【正文】 / / 乙酰甲基甲醇試驗(yàn)（ ） / / 甲基紅試驗(yàn)（ ） / / 硫化氫產(chǎn)生 / / 水解 七葉靈 / / 厭氧生長(zhǎng) / / 卵磷脂酶測(cè)定 / / 注： + 表示反應(yīng)為陽性； 表示反應(yīng)為陰性； d 表示 1189 菌株為陽性； / 表示沒有數(shù)據(jù)報(bào)道 從表中可以看出，菌株 S2 生理生化實(shí)驗(yàn)結(jié)果和 邊緣 假單胞菌 (） 基本一致，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)、革蘭氏染色、運(yùn)動(dòng)狀態(tài)、 16S rDNA 等情況，斷定菌株 S2 為一株 邊緣 假單胞菌 (） 。 經(jīng)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，其中高錳酸鉀（濃度為 1%、 %、 %、%）均對(duì)菌株 S S2 無作用，其余 3 種抗生素對(duì)病原細(xì)菌的抑制作用均有較好的相關(guān)性（見表 11），相關(guān)系數(shù) 之間；大部分藥劑均屬于敏感水平，抑菌圈大小順序依次為：菇保 苯扎溴銨消毒液 甲酚皂。 表 13 抑菌劑隨時(shí)間的效果變化 抗生素 菌株 0h 1h 2h 菇保 S1 7 13 10 10 5 S2 8 15 17 10 5 甲酚皂 S1 2 1 S2 8 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 22 苯扎溴銨消毒液 S1 11 3 S2 7 注：抑菌圈直徑單位為 mm。導(dǎo)師淵博精深的學(xué)識(shí)才華、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度、兢兢業(yè)業(yè)的科研精神、廣博的氣度胸襟以及為人師表的學(xué)者風(fēng)范使我受益匪淺。 。我對(duì)導(dǎo)師的感激之情溢于言表，在此，謹(jǐn)向恩 師衷心道一聲：謝謝 ! 感謝昆山正興食用菌有限公司 提供研究菌種和條件。從試驗(yàn)設(shè)計(jì)到試驗(yàn)具體工作以至論文的撰寫，每一步都凝聚著導(dǎo)師的心血。如圖 。結(jié)果見表 、 。 菌株 S2 的生理生化特征 常規(guī)生理生化測(cè)試表明，菌株 S2 氧化利用葡萄糖，不能發(fā)酵葡萄糖乙醇產(chǎn)酸，接觸酶 和 氧化酶 均為陽性 。在培養(yǎng)基培養(yǎng) 24h， CTE722B為半透明、淡黃色的圓形菌落，表面隆 起，邊緣略粗糙； CTE722C 為半透明、乳白色的圓形菌落，邊緣整齊光滑； CTE722B 的菌落直徑較 CTE722C 的大。 在菌絲生長(zhǎng)階段，若在無菌條件下去除黃色水珠，會(huì)大幅度降 低后期菇體的污染情況以及推遲出現(xiàn)黃色粘稠液體的時(shí)間。 讀取結(jié)果 ， 以所測(cè)抑菌圈的平均直徑 (mm)來表示藥劑對(duì)細(xì)菌的抑菌力。 取適量待檢菌株置于藥敏培養(yǎng)液中，用無菌加樣滴管取藥敏試驗(yàn)菌液加入藥敏試驗(yàn)孔中，每孔加試驗(yàn)菌液 150μl。 反應(yīng)條件： 80℃， 15 min PCR 擴(kuò)增 使用 TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit（ Code ），進(jìn)行 PCR擴(kuò)增目的片段。如實(shí)驗(yàn)菌在半固體培養(yǎng)基中產(chǎn)氣，氣泡將穿刺線上的生長(zhǎng)物擠亂。對(duì)生長(zhǎng)快的細(xì)菌應(yīng)培養(yǎng)一天后觀察。 用直引穿刺接種試驗(yàn)菌于半固體培養(yǎng)基內(nèi)，于適溫培養(yǎng)。 精氨酸雙水解反應(yīng) 培養(yǎng)基：蛋白胨 1g，酚紅 ，牛肉膏 5g， L精氨酸鹽 10g， K2HP04 ，蒸餾水1000ml，瓊脂 6g， ，分裝試管，高度約 45cm。 卵磷脂酶測(cè)定 培養(yǎng)基：無菌條件下取卵黃加等量的生理鹽水，搖勻后，取 10ml 上述懸液加入到融化的、約 5055℃的 200ml 牛肉膏蛋白胨中，混合均勻后倒人培養(yǎng)皿內(nèi)。凡測(cè)定菌在合有碳水化合物培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)情況明顯超過空白基礎(chǔ)培養(yǎng)基的生長(zhǎng)情況者為陽性。 碳源的利用 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 7 培養(yǎng)基 ： (NH4)2SO4 ， NaH2PO4 ? H2O ， K2HPO4 ， MgSO4 ? 7H2O ，CaCl2 ? 2H2O ，蒸餾水 1000ml，含碳化合物 ％， pH 177。每株菌做 3 個(gè)重復(fù)，另留兩管不接種作對(duì)照。平板呈藍(lán)黑，菌落四周圍如不變色或移開菌落后摘加新碘液，菌落下瓊脂仍不變色，表示淀粉水解陽性；如變色則為陰性。 若細(xì)菌未生長(zhǎng)，則或是不在明膠培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，或是基礎(chǔ)培養(yǎng)基不適宜。于 20℃溫箱中培養(yǎng)， 14 和 30d 在 20℃以下的室溫觀察茵的生長(zhǎng)情況和明膠是否液化。濃縮的吲哚和試劑反應(yīng)，乙醚層出現(xiàn)玫瑰紅色，此反應(yīng)為陽性，反之為陰性。可將培養(yǎng)液置 4850℃水浴中處理 2h 充分搖動(dòng)，在 4h 內(nèi)出現(xiàn)紅色者為陽性反應(yīng)。腸桿菌科的菌要求在 37℃培養(yǎng) 4d 檢查。 色素的產(chǎn)生 修改金氏 (King)等培養(yǎng)基配方如下： 金氏等 A培養(yǎng)基 金氏等 B培養(yǎng)基 蛋白胨 2g 2g K2SO4 1g ― 甘油 1g 1g MgCl2 ― K2HPO4 ― MgSO4?7H20 ― 瓊脂 2g 2g 蒸餾水 100ml 100ml 調(diào) PH 為 ， 用新鮮菌種按種上述兩種培養(yǎng)基上，于 2830℃培養(yǎng) 14d 觀察。 病原菌的生理生化性狀 參照文獻(xiàn) [5,7,8,9] 葡萄糖氧化發(fā)酵作用的測(cè)定 本試驗(yàn)采用休和利夫森二氏培養(yǎng)基，其配方如下：蛋白胨 2g， NaCl 5g， K2HPO4 ，葡萄糖 10g，蒸餾水 1000ml， 1％溴麝香草酚藍(lán)水溶液 3ml， 用接種環(huán)挑取少量菌種于試管中培養(yǎng) 2448h。 培養(yǎng) 24h 后，挑去出現(xiàn)的單菌落，采用平板劃線分離法，進(jìn)行 病原菌的分離純化，純化培養(yǎng)菌株 2 個(gè)，分別記為： S S2。 發(fā)病癥狀發(fā)病的菇體先在菌蓋表面產(chǎn)生褐色斑塊 , 隨著菇體 的生長(zhǎng) , 褐斑逐漸擴(kuò)大 , 深入菌蓋 , 直至整個(gè)子實(shí)體全部變褐至黑褐 , 而萎縮死亡 , 最后腐爛。 癥狀染病菇畸形、褐色 , 典型特征是菌蓋歪斜 , 菇柄基部稍膨大 , 但不腐爛 , 逐漸萎縮、干枯 , 發(fā)病嚴(yán)重時(shí) , 菌柄全部變褐色。 細(xì)菌性軟腐病主要危害平菇、金針菇 、杏鮑菇 [4], 極為嚴(yán)重。 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 2 常見細(xì)菌病害 [3] 細(xì)菌性斑點(diǎn)病 , 又叫細(xì)菌性褐斑病 ,主要危害蘑菇和平菇。此后 ,有關(guān)細(xì)菌性斑點(diǎn)病的研究向深度和廣度展開。多年來 , 我們研究對(duì)造成杏鮑菇病害的細(xì)菌對(duì)指導(dǎo)食用菌生產(chǎn)具有一定的現(xiàn)實(shí)意義 , 對(duì)提高杏鮑菇栽培的產(chǎn)量、質(zhì)量和效益發(fā)揮了很大作用。 變性 ................................................................................................................................ 8 PCR 擴(kuò)增 ....................................................................................................................... 8 測(cè)序 ................................................................................................................................. 8 抑菌劑的篩選 ....................................................................................................................... 9 3．結(jié)果與分析 ................................................. 10 病原菌的固體培養(yǎng)特征 ..................................................................................................... 10 病原菌的個(gè)體形態(tài)特征 ..................................................................................................... 11 16S RDNA 序列分析 ........................................................................................................... 13 菌株 S1 的 16S rDNA 序列分析 .................................................................................. 13 菌株 S2 的 16S rDNA 序列分析 .................................................................................. 14 病原菌的生理生化性狀 ..................................................................................................... 17 菌株 S1 的生理生化特征 ............................................................................................. 17 菌株 S2 的生理生化特征 ............................................................................................. 18 抑菌劑的篩選 ..................................................................................................................... 20 參考文獻(xiàn) ...................................................... 23 致謝 ...................................................... 24 常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 1 1． 引言 課題研究背景 杏鮑菇 Pleurotus eryngii 日名“雪茸”隸屬于傘菌目 (AgaricaIes)，側(cè)耳科 (Pleurotaceae)，側(cè)耳屬 (Pleurotus)。 病原菌的生理生化性狀 ....................................................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。 常見細(xì)菌病害 ....................................................................................................................... 2 課題主要研究?jī)?nèi)容 ............................................................................................................... 2 2. 材料與方法 .................................................. 3 主要儀器和培養(yǎng)基 ............................................................................................................... 3 主要儀器 ......................................................................................... 錯(cuò)誤 !未定義書簽。常熟理工學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） I 關(guān)于食用菌工廠化生產(chǎn)污染菌的研