【正文】 、恒河猴等，我國(guó)以恒河猴為主。 五、原代細(xì)胞的要求 原代細(xì)胞應(yīng)來(lái)源于健康的動(dòng)物臟器組織或胚胎，包括猴腎、地鼠腎、沙鼠腎、家兔腎、狗腎或動(dòng)物的胎兒和其他組織以及雞胚和鵪鶉胚等正常組織，以適當(dāng)?shù)南合?、分散組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，原代細(xì)胞不能建立細(xì)胞庫(kù)，只能限于原始培養(yǎng)的細(xì)胞或傳代少數(shù)幾代內(nèi)（一般 15 代內(nèi)）使用，無(wú)法事先標(biāo)定。 四、重組細(xì)胞的特殊要求 重組細(xì)胞系通過(guò) DNA 重組技術(shù)獲得的含有特定基因序列的細(xì)胞系，因此重組細(xì)胞系的建立應(yīng)具有細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建方法的相關(guān)資料，如細(xì)胞 融合、轉(zhuǎn)染、篩選、集落分離、克隆、基因擴(kuò)增及培養(yǎng)條件或培養(yǎng)液的適應(yīng)性等方面的資料。 （ 3）無(wú)菌檢查 依法檢查 ，應(yīng)符合規(guī)定（附錄 XII A）。 通常含有活細(xì)胞的制品或下游純化工藝不足的制品，應(yīng)對(duì)所用細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行染色體檢查及評(píng)價(jià)。 3 支原體檢查 每 8~12 世代細(xì)胞培養(yǎng)物，應(yīng)進(jìn)行支原體檢查，依法檢查， 應(yīng)符合規(guī)定（附錄 XII B）。 （ 2）判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì) 1000 個(gè)和 500 個(gè)中期細(xì)胞標(biāo)本異常率進(jìn)行檢查，合格的上限 (可信限 90% Poison 法 )如表 2。其中至少選擇 50 個(gè)分裂中期細(xì)胞進(jìn)行顯微照相，作出核型分析，并應(yīng)粗?jǐn)?shù) 500 個(gè)分裂中期細(xì)胞，檢查多倍體的發(fā)生率。對(duì)于已建株的人二倍體細(xì)胞株，如 WI3 MRC 2BS， KMB17 等，在建立 MCB 時(shí)可不必進(jìn)行細(xì)胞染色體檢查。對(duì)于在不同 時(shí)間收集合并的培養(yǎng)物，應(yīng)在每次收集時(shí)檢測(cè)對(duì)照細(xì)胞培養(yǎng)物。應(yīng)按 本規(guī)程‘細(xì)胞的檢定’ 的規(guī)定進(jìn)行細(xì)胞庫(kù)的檢查。 傳代細(xì)胞系則以一定稀釋倍數(shù)進(jìn)行傳代，每傳一次為一代。生產(chǎn)用細(xì)胞的最高限定代次應(yīng)根據(jù)研究結(jié)果確定，但不得超過(guò)國(guó)際認(rèn)可的最高限定代次。 除上述體內(nèi)法外，也可采用軟瓊脂克隆形成試驗(yàn)或器官培養(yǎng)試驗(yàn)等體外法檢測(cè)，特別適用于在低代 次時(shí)在動(dòng)物體內(nèi)無(wú)致瘤性的傳代細(xì)胞系。 結(jié)果判定： ① 定期觀察并觸摸注射部位有無(wú)結(jié)節(jié)形成，且形成的 任何結(jié)節(jié)均應(yīng)進(jìn)行雙向測(cè)量并記錄。 將 MCB 或 WCB 的細(xì)胞增殖到或超過(guò)生產(chǎn)用體外細(xì)胞齡限制代次，再進(jìn)行致瘤性試驗(yàn)。 某些傳代細(xì)胞系已證明在一定代次內(nèi)不具有致癌性，而超過(guò)某代次則具有致瘤性，如 VERO 細(xì)胞，則必須進(jìn)行致瘤性檢查。 人源的細(xì)胞系 /株，則應(yīng)檢測(cè)如人鼻咽癌病毒、人巨細(xì)胞病毒、人逆轉(zhuǎn)錄病毒、人乙型肝炎病毒、人丙型肝炎病毒。如用于單克隆抗體生產(chǎn)的小鼠細(xì)胞系，則可不檢測(cè)特異性的逆轉(zhuǎn)錄病毒，但在生產(chǎn)工藝中應(yīng)增加病毒滅活程序。 這三種方法具有不同的檢測(cè)特性及靈敏度，因此應(yīng)采用不同的方法聯(lián)合檢測(cè)。 ②透射電鏡檢查： 收集待檢細(xì)胞，低速離心后，棄上清，沉淀中應(yīng)含有 1107個(gè)細(xì)胞，且細(xì)胞存活率應(yīng)不低于 99%。豚鼠主要用于檢查細(xì)胞內(nèi)結(jié)核分支桿菌，在注射前觀察 4 周，結(jié)核菌素試驗(yàn)為陰性者方可用于試驗(yàn)。觀察到期時(shí)，應(yīng)至少有 80%以上接種動(dòng)物或雞胚健存，視為試驗(yàn)有效。同時(shí)，應(yīng)進(jìn)行血吸附試驗(yàn) ,應(yīng)為陰性。如細(xì)胞裂解物對(duì)單層細(xì)胞有干擾，則應(yīng)排除干擾因素。 （ 2）不同細(xì)胞傳代培養(yǎng)法檢測(cè)病毒因子 將待檢細(xì)胞分別接種下列三種單層細(xì)胞，包括猴源細(xì)胞、人源二倍體細(xì)胞和同種屬同組織類型來(lái)源的細(xì)胞。每日鏡檢細(xì)胞，細(xì)胞應(yīng)保持正常形態(tài)特征。 4．細(xì)胞內(nèi)、外源病毒因子檢查 應(yīng)注意檢查細(xì)胞系 /株中是否有來(lái)源物種中潛在的可傳染的病毒，以及由于操作帶入的外源性病毒。 可選其中一種或幾種方法，但均須經(jīng)國(guó)家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可。每次從 MCB 建立一個(gè)新的 WCB，均應(yīng)按規(guī)定項(xiàng)目進(jìn)行檢定。必要時(shí)還須進(jìn)行細(xì)胞染色體核型檢查。凍存 后的細(xì)胞，應(yīng)至少作一次復(fù)蘇培養(yǎng)并連續(xù)傳代至衰老期，檢查不同傳代水平的細(xì)胞生長(zhǎng)情況。所制備的 WCB 必須經(jīng)檢定合格（見(jiàn) 本規(guī)程‘ 細(xì)胞檢定’中有關(guān)規(guī)定）后，方可用于生產(chǎn)。由 MCB 的細(xì)胞經(jīng)傳代增殖， 達(dá)到一定代次水平的細(xì)胞，合并后制成一批均質(zhì)細(xì)胞懸液，定量分裝于安瓿或適宜的細(xì)胞凍存管，保存于液氮或 130℃以下備用，即為工作細(xì)胞庫(kù)。 （ 2）主細(xì)胞庫(kù) (MCB) 取原始細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞，通過(guò)一定方式進(jìn)行傳代、增殖后均勻混合成一批，定量分裝，保存于液氮或 130℃以下。如為引進(jìn)的細(xì)胞，可采用 主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)組成的二級(jí)細(xì)胞庫(kù)管理。 2．細(xì)胞操作的環(huán)境要求 細(xì)胞培養(yǎng)的操作應(yīng)符合中國(guó)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。 消化細(xì)胞用胰蛋白酶應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)，證明其無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體或病毒污染。 （二）細(xì)胞庫(kù)的建立 細(xì)胞庫(kù)的建立可為生物制品的生產(chǎn)提供已標(biāo)定好的、細(xì)胞質(zhì)量相同的、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細(xì)胞種子。 如采用已建株的細(xì)胞系 /株，應(yīng)從具有一定資質(zhì)的細(xì)胞保藏中心獲取細(xì)胞，且應(yīng)提供該細(xì)胞在保藏中心的詳細(xì)傳代過(guò)程，包括培養(yǎng)過(guò)程中所使用的原材料的相關(guān)信息，具有細(xì)胞來(lái)源的證明資料 。 （一）細(xì)胞系 /株歷史資料的要求 1. 細(xì)胞系 /株來(lái)源資料 應(yīng)具有細(xì)胞系 /株來(lái)源的相關(guān)資料，如細(xì)胞系 /株制備機(jī)構(gòu)的名稱，細(xì)胞系 /株來(lái)源的種屬、年齡、性別和健康狀況的資料。 生產(chǎn)非重組制品所用的細(xì)胞基質(zhì)，系指來(lái)源于未經(jīng)修飾的用于制備其主細(xì)胞庫(kù)的細(xì)胞系 /株和原代細(xì)胞。細(xì)胞基質(zhì)系指可用于生物制品生產(chǎn) /檢定的所有動(dòng)物或人源的連續(xù)傳代細(xì)胞系、二倍體細(xì)胞株及原代細(xì)胞。 一、對(duì)生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞基 質(zhì)總的要求 用于生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞系 /株均須通過(guò)全面檢定，須具有如下相應(yīng)資料，并經(jīng)國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)批準(zhǔn)。 動(dòng)物來(lái)源的細(xì)胞系 /株須具有動(dòng)物種屬、種系、飼養(yǎng)條件、組織或器官來(lái)源、地域來(lái)源、 年齡、性別、病原體檢測(cè)結(jié)果及供體的一般生理狀況的相關(guān)資料。 應(yīng)提供細(xì)胞培養(yǎng)液的詳細(xì)成分，如使用人或動(dòng)物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物學(xué)活性的物質(zhì)，應(yīng)具有這些成分的來(lái)源、制備方法及質(zhì)量控制、檢測(cè)結(jié)果和質(zhì)量保證的相關(guān)資料。 細(xì)胞培養(yǎng)液中不得使用人血清，如需使用人血白蛋白，則須使用有批準(zhǔn)文號(hào)的合格制品 。配制各種溶液的化學(xué)藥品應(yīng)符合《中國(guó)藥典》（二部）或其他相關(guān)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求。 3．建立細(xì)胞庫(kù) 細(xì)胞庫(kù)為三級(jí)管理，即原始細(xì)胞庫(kù)、主細(xì)胞庫(kù)及工作細(xì)胞庫(kù)。在特定條件下，將一定數(shù)量、成分均一的細(xì)胞懸液，定量均勻分裝于安瓿，于液氮或 130℃以下凍存，即為原始細(xì)胞庫(kù)，供建立主細(xì)胞庫(kù)用。 （ 3）工作細(xì)胞庫(kù) (WCB)