纖維素酶輔助提取仙鶴草中總黃酮的研究畢業(yè)論文-全文預(yù)覽
【正文】 的抑制乙酰膽堿酯酶、抗炎活性。 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 2 1 實驗部分 原料、儀器和試劑 原料 仙鶴草 （采自 云南大姚 ）。 黃酮的提取 稱取 仙鶴草 粉 ， 置于 150ml的錐形瓶中 ， 加入 一定 pH 值的 HAcNaAc 緩沖溶液，加入一定用量的纖維素酶，搖勻 并蓋上錐形瓶塞 后置于一定溫度下酶解 ， 一段時間后加入 70%乙醇， 在 50℃ 下恒溫浸提 2h 后 ，過濾、洗滌，合并濾液， 定容 于 50mL 容量瓶中，得 提取 液。如果溶液顏色顯亮黃色，則說明提取液中含有黃酮。如果溶液顏色顯楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 3 墨綠色，則說明提取液中含有黃酮。如果溶液顏色顯橙紅色，則說明提取液中含有黃酮。以試劑空白作參比，在 440～ 560nm 之間測定絡(luò)合物吸光度，確定最大吸收峰波長（此后的吸光度均在此最大波長下測定）。 單因素實驗 酶解溫度對 仙鶴草 總 黃酮 提取率 的影響 加入 纖維素酶使其濃度為 ，分別 在 40℃ 、 45℃ 、 50℃ 、 55℃ 、 60℃ 下 酶解 ，按 的 方法操作 ，得提取液， 按 操作方法顯色后，測定出試液的吸光度， 平行實驗三次，根據(jù)回歸 方程， 計算總黃酮提取率 。 正交實驗 在單因素基礎(chǔ)上， 設(shè)計 正交實驗，并 對結(jié)果進行分析。 表 21 黃酮的定性鑒定結(jié)果 試劑 1%Al(NO3)3 5NaOH Fe3+ 顯色現(xiàn)象 黃色 亮黃色 墨綠色由表 21 可知提取液與各顯色劑反應(yīng)的現(xiàn)象與黃酮 類化合物的顯色 相吻合 [11]，故可以說明 仙鶴草 提取液中含有黃酮。 圖 22 標(biāo)準(zhǔn)曲線 線性回歸方程： A= + , R= 單因素實驗結(jié)果 酶 解溫度 對 仙鶴草 總 黃酮 提取 率的影響 按 操作，酶解溫度對 仙鶴草總黃酮 提取率 的影響結(jié)果 見圖 23。 酶解時間對 仙鶴草 總 黃酮 提取 率的影響 按 操作， 酶解溫度為 50℃ 時， 酶解時間對 仙鶴草總黃酮 提取 率的影響結(jié)果，見圖 24。 20 40 60 80 100 120 140 1608 .48 .58 .68 .78 .88 .99 .09 .19 .2提取率/%時 間/h4 .0 4 .5 5 .0 5 .5 6 .07 .27 .47 .67 .88 .08 .28 .48 .68 .89 .09 .2提取率/%pH值楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 8 圖 25 溶液酸堿性對 仙鶴草總 黃酮提取率的影響 由圖 25 可知當(dāng) pH小于 時，隨著 pH 的增加黃酮 提取 率也逐漸增大，當(dāng) pH= 時黃酮 提取率最高 ，可達 %， 說 明 pH= 時纖維素酶的活力最高。 正交實驗 [15] 根據(jù) 單因素的試驗結(jié)果，以提取液中黃酮類化合物的提取率為考察指標(biāo)，選定四因素三水平進行正交試驗。 表 24 最佳 提取條件 組合實驗結(jié)果 吸光度 黃酮提取率（%） 黃酮平均提取率（%） 0. 237 10.78 0.231 10.52 .66 0.235 10.69 由此可知，采用酶解法與醇提相結(jié)合，仙鶴草黃酮類化合物得率較高，因此在 pH 為 的HAcNaAc 緩沖溶液、 70%乙醇、 50℃ 、浸提 2h 的恒定條件下，纖維素酶解法提取仙鶴草總黃酮的最佳酶解條件為：酶解溫度 50℃ ，酶濃度 ， pH為 ，酶解時間為 2h，黃酮的平均提取率為 %。 用酶解 預(yù)處理后，再用乙醇提取， 仙鶴草 中 黃酮類 提取 率比直接醇提提高了 %。 導(dǎo)師們的高深精湛的造詣與嚴(yán)謹(jǐn)求實的治學(xué)精神，將永遠(yuǎn)激勵著我。 3 結(jié)論 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 14 本實驗利用酶解法與醇提相結(jié)合的提取方法，通過改變酶解 pH 值、酶濃度、酶解時間、以及酶解溫度，考查了酶解各因素對 仙鶴草 總 黃酮 提取 率的影響，最后通過正交實驗確定最佳提取條件：用 70%乙醇溶液作提取溶劑，酶解溫度 50℃ ，酶解濃度 ， pH 為 ，酶解時間為 2h， 比在一定條件下單獨醇提 仙鶴草 總 黃酮 提取 率提高了 %，效果較好，提取條件溫和 ， 可 為有效利用 仙鶴草 資源提供 一定參考 [15]。 表 25 直接醇提法實驗結(jié)果 吸光度 黃酮提取率（%） 黃酮平均提取率（%） 0. 175 809 0.171 7.91 8.22 0.188 8.65 直接醇提法與酶解 醇提法效果的比較 醇提法與酶解 醇提法在相同條件： pH 為 ，時間為 2h，溫度 50℃ ；不同條件：醇提法不加纖維素酶，酶解 醇提法 的酶濃度 mg/mL 條件下，比較結(jié)果如表 26。 1 2 3 4 58 .68 .89 .09 .29 .49 .69 .8提取率/%酶濃 度/(mg/ml)楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 9 表22 因素水平表 水平 A酶解溫度/℃ B pH值 C酶解時間/h D酶濃度/( mg/mL) 1 45 .5 1 0.20 2 50 .0 150.30 3 55 .5 2 0.40 表 23 正交試驗結(jié)果 試驗序號 水平 總黃酮提取率/%___A_B_C_D___1_1_1_2_2_5__2_1_2_1_1_8.90_楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 10 _3_1_3_3_3_9.10__4_2_1_1_3_0__5_2_2_3_2_10.73__6_2_3_2_1_0__7_3_1_3_1_7.85__8_3_2_2 3 0 _9 3_3_1_2_8.15__8.883 K3 8.400 9.05 6178.96 R=KmaxKmix 1.343 08871.06 0.60 楚雄師范學(xué)院本科論文（設(shè)計） 11 K1_9.250_8.733_9.227_9.543_最佳組合 A
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