【正文】 、恒河猴等，我國以恒河猴為主。 五、原代細胞的要求 原代細胞應來源于健康的動物臟器組織或胚胎，包括猴腎、地鼠腎、沙鼠腎、家兔腎、狗腎或動物的胎兒和其他組織以及雞胚和鵪鶉胚等正常組織，以適當?shù)南合⒎稚⒔M織細胞進行培養(yǎng)，原代細胞不能建立細胞庫，只能限于原始培養(yǎng)的細胞或傳代少數(shù)幾代內（一般 15 代內）使用，無法事先標定。 四、重組細胞的特殊要求 重組細胞系通過 DNA 重組技術獲得的含有特定基因序列的細胞系，因此重組細胞系的建立應具有細胞基質構建方法的相關資料，如細胞 融合、轉染、篩選、集落分離、克隆、基因擴增及培養(yǎng)條件或培養(yǎng)液的適應性等方面的資料。 （ 3）無菌檢查 依法檢查 ，應符合規(guī)定（附錄 XII A）。 通常含有活細胞的制品或下游純化工藝不足的制品，應對所用細胞培養(yǎng)進行染色體檢查及評價。 3 支原體檢查 每 8~12 世代細胞培養(yǎng)物，應進行支原體檢查，依法檢查， 應符合規(guī)定（附錄 XII B）。 （ 2）判定標準 對 1000 個和 500 個中期細胞標本異常率進行檢查，合格的上限 (可信限 90% Poison 法 )如表 2。其中至少選擇 50 個分裂中期細胞進行顯微照相，作出核型分析，并應粗數(shù) 500 個分裂中期細胞，檢查多倍體的發(fā)生率。對于已建株的人二倍體細胞株，如 WI3 MRC 2BS， KMB17 等，在建立 MCB 時可不必進行細胞染色體檢查。對于在不同 時間收集合并的培養(yǎng)物，應在每次收集時檢測對照細胞培養(yǎng)物。應按 本規(guī)程‘細胞的檢定’ 的規(guī)定進行細胞庫的檢查。 傳代細胞系則以一定稀釋倍數(shù)進行傳代，每傳一次為一代。生產用細胞的最高限定代次應根據(jù)研究結果確定，但不得超過國際認可的最高限定代次。 除上述體內法外，也可采用軟瓊脂克隆形成試驗或器官培養(yǎng)試驗等體外法檢測，特別適用于在低代 次時在動物體內無致瘤性的傳代細胞系。 結果判定： ① 定期觀察并觸摸注射部位有無結節(jié)形成，且形成的 任何結節(jié)均應進行雙向測量并記錄。 將 MCB 或 WCB 的細胞增殖到或超過生產用體外細胞齡限制代次，再進行致瘤性試驗。 某些傳代細胞系已證明在一定代次內不具有致癌性，而超過某代次則具有致瘤性，如 VERO 細胞，則必須進行致瘤性檢查。 人源的細胞系 /株，則應檢測如人鼻咽癌病毒、人巨細胞病毒、人逆轉錄病毒、人乙型肝炎病毒、人丙型肝炎病毒。如用于單克隆抗體生產的小鼠細胞系，則可不檢測特異性的逆轉錄病毒，但在生產工藝中應增加病毒滅活程序。 這三種方法具有不同的檢測特性及靈敏度，因此應采用不同的方法聯(lián)合檢測。 ②透射電鏡檢查： 收集待檢細胞，低速離心后，棄上清，沉淀中應含有 1107個細胞，且細胞存活率應不低于 99%。豚鼠主要用于檢查細胞內結核分支桿菌，在注射前觀察 4 周，結核菌素試驗為陰性者方可用于試驗。觀察到期時，應至少有 80%以上接種動物或雞胚健存，視為試驗有效。同時，應進行血吸附試驗 ,應為陰性。如細胞裂解物對單層細胞有干擾，則應排除干擾因素。 （ 2）不同細胞傳代培養(yǎng)法檢測病毒因子 將待檢細胞分別接種下列三種單層細胞，包括猴源細胞、人源二倍體細胞和同種屬同組織類型來源的細胞。每日鏡檢細胞，細胞應保持正常形態(tài)特征。 4．細胞內、外源病毒因子檢查 應注意檢查細胞系 /株中是否有來源物種中潛在的可傳染的病毒，以及由于操作帶入的外源性病毒。 可選其中一種或幾種方法，但均須經國家藥品檢定機構認可。每次從 MCB 建立一個新的 WCB，均應按規(guī)定項目進行檢定。必要時還須進行細胞染色體核型檢查。凍存 后的細胞，應至少作一次復蘇培養(yǎng)并連續(xù)傳代至衰老期，檢查不同傳代水平的細胞生長情況。所制備的 WCB 必須經檢定合格（見 本規(guī)程‘ 細胞檢定’中有關規(guī)定）后，方可用于生產。由 MCB 的細胞經傳代增殖， 達到一定代次水平的細胞，合并后制成一批均質細胞懸液，定量分裝于安瓿或適宜的細胞凍存管，保存于液氮或 130℃以下備用，即為工作細胞庫。 （ 2）主細胞庫 (MCB) 取原始細胞庫細胞，通過一定方式進行傳代、增殖后均勻混合成一批，定量分裝，保存于液氮或 130℃以下。如為引進的細胞，可采用 主細胞庫和工作細胞庫組成的二級細胞庫管理。 2．細胞操作的環(huán)境要求 細胞培養(yǎng)的操作應符合中國《藥品生產質量管理規(guī)范》的要求。 消化細胞用胰蛋白酶應進行檢測，證明其無細菌、真菌、支原體或病毒污染。 （二）細胞庫的建立 細胞庫的建立可為生物制品的生產提供已標定好的、細胞質量相同的、能持續(xù)穩(wěn)定傳代的細胞種子。 如采用已建株的細胞系 /株，應從具有一定資質的細胞保藏中心獲取細胞，且應提供該細胞在保藏中心的詳細傳代過程，包括培養(yǎng)過程中所使用的原材料的相關信息，具有細胞來源的證明資料 。 （一）細胞系 /株歷史資料的要求 1. 細胞系 /株來源資料 應具有細胞系 /株來源的相關資料，如細胞系 /株制備機構的名稱，細胞系 /株來源的種屬、年齡、性別和健康狀況的資料。 生產非重組制品所用的細胞基質，系指來源于未經修飾的用于制備其主細胞庫的細胞系 /株和原代細胞。細胞基質系指可用于生物制品生產 /檢定的所有動物或人源的連續(xù)傳代細胞系、二倍體細胞株及原代細胞。 一、對生產用細胞庫細胞基 質總的要求 用于生物制品生產的細胞系 /株均須通過全面檢定，須具有如下相應資料，并經國務院藥品監(jiān)督管理部門批準。 動物來源的細胞系 /株須具有動物種屬、種系、飼養(yǎng)條件、組織或器官來源、地域來源、 年齡、性別、病原體檢測結果及供體的一般生理狀況的相關資料。 應提供細胞培養(yǎng)液的詳細成分，如使用人或動物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物學活性的物質，應具有這些成分的來源、制備方法及質量控制、檢測結果和質量保證的相關資料。 細胞培養(yǎng)液中不得使用人血清，如需使用人血白蛋白，則須使用有批準文號的合格制品 。配制各種溶液的化學藥品應符合《中國藥典》（二部）或其他相關國家標準的要求。 3．建立細胞庫 細胞庫為三級管理，即原始細胞庫、主細胞庫及工作細胞庫。在特定條件下，將一定數(shù)量、成分均一的細胞懸液，定量均勻分裝于安瓿，于液氮或 130℃以下凍存，即為原始細胞庫，供建立主細胞庫用。 （ 3）工作細胞庫 (WCB)