【正文】 卵裂起著重要作用。 NGF 也是豬卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中重要的調(diào)節(jié)物質(zhì)之一，能影響豬卵母細(xì)胞成熟的動(dòng)力學(xué)，加快進(jìn)入 M11 期。本文主要對(duì)卵丘細(xì)胞在卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)過(guò)程中的作用加以闡述，進(jìn)而對(duì)卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)加以改進(jìn)。在這些卵泡細(xì)胞內(nèi)，線(xiàn)粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富。卵泡中的縫隙連接使壁層顆粒細(xì)胞、卵丘細(xì)胞和卵母細(xì)胞共同形成一個(gè)結(jié)構(gòu)和功能上的合胞體 [1]。如果兩者間縫隙連接過(guò)早破壞，卵母細(xì)胞可能停止發(fā)育 ［ 2］ 。卵丘細(xì)胞與卵母細(xì)胞間的作用機(jī)制先前認(rèn)為是一些生長(zhǎng)因子如表皮生長(zhǎng)因子（ EFG）、胰島素樣生長(zhǎng)因（ IGF1）通過(guò)卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞行使促成熟影響，但目前證明生長(zhǎng)因子對(duì)牛和鼠的裸卵也有促成熟作用，卵母細(xì)胞也存在 IGF1受體 mRNA。 ，添加卵丘細(xì)胞 ( 106個(gè)／ mL)可以促進(jìn)牛有完整放射冠的卵母細(xì)胞的發(fā)育，但在培養(yǎng)液中，添加與COCs中卵丘細(xì)胞濃度相同的卵丘細(xì)胞數(shù)（ 106個(gè)／ mL）對(duì)于裸卵的發(fā)育無(wú)作用， ～ 106個(gè)卵丘細(xì)胞／ mL對(duì)于帶有完整縫隙連接的卵母細(xì)胞的體外成熟效果最好。卵丘細(xì)胞是否成熟是卵母細(xì)胞成熟的重要標(biāo)志，只有兩者均成熟時(shí)，精子才能有效地穿透卵子并進(jìn)而發(fā)生卵裂燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 9 ［ 10］ 。一般絕大多數(shù)的 1級(jí)成熟卵和多數(shù)的 2,級(jí)成熟卵均已達(dá)到成熟狀態(tài)，排出第一極體 . 卵丘擴(kuò)展與卵母細(xì)胞成熟之間的關(guān)系很復(fù)雜。但最近的報(bào)道對(duì) =:過(guò)程中卵丘擴(kuò)展在支持胚胎發(fā)育上提出質(zhì)疑。因此，需要進(jìn)一步研究來(lái)確定卵丘擴(kuò)展與卵母細(xì)胞成熟是否有關(guān)系 . 響 卵母細(xì)胞周?chē)穆亚鸺?xì)胞層數(shù)是影響卵母細(xì)胞成熟的重要因素。這些結(jié)果與 Abdoon的報(bào)道一致，他也發(fā)現(xiàn)大部分的卵母細(xì)胞有 5層或更多層的卵丘細(xì)胞，并且具有均勻致密的卵質(zhì)?？梢?jiàn)，裸卵是一類(lèi)尚未成熟即趨于退化的卵子，不能正常受精及進(jìn)一步發(fā)育。體外成熟培養(yǎng)時(shí)，需選擇從直徑大于 2mm卵泡內(nèi)吸出的卵丘細(xì)胞致密的多卵丘細(xì)胞卵進(jìn)行培養(yǎng)。利用透 射電子顯微鏡技術(shù)觀察去卵丘細(xì)胞的小鼠卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中的超微結(jié)構(gòu)變化，目的是在亞細(xì)胞水平上尋找由于卵丘細(xì)胞的去除而導(dǎo)致卵母細(xì)胞質(zhì)量降低的原因。 燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 11 第二部分 課程設(shè)計(jì)部分 卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響 獲取高質(zhì)量的體外成熟卵母細(xì)胞是成功進(jìn)行人類(lèi)體外受精、動(dòng)物胚胎生產(chǎn)和克隆的關(guān)鍵。所以，繼續(xù)深入認(rèn)識(shí)卵母細(xì)胞的成熟規(guī)律、改善體外成 熟培養(yǎng)環(huán)境、建立一種完善的卵母細(xì)胞體外成熟系統(tǒng)是當(dāng)前胚胎工程研究的重要內(nèi)容之一。 卵巢 豬 卵巢 采集自河北省秦皇島市海濱區(qū)新店子屠宰場(chǎng) 。吸卵液為 TCM199+25 mmol/L HEPES+10 μg/mL肝素+ g/L BSA。 C級(jí)：裸卵或卵丘細(xì)胞雖為 1～ 2層或多層，但是不完整，部分裸露 。成熟培養(yǎng)條件39℃ ,5%的 CO2與飽和濕度，二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 22～ 24 h。 根據(jù)包裹卵母細(xì)胞的卵丘細(xì)胞的完整性分為 3組 :A組，有 3層以上卵丘細(xì)胞緊密包圍的卵母細(xì)胞復(fù)合體記為 (COCs)； B組，有 3層卵丘細(xì)胞包圍的卵母細(xì)胞記為 (COCs)； C組，有 1～ 2層卵丘細(xì)胞包圍的裸露卵母細(xì)胞記為 (NOs)， 3組燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 14 分別放于相同且適宜條件下培養(yǎng)。Antezak等和 Goud等提出卵泡液和卵丘細(xì)胞層可儲(chǔ)存和釋放某些生長(zhǎng)因子和特定蛋白，這些因子和蛋白在卵母細(xì)胞的成熟與胚胎發(fā)育過(guò)程中按一定順序或選擇性地發(fā)揮調(diào)節(jié)胚胎生長(zhǎng)發(fā)育的作護(hù)包裹在卵母細(xì)胞外的卵丘細(xì) 胞層，以提高卵母細(xì)胞的體外成熟及后期胚胎發(fā)育的潛力。本研究結(jié)果表明，包裹卵母細(xì)胞的卵丘細(xì)胞層的存在與其層數(shù)對(duì)卵母細(xì)胞的體外成熟和孤雌激活后胚胎發(fā)育的能力具有重要作用。 在課程設(shè)計(jì)的過(guò)程中，過(guò)的充實(shí)而 又 緊張：查閱資料、文獻(xiàn)，確定自己的設(shè)計(jì)方案，查閱相關(guān)資料和課程設(shè)計(jì)報(bào)告的撰寫(xiě)。 燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 16 參考文獻(xiàn) [1] 陳大元 . 受精生物學(xué) [M]. 北京 科學(xué)出版社 , 2020,51: 147148. 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