【導讀】從杏鮑菇工廠中患病的杏鮑菇上分離到了2個菌株，接種至種包中，產(chǎn)生了同樣的病變。根據(jù)革蘭氏染色和生化檢驗結果，初步鑒這兩個菌株為假單胞菌屬。進一步對其生理生化特性，分析16SrRNA序列，鑒定S1為Pseudomonasputida，S2為

　　

【正文】 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 2680 2680 100% 100% Pseudomonadaceae bacterium KVD170023 16S ribosomal RNA gene, partial sequence gb|| Pseudomonadaceae bacterium KVD170025 16S ribosomal RNA gene, partial sequence gb|| Pseudomonadaceae bacterium KVD170026 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 2680 2680 100% 100% Pseudomonas sp. JCM 5405 gene for 16S ribosomal RNA, partial sequence 2676 2676 100% 99% 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 16 Uncultured sediment bacterium 16S rRNA gene, clone 28526 2676 2676 100% 99% Pseudomonas fluorescens gene for 16S rRNA, partial sequence, strain: NBRC 15841 2675 2675 100% 99% Pseudomonas sp. BIHB 1312 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 2675 2675 100% 99% Pseudomonas fluorescens strain LMG 14677 16S ribosomal RNA gene, partial sequence 2675 2675 100% 99% 結果： 根據(jù)以上各個結果， 得出： S1 菌株為假單胞菌屬 病原菌的生理生化性狀 菌株 S1 的生理生化特征 常規(guī)生理生化測試表明，菌株 S1 氧化利用葡萄糖，不能發(fā)酵葡萄糖乙醇產(chǎn)酸，接觸酶為陽性，氧化酶為陰性 。參照《伯杰氏 細菌鑒定手冊 第八版》和《常見細菌鑒定手冊》[7,9]，斷定菌株 S1 為假單胞菌屬的細菌。參照上述細菌分類鑒定手冊對假單胞菌的鑒定方法，進行了其他生理生化試驗，并和 Pseudomonas 的細菌進行比較，結果見表 表 菌株 S1 生理生化測定結果 實驗項目 S1 H262 biovar A 氧化分解葡萄糖 + + + 氧化酶 + + 接觸酶 + + + 乙醇氧化 / 產(chǎn)生吲哚試驗 還原硝酸鹽反應 + + + 反硝化作用 明膠液化 / 淀粉水解 精氨酸雙水解酶 + + + 乙酰甲基甲醇試驗（ ） 甲基紅試驗（ ） 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 17 硫化氫產(chǎn)生 水解七葉靈 / / 厭氧生長 d 卵磷脂酶測定 碳源的利用 D葡萄糖 + + + D蔗 糖 + / / D甘露醇 棉子糖 + + + L丙氨酸 + / / 生長溫度 41℃ 4℃ + + + 注： + 表示反應為陽性； 表示反應為陰性； d 表示 1189 菌株為陽性； / 表示沒有數(shù)據(jù)報道 從表中可以看出，菌株 S1 生理生化實驗結果和惡臭假單胞菌 (） 基本一致，結合細胞形態(tài)、革蘭氏染色、運動狀態(tài)、 16S rDNA 等情況，斷定菌株 S1 為一株惡臭假單胞菌 (） 。 菌株 S2 的生理生化特征 常規(guī)生理生化測試表明，菌株 S2 氧化利用葡萄糖，不能發(fā)酵葡萄糖乙醇產(chǎn)酸，接觸酶 和 氧化酶 均為陽性 。參照《伯杰氏細菌鑒定手冊 第八版》和《常見細菌鑒定手冊》 [7,9]，斷定菌株 S1 為假單胞菌屬的細菌。參照上述細菌分類鑒定手冊對假單胞菌的鑒定方法，進行了其他生理生化試驗，并和 Pseudomonas 的細菌進行比較，結果見表 表 菌株 S2 的生理生化測定結果 實驗項目 S2 pv. marginalis pv. pastinacae 氧化分解葡萄糖 + / / 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 18 氧化酶 + + + 接觸酶 + + + 精氨酸雙水解酶 + + + 還原硝酸鹽反應 + + + 明膠液化 + + + 乙醇氧化 / / 碳源的利用 D葡萄糖 + + + D蔗糖 + + + D甘露醇 棉子糖 + + L丙氨酸 + / / 生長溫度 41℃ + + + 4℃ 產(chǎn)生吲哚試驗 / / 反硝化作用 / / 淀粉水解 / / 乙酰甲基甲醇試驗（ ） / / 甲基紅試驗（ ） / / 硫化氫產(chǎn)生 / / 水解 七葉靈 / / 厭氧生長 / / 卵磷脂酶測定 / / 注： + 表示反應為陽性； 表示反應為陰性； d 表示 1189 菌株為陽性； / 表示沒有數(shù)據(jù)報道 從表中可以看出，菌株 S2 生理生化實驗結果和 邊緣 假單胞菌 (） 基本一致，結合細胞形態(tài)、革蘭氏染色、運動狀態(tài)、 16S rDNA 等情況，斷定菌株 S2 為一株 邊緣 假單胞菌 (） 。 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 19 抑菌劑的篩選 細菌鑒定系統(tǒng)試劑卡藥敏鑒定 根據(jù)菌種的個別生理生化特征選擇了相應的試劑卡： S1 使用的是 腸桿菌科 試劑卡， S2使用的是奈瑟菌 /嗜血桿菌科試劑卡 。結果見表 、 。 表 不同藥劑對 S1 的抑菌效果 表 不同藥劑對 S21 的抑菌效果 抗生素 結果 濃度 U 氨芐西林 耐藥 ≥64 氨芐西林 /舒巴坦 耐藥 ≥64/32 氨曲南 敏感 ≤4 頭孢哌酮 敏感 ≤8 頭孢噻肟 中敏 16 頭孢他啶 敏感 ≤4 頭孢呋肟 耐藥 ≥64 頭孢噻吩 耐藥 ≥64 頭孢吡肟 敏感 ≤4 磷霉素 耐藥 ≥512 慶大霉素 敏感 ≤2 左氟沙星 敏感 ≤1 美洛培南 敏感 ≤2 美洛西林 敏感 ≤8 呋喃妥因 耐藥 ≥256 哌拉西林 /他唑巴坦 敏感 ≤8/4 復方新諾明 耐藥 ≥16/304 阿米卡星 敏感 ≤8 頭孢曲松 敏感 ≤4 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 20 常用抗生素抗性試驗 使用工廠常用的抗生素菇保 （二氯異尿酸鈉產(chǎn)品） 、 甲酚皂、苯扎溴銨消毒液、高錳酸鉀對菌株 S S2 進行抗性試驗 。 經(jīng)檢驗發(fā)現(xiàn)，其中高錳酸鉀（濃度為 1%、 %、 %、%）均對菌株 S S2 無作用，其余 3 種抗生素對病原細菌的抑制作用均有較好的相關性（見表 11），相關系數(shù) 之間；大部分藥劑均屬于敏感水平，抑菌圈大小順序依次為：菇保 苯扎溴銨消毒液 甲酚皂。菇保的抑菌毒力最高，甲酚皂抑菌毒力最低。如圖 。 表 11 3 種消毒劑平板抑菌圈抑菌效果 藥品 濃度 S1 S2 菇保 甲酚皂 10% 3mm 3mm 5% 0 mm 2% 0 mm 1 mm 1% 0mm 0 cm 苯扎溴銨消毒液 抗生素 結果 濃度 U 強力霉素 敏感 ≤2 青霉素 耐藥 ≥4 壯觀霉素 耐藥 ≥256 頭孢噻肟 耐藥 ≥8 頭孢曲松 耐藥 ≥8 頭孢他啶 耐藥 ≥8 頭孢呋肟 耐藥 ≥2 洛美沙星 中敏 ≥ 氧氟沙星 中敏 ≥ 四環(huán)素 中敏 4 利福平 敏感 ≥8 依諾沙星 耐藥 ≥4 頭孢美唑 耐藥 ≥16 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 21 表 12 三種抗生素對菌株 S S2 的毒力測試 抗生素 S1 S2 線性方程 回歸系數(shù) 線性方程 回歸系數(shù) 菇保 Y=+ Y=+ 甲酚皂 Y=+ 苯扎溴銨消毒液 Y= Y= 取抗生素濃度為 ，求得各抑菌圈的直徑得圖 圖 3 種抗生素對病原菌的抑菌效果 為進一步觀察抑菌劑使用的效果，對抑菌劑使用一段時間后的效果進行了測定 （見表13） 。 表 13 抑菌劑隨時間的效果變化 抗生素 菌株 0h 1h 2h 菇保 S1 7 13 10 10 5 S2 8 15 17 10 5 甲酚皂 S1 2 1 S2 8 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 22 苯扎溴銨消毒液 S1 11 3 S2 7 注：抑菌圈直徑單位為 mm。 圖 菇保隨時間的抑菌效果變化 圖 甲酚皂隨時間的抑菌效果變化 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 23 圖 苯扎溴銨消毒液隨時間的 抑菌效果變化 參考文獻 [1] 呂作舟 . 食用菌栽培學 [M], 北京 :高等教育出版社 . 2020:65— 267 [2] 劉克均 . 食用菌病害研究進展 [J]. 南京 :南京農(nóng)業(yè)大學 . 世界農(nóng)業(yè) . 1991,5: 3234 [3] 張志焱 . 食用菌細菌性病害及防治 [J]. 植物醫(yī)生 . 1999,12(1):56. [4] 張繼英 . 熒光假單胞菌對食用菌的促生作用及其機理研究 [D].河南農(nóng)業(yè)大學 ,2020. [5] 東秀珠 , 蔡妙英主編 . 常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊 [M]. 北京 : 科學出版社 ,2020. [6] Holt JG. Bergey’s manual of determinative bacteriology (9th ed)[M]. Baltimore: Wiliams and Wilkins, 1994. 支月娥 ,黃建春 ,汪毅等 .杏鮑菇細菌性病害病原菌研究 [J].食用菌 ,2020,31(2):6061. [7] 周德慶 . 微生物學實驗教程 (第二版 )[M]. 高等教育出版社 , 2020. [8] 一般細菌常用鑒定方法 [M]. 中國微生物研究所 , 1978. [9] 布坎南 , . 伯杰細菌鑒定手冊 (第八版 )[M]. 北京 :科學出版社 . 1984. [10] 賈身茂 , 食用菌制種技術 [M]. 北京 : 中國林業(yè)出版杜 . 1990. [11] 陳俏彪 , 王東明 , 毛可紅等 . 食用菌培養(yǎng)料細菌性污染的細菌種群特征 [J].江蘇農(nóng)業(yè)科學 ,2020,39(6):417418. [12] 金丹 ,李寶聚 ,石延霞等 .一種平菇褐斑病病原菌的鑒定 [J].食用菌學報 ,2020,16(1):8991. [13] 胡開輝 ,陳體強 ,黃志龍等 .食用菌細菌性病害 [J].福建農(nóng)業(yè)科技 ,2020,(3):1518. [14] 魏鵬 ,郝敬喆 ,賈文捷等 .杏鮑菇褐斑病的抑菌劑篩選試驗 [J].新疆農(nóng)業(yè)科學 ,2020,46(5):10571059. 常熟理工學院畢業(yè)設計（論文） 24 致謝 本論文是在姚璐曄老師的悉心指導下完成的。從試驗設計到試驗具體工作以至論文的撰寫，每一步都凝聚著導師的心血。三年來，無論是在學習中還是生活上，都愧領了導師許多無私的關懷和熱情的鼓勵。導師淵博精深的學識才華、嚴謹?shù)闹螌W態(tài)度、兢兢業(yè)業(yè)的科研精神、廣博的氣度胸襟以及為人師表的學者風范使我受益匪淺。導師的優(yōu)良品德和作風將對我今后的人生起到深遠的影響。我對導師的感激之情溢于言表，在此，謹向恩 師衷心道一聲：謝謝 ! 感謝昆山正興食用菌有限公司 提供研究菌種和條件。 感謝我的師姐、師兄、師妹、師弟在我試驗中給予的幫助。