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紅霉素產(chǎn)生菌的篩選與鑒定生物技術(shù)畢業(yè)論文-全文預(yù)覽

2025-09-21 21:50 上一頁面

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【正文】 可以公布論文的部分或全部內(nèi)容。 同時(shí)也向?qū)⒁獏⒓颖菊撐脑u(píng)閱、答 辯的各位專家和教授表示我最真摯的謝意,你們的寶貴意見將是我發(fā)展與進(jìn)步的動(dòng)力。 同時(shí),我要感謝我們學(xué)院給我們授課的各位老師以及陳瑞利老師、路志芳等各位實(shí)驗(yàn)室的老師,正是由于他們悉心指導(dǎo)和幫助,我們才會(huì)有比較準(zhǔn)確的試驗(yàn)數(shù)據(jù),才為論文得以順利完成提供了保證。有時(shí)我們占用了導(dǎo)師的休息時(shí)間來給我們指導(dǎo)論文他都好不抱怨。 20 參考文獻(xiàn) [1] 范代娣 , 陳斌 , 尚龍安 . 紅霉素發(fā)酵工藝優(yōu)化研究 [J]. 生物工程學(xué)報(bào) , 1999, 12(5): 106110. [2] 肖懷秋 , 李玉珍 . 微生物培養(yǎng)基優(yōu)化方法研究進(jìn)展 [J]. 釀酒科技 , 2020, 21(1): 9094. [3] 江蘇新醫(yī)學(xué)院 . 中藥大辭典 [M]. 上海 : 上海科學(xué)技術(shù)出版社 , 1986: 22712272. [4] 左勇 , 李楊 , 謝暉 , 等 . 紅霉素?fù)u瓶發(fā)酵控制條件的優(yōu)化 [J]. 四川理工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 2020(4): 1720. [5] 左勇 , 李楊 , 任永利,等 . 紅霉素產(chǎn)生菌的誘變及培養(yǎng)基優(yōu)化研究 [J]. 四川理工學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 2020(1): 1418. [6] 張宇,龔文靜,沈以凌,等 . 發(fā)酵液中紅霉素含量的測(cè)定 [M]. 中國釀造 : 中國輕工業(yè)出版社 , 2020( 5) : 137140. [7] 張志宏,李東霄 , 常靜玲 . 紅霉素菌渣生物改性研究 [M]. 河南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 2020( 5) : 168170. 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[19] 徐馳 .化工過程優(yōu)化中主要工藝影響因素的研究 [J]. 計(jì)算機(jī)與應(yīng)用化學(xué) , 1998(1): 3336. [20] 李嘯 , 陳長華,李友元 . 紅霉素 A 發(fā)酵條件的優(yōu)化 [J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志 , 2020, 37(6): 381383. 22 致謝 時(shí)光荏苒,轉(zhuǎn)眼我已經(jīng)要畢業(yè)了,在學(xué)校的這幾年我覺得我成長了很多,學(xué)會(huì)了很多東西。 19 結(jié)論 本次課題的實(shí)驗(yàn)是在安陽工學(xué)院實(shí)驗(yàn)室完成,從接種到發(fā)酵再到后來的菌種篩選及鑒定都有作者和老師共同完成。在實(shí)驗(yàn)過程中我們也許會(huì)遇到一些難以避免的問題,比如發(fā)酵過程中的污染問題、溶氧量的控制問題,在紅霉素的生產(chǎn)過程中可能會(huì)出現(xiàn)紅霉素降解問題,還有其含有的雜質(zhì)可能會(huì)影響紅霉素產(chǎn)量和質(zhì)量。也可以用酚紅水溶液作為指示劑 ,其變色范圍 ,顏色變化為由黃到紅。我們?cè)谂囵B(yǎng)基中加入乙酰甲基甲醇,看微生物能否分解這種代謝產(chǎn)物來判定微生物的種類。這說明菌株 A 的培養(yǎng)液 16 中含有有機(jī)酸, B、 C培養(yǎng)液中沒有產(chǎn)生有機(jī)酸。 淀粉水解試驗(yàn)結(jié)果 菌種 A B C 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 — — — 注: —表示沒有淀粉水解能力 ( 6)甲基紅試驗(yàn) 設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)的目的是想看看菌株是否能分解葡萄糖產(chǎn)酸。淀粉的特性是遇碘變藍(lán),但 淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)。氣體的產(chǎn)生可由糖發(fā)酵管中倒立的杜氏小管中的氣泡的有無來證明。 ( 4)糖、醇、糖苷類碳源的分解試驗(yàn) 不同的細(xì)菌在分解糖或醇 (如葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、甘油 )的能力上 15 有很大差異。 唯一氮源實(shí)驗(yàn)結(jié)果 菌種編號(hào) 硫氨酸 酵母膏 硝酸胺 蛋白胨 硝酸鉀 A +++ +++ ++ ++ + B + +++ +++ ++ + C ++ + + — — 上表說明 A和 B能夠利用硫酸按、酵母膏、硝酸按、蛋白胨和硝酸鉀作為唯一氮源 。所以我們將 A、 B和 C接種到這種特定的含各種不同氮源的碳源試驗(yàn)培養(yǎng)基上后 ,各培養(yǎng)基中菌株的生長情況如下表所示 : 14 唯一碳源實(shí)驗(yàn)結(jié)果 菌種編號(hào) 葡萄糖 乙醇 蔗糖 DL甲硫氨基酸 檸檬酸 草酸 A +++ +++ ++ + + + B +++ +++ +++ ++ — — C ++ + ++ — — — 上表說明 A 能夠利用葡萄糖、乙醇、蔗糖、 DL甲硫氨基酸、檸檬酸和草酸作為唯一碳源 。在固體培養(yǎng)基平板的表面、中部和底部都有生長 ,這表明 C 為兼性厭氧菌。在固體培養(yǎng)基平板的表面、中部和底部都有生長 ,這表明 B 為兼性厭氧菌。在固體培養(yǎng)基平板的表面、中部和底部都有生長 ,這表明 A 為兼性厭氧菌。取培養(yǎng)后的該培養(yǎng)液 5mL 再接種馴化培養(yǎng)基中 ,紅霉素濃度為 13 200mg/L,在上述條件繼續(xù)下培養(yǎng)。 5 號(hào)菌株即為正交實(shí)驗(yàn)所得到的最優(yōu)結(jié)果 ( 4) 小結(jié): 正交實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn): 實(shí)驗(yàn)次數(shù)太多,費(fèi)時(shí)、費(fèi)事; 不做重復(fù)實(shí)驗(yàn)就無法估計(jì)誤差; 無法區(qū)分因素的主次; 正交實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn): 試驗(yàn)點(diǎn)代表性強(qiáng),試驗(yàn)次數(shù)少; 不需要重復(fù)實(shí)驗(yàn),就可以估計(jì)實(shí)驗(yàn)誤差; 可以分清因素的主次; 可以使用數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果,提出好的條件; 12 試驗(yàn)號(hào) A B C D 生物效價(jià)( ug) 1 1 1 1 1 4410 2 1 2 2 2 4464 3 1 3 3 3 3221 4 2 1 2 3 3100 5 2 2 3 1 4702 6 2 3 1 2 4649 7 3 1 3 2 3321 8 3 2 1 3 3617 9 3 3 2 1 3867 K1 4032 3610 4225 4326 35351 K2 4150 4261 3810 4145 K3 3602 3912 3748 3313 R 548 651 477 1013 因素主次: DBAC 最優(yōu)方案 : A2B2C3D1 菌種的初篩與馴化 如果通過自然篩選獲得高效菌種需要較長的時(shí)間,所以通過人工富集培養(yǎng)分離,篩選出降解能力強(qiáng)的高效菌株,是篩選鑒定過程中獲取適宜菌種的有效途徑。本題中: DBAC,即因素的影響程度為:氯化鋰使用方法>超聲波誘變時(shí)間 >超聲波功率>氯化鋰濃度。在正交實(shí)驗(yàn)中,氯化鋰濃度分別選 %、 %、 %三個(gè)水平,并分別采用兩種方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 ( 2)僅 LiCl 誘變法定水平 Licl 誘變法定水平的實(shí)驗(yàn)采用兩種方法:一是在培養(yǎng)基中加入不同濃度的氯化鋰;二是用不同濃度的氯化鋰處理孢子后在培養(yǎng)。 B.發(fā)酵罐培養(yǎng) 種子培養(yǎng)的步驟與搖瓶培養(yǎng)相同,發(fā)酵培養(yǎng)就是將上面培養(yǎng)好的二級(jí)種子接種于 3L發(fā)酵罐自動(dòng)發(fā)酵,同時(shí)控制發(fā)酵罐的發(fā)酵溫度、 PH、 接種量、攪拌速度和溶解氧等條件,培養(yǎng) 16h。提取方法是在乙酸丁酯及水溶液(乙酸緩沖液)中反復(fù)萃取。經(jīng)過預(yù)處理的發(fā)酵液便可進(jìn)行過濾去除菌絲體及沉淀的蛋白質(zhì)。尤以蛋白質(zhì)和油等的存在,在溶媒萃取時(shí)將產(chǎn)生嚴(yán)重的乳化現(xiàn)象。發(fā)酵過程中應(yīng)嚴(yán)格控制發(fā)酵溫度、發(fā)酵液還原糖量、 pH 值、溶氧量及發(fā)酵液粘度等,以便紅色糖多孢菌能夠大量合成紅霉素并排至胞外。首選于軍團(tuán)菌肺炎、支原體肺炎、白喉帶菌者、沙眼衣原體所致的嬰兒肺炎及結(jié)腸炎;也可用于扁桃體炎、中耳炎、鼻竇炎、大葉性肺炎等。 紅霉素的性狀 紅霉素為白色或類白色的結(jié)晶或 粉末 ;無臭,味苦;微有引濕性。紅霉素在臨床上的應(yīng)用也很廣泛, 主要用于呼吸道感染、皮膚與軟組織感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染及胃腸道感染等。紅霉素堿能和有機(jī)酸或無機(jī)酸類結(jié)合成鹽,其鹽類易溶于水 [7]。在水中的溶解度為 2mg/ml( 25℃ 左右),它隨著溫度的升高而減少。發(fā)酵過程中可能會(huì)產(chǎn)生某些雜質(zhì),通過簡(jiǎn)單的預(yù)處理可能很難完全去除,會(huì)導(dǎo)致紅霉 A、 B、 C的分離 效果不好,而常用的預(yù)處理方法在萃取紅霉素時(shí)又會(huì)造成很大損失。在發(fā)酵過程中,盡管對(duì)環(huán)境的參數(shù),如發(fā)酵溫度、 pH值、溶解氧濃度( DO)、 3 接種量等都可以控制得很好,但是由于微生物生長過程是微觀的、不能隨時(shí)掌握,發(fā)酵過程中的關(guān)鍵變量如總糖濃度、菌絲濃度不可在線測(cè)量,使得發(fā)酵過程的控制問題變得很復(fù)雜 [3]。所以近年來我們?cè)诩t霉素高產(chǎn)菌株的篩選方面收效不大。 總體研究現(xiàn)狀 在人類
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