的有效成分靈芝多糖的產(chǎn)量，滿足社會群眾的需要，最大限度的對靈芝多糖的提取，要改善靈芝多糖的提取工藝，觀察不同的單因素實驗對靈芝多糖提取率有何影響，并且能夠最大限度的增加靈芝多糖提取率就成為了一門尤為重要的工藝 [3~4]。靈芝多糖是一種具有抗衰老、抗腫瘤以及清除自由基功能的一種非特異性免疫刺激劑 [1]。 6 主要儀器與設(shè)備 1 本論文研究的主要內(nèi)容 1 課題研究的背景和意義 Ganoderma lucidum polysaccharide(GLP)。最后紫外分光光度計測定靈芝多糖的質(zhì)量，并得出最佳的實驗條件 。 方法 :本實驗主要采用酶法提取靈芝多糖的方法，以靈芝多糖的提取率為目的，進(jìn)行各項單因素實驗探究，考察物料 烘烤溫度、物料粒度和紫外線的 照射時間 等物料預(yù)處理的條件對靈芝多糖提取的影響。 關(guān)鍵詞 : 預(yù)處理；靈芝多糖；酶法提??；紫外 可見分光光度法 邵陽學(xué)院 2020 屆畢業(yè)設(shè)計（論文） II The material pretreatment effects on enzymatic extraction of GLP (2020 Biological Engineering , Department of Biology and Chemistry Engineering, Shaoyang Abstract Objective: To find out the best material pretreatment extraction technology makes the GLP extraction yield as high as possible by studying on the extraction and purification of Ganoderma lucidum polysaccharides(GLP) from Ganoderma : To investigate the bak