【正文】 本設計重點研究了卵丘細胞在卵母細胞體外成熟過程中的作用，初步篩選燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書 15 了有卵丘細胞和無卵丘細胞兩種情況下，卵母細胞中差異表達的基因，并且進一步研究卵丘細胞的不同形態(tài)對豬卵母細胞體外成熟的影響，為提高卵母細胞的 體外成熟效率提供了依據(jù)，將有助于更好的利用卵母細胞來為胚胎工程乃至克隆技術服務。 卵母細胞采用微滴培養(yǎng)法 .檢出的 COCS用含體積分數(shù)為 5%胎牛血清的DPBS洗滌 3次，然后用成熟培養(yǎng)液洗滌 3次，最后按實驗設計分別移入含有成熟培養(yǎng)液滴的直徑 35mm培養(yǎng)皿中。盡管動物卵母細胞能夠在體外自發(fā)完成細胞核成熟，但卵母細胞成熟質(zhì)量遠不如體內(nèi)成熟卵母細胞，其受精后胚胎發(fā)育能力較差。 ，具有多層的卵丘細 胞（致密或分散）的卵母細胞 55％ 以上到達染色質(zhì)結構雙線期，具有體外發(fā)育完全的最大潛力。卵丘擴展常用作判斷卵母細胞體外成熟的特征， Hunter和 Moor根據(jù)卵丘細胞擴展情況制定了牛卵母細胞體外成熟的判斷標準： 1級成熟卵為 “卵丘細胞完全擴展”；卵丘細胞團至少擴展 倍于裸卵直徑（ 300181。處于成熟階段的卵母細胞，卵丘細胞通過大量充滿肌纖維蛋白的帶狀結構緊密包裹著透明帶，保持 卵母細胞和卵丘細胞之間縫隙聯(lián)系，進行離子交換和一些小燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書 8 的代謝物質(zhì)的交換。 燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書 7 目前已經(jīng)證實， EGF 可以促進豬卵母細胞的核成熟。尤其對于 LH 的添加存在爭議，有研究者認為 LH 在卵母細胞培育過程中并未發(fā)揮作用， Izadyar 等認為在不含血清的成熟培養(yǎng)液中，只有 FSH 能影響卵母細胞的成熟，而 LH 沒有作用；Bevers 等認為小于 8mm 的牛卵泡中，顆粒細胞上只有 FSH 受體 mRNA，而沒有 LH 受體 mRNA。 不同動物的卵母細胞所需要的體外成熟培養(yǎng)時間因動物種類的不同而有所不同，大多數(shù)哺乳動物所需要的體外培養(yǎng)時間為 22~24h，但是對豬而言，卻需要更長的時間，一般，豬卵母細胞體外成熟培養(yǎng)的時間為 44h。 大多數(shù)哺乳動物的卵母細胞被卵丘細胞包裹形成 COCs） 。從初情期前的青年母豬卵巢中獲得的豬卵母細胞經(jīng)過體外成熟培養(yǎng)后可得到 IVP 后代，但是，成功的效率不如經(jīng)產(chǎn)母豬卵巢體外成熟的卵母細胞。 燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書 1 第一部分 文獻綜述 母細胞體內(nèi) 成熟的生理機理 卵母細胞成熟是指卵母細胞恢復和完成第一次減數(shù)分裂，進入并停滯于第二次減數(shù)分裂中期，此間伴隨著胞漿成熟，即卵母細胞的成熟包括其核成熟和胞漿成熟兩個方面 [v]。 卵巢 ...............................................................................錯誤 !未定義書簽。 燕山大學 課 程 設 計 說 明 書 卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟影響的設計 學院（系）： 年級 專業(yè)： 0 學 號： 學生 姓名： 指導 教師： 教師 職稱： 燕山大學課程設計（論文）任務書 院（系）： 基層教學單位： 學 號 學生姓名 專業(yè)（班級） 設計題目 卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟的影響 設 計 主 要 內(nèi) 容 對豬卵母細胞成熟的影響 設 計 要 求 ， ,設計合理的操作方式 總結與分析 工 作 量 15篇以上的相關科技文獻 15000字以上 工 作 計 劃 查閱資料 整理文獻 設計方案 撰寫說明書 檢查內(nèi)容準備答辯 參 考 資 料 [1] 陳大元 . 受精生物學 [M]. 北京 科學出版社 , 2020, 51: 147148. [2] 王海 , 曾申明 , 朱士恩 . 培養(yǎng)介質(zhì)、卵丘細胞和卵泡直徑對豬卵母細胞體外成熟的影響 [J]. 中國畜牧雜志 , 2020, 38: 1516. [3] 錢云 , 丁家桐 , 劉紅林 . 卵母細胞成熟的形態(tài)學特征及 其調(diào)控 [J]. 國外畜牧科技 , 2020, 26: 2630. 指導教師簽字 基層教學單位主任簽字 說明：學生、指導教師、基層教學單位各一份。 實驗用的儀器 .................................................................錯誤 !未定義書簽。核成熟是核膜破裂，同源染色體分離和排出第一極體；胞漿成熟是胞漿內(nèi)各種蛋白組成達到一定水平及線粒體的有效重排。 不同的國家和地區(qū)之間，豬的品種必定存在著遺傳因素、飼養(yǎng)環(huán)境和氣候條件等等的因素而帶來品質(zhì)上的差異，從而影響豬卵母細胞的質(zhì)量進而對體外成熟培養(yǎng)也產(chǎn)生一定的影響。排卵之前，卵丘細胞擴展，合成大量胞外基質(zhì)，并富含透明質(zhì)酸（ Hyaluronic： HA），有利于排卵后進入輸卵管，同時保證了卵母細胞正常的受精和胚胎發(fā)育潛力，所以，卵丘細胞的擴張對卵母細胞成熟，特別是卵母細胞胞質(zhì)成熟起著重要作用。 Sosnowki 等研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng) 40~48 h 與 30~36 h 對豬卵母細胞體外成熟率差異顯著，但是分析染色體核型發(fā)現(xiàn)，隨著體外培養(yǎng)時間的延長，染色體異常率會隨之增加。但彭禮繁等卻認為 LH 對豬卵母細胞體外成熟的促進效果要強于 FSH。 Abeydeera 的研究表明， EGF 能提高卵母細胞成熟過程中蛋白質(zhì)的合成，從而提高卵母細胞胞質(zhì)的質(zhì)量， IGF 對細胞具有促分裂、分化及促代謝等生物學功能，是一個具有多種生理功能的生長因子，因此，同樣能促進豬卵母細胞的成熟，并能提高所得胚胎的發(fā)育能力。卵母細胞所需的營養(yǎng)物質(zhì)依賴卵丘細胞提供，兩者間通過縫隙連接進行信號傳導，進而調(diào)節(jié)卵母細胞的生長和成熟。m）； ,級成熟卵為“卵丘細胞中等擴展”，卵丘細胞向外擴展約 ,倍于裸卵直徑（ 200181。 李榮鳳等實驗，以皮層顆粒（ CG）單層分布于質(zhì)膜下做為卵母細胞質(zhì)成熟的指標，分別于成熟培養(yǎng)前后觀察各類卵子的 CG分布情況。目前認為，這可能是由于體外成熟的卵母細胞胞質(zhì)成熟不充分造成的。每個液滴 50μL并覆蓋石蠟油，每滴放COCs10~15枚。 本次課程設計我選的題目是《卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟的影響》，回想起這些天緊張而又充實，正如趙老師說的，此次設計時間緊任務重。本研究結果表明，包裹卵母細胞的卵丘細胞層的存在與其層數(shù)對卵母細胞的體外成熟和孤雌激活后胚胎發(fā)育的能力具有重要作用。 C級：裸卵或卵丘細胞雖為 1～ 2層或多層，但是不完整，部分裸露 。 燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書 11 第二部分 課程設計部分 卵丘細胞對豬卵母細胞體外成熟的影響 獲取高質(zhì)量的體外成熟卵母細胞是成功進行人類體外受精、動物胚胎生產(chǎn)和克隆的關鍵。這些結果與 Abdoon的報道一致，他也發(fā)現(xiàn)大部分的卵母細胞有 5層或更多層的卵丘細胞，并且具有均勻致密的卵質(zhì)。卵丘細胞是否成熟是卵母細胞成熟的重要標志，只有兩者均成熟時，精子才能有效地穿透卵子并進而發(fā)生卵裂燕 山 大 學 課 程 設 計 說 明 書 9 ［ 10］ 。卵泡中的縫隙連接使壁層顆粒細胞、卵丘細胞和卵母細胞共同形成一個結構和功能上的合胞體 [1]。 與卵母細胞體外成熟相關的細胞生長因子主要包括表皮生長因子(Epidermal growth factor， EGF)，胰島素樣生長因子 (insulinlike growth factors，IGF)、成纖維細胞生長因子 (Fibroblast Growth Factor， FGF)、轉化生長因子(transforming growth factor， TGF )及神經(jīng)生長因子 (nerve growth factor， NGF)等，這些細胞生長因子之間相互作用，對卵母細胞的成熟、受精與卵裂起著重要作用。在豬卵 母細胞體外成熟研究中，許多學者都選擇添加 PMSG,有人還認為添加 PMSG 和 hCG 的組合對豬卵母細胞核成熟的促進作用優(yōu)于添加 FSH 和 LH。另外，要保證所用氣體的無毒。但在特別大的卵泡中有些卵母細胞有嚴重退化的現(xiàn)象。 2. 影響豬卵母細胞體外成熟的因素 卵巢來源豬的年齡、品種及健康狀況 同一種動物在不同年齡段其卵母細胞在體外成熟的情況也有所不同。 參考文獻 ..................................................