【正文】 本設(shè)計(jì)重點(diǎn)研究了卵丘細(xì)胞在卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中的作用，初步篩選燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 15 了有卵丘細(xì)胞和無(wú)卵丘細(xì)胞兩種情況下，卵母細(xì)胞中差異表達(dá)的基因，并且進(jìn)一步研究卵丘細(xì)胞的不同形態(tài)對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響，為提高卵母細(xì)胞的 體外成熟效率提供了依據(jù)，將有助于更好的利用卵母細(xì)胞來(lái)為胚胎工程乃至克隆技術(shù)服務(wù)。 卵母細(xì)胞采用微滴培養(yǎng)法 .檢出的 COCS用含體積分?jǐn)?shù)為 5%胎牛血清的DPBS洗滌 3次，然后用成熟培養(yǎng)液洗滌 3次，最后按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分別移入含有成熟培養(yǎng)液滴的直徑 35mm培養(yǎng)皿中。盡管動(dòng)物卵母細(xì)胞能夠在體外自發(fā)完成細(xì)胞核成熟，但卵母細(xì)胞成熟質(zhì)量遠(yuǎn)不如體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞，其受精后胚胎發(fā)育能力較差。 ，具有多層的卵丘細(xì) 胞（致密或分散）的卵母細(xì)胞 55％ 以上到達(dá)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)雙線期，具有體外發(fā)育完全的最大潛力。卵丘擴(kuò)展常用作判斷卵母細(xì)胞體外成熟的特征， Hunter和 Moor根據(jù)卵丘細(xì)胞擴(kuò)展情況制定了牛卵母細(xì)胞體外成熟的判斷標(biāo)準(zhǔn)： 1級(jí)成熟卵為 “卵丘細(xì)胞完全擴(kuò)展”；卵丘細(xì)胞團(tuán)至少擴(kuò)展 倍于裸卵直徑（ 300181。處于成熟階段的卵母細(xì)胞，卵丘細(xì)胞通過(guò)大量充滿肌纖維蛋白的帶狀結(jié)構(gòu)緊密包裹著透明帶，保持 卵母細(xì)胞和卵丘細(xì)胞之間縫隙聯(lián)系，進(jìn)行離子交換和一些小燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 8 的代謝物質(zhì)的交換。 燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 7 目前已經(jīng)證實(shí)， EGF 可以促進(jìn)豬卵母細(xì)胞的核成熟。尤其對(duì)于 LH 的添加存在爭(zhēng)議，有研究者認(rèn)為 LH 在卵母細(xì)胞培育過(guò)程中并未發(fā)揮作用， Izadyar 等認(rèn)為在不含血清的成熟培養(yǎng)液中，只有 FSH 能影響卵母細(xì)胞的成熟，而 LH 沒(méi)有作用；Bevers 等認(rèn)為小于 8mm 的牛卵泡中，顆粒細(xì)胞上只有 FSH 受體 mRNA，而沒(méi)有 LH 受體 mRNA。 不同動(dòng)物的卵母細(xì)胞所需要的體外成熟培養(yǎng)時(shí)間因動(dòng)物種類的不同而有所不同，大多數(shù)哺乳動(dòng)物所需要的體外培養(yǎng)時(shí)間為 22~24h，但是對(duì)豬而言，卻需要更長(zhǎng)的時(shí)間，一般，豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)的時(shí)間為 44h。 大多數(shù)哺乳動(dòng)物的卵母細(xì)胞被卵丘細(xì)胞包裹形成 COCs） 。從初情期前的青年母豬卵巢中獲得的豬卵母細(xì)胞經(jīng)過(guò)體外成熟培養(yǎng)后可得到 IVP 后代，但是，成功的效率不如經(jīng)產(chǎn)母豬卵巢體外成熟的卵母細(xì)胞。 燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 1 第一部分 文獻(xiàn)綜述 母細(xì)胞體內(nèi) 成熟的生理機(jī)理 卵母細(xì)胞成熟是指卵母細(xì)胞恢復(fù)和完成第一次減數(shù)分裂，進(jìn)入并停滯于第二次減數(shù)分裂中期，此間伴隨著胞漿成熟，即卵母細(xì)胞的成熟包括其核成熟和胞漿成熟兩個(gè)方面 [v]。 卵巢 ...............................................................................錯(cuò)誤 !未定義書(shū)簽。 燕山大學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟影響的設(shè)計(jì) 學(xué)院（系）： 年級(jí) 專業(yè)： 0 學(xué) 號(hào)： 學(xué)生 姓名： 指導(dǎo) 教師： 教師 職稱： 燕山大學(xué)課程設(shè)計(jì)（論文）任務(wù)書(shū) 院（系）： 基層教學(xué)單位： 學(xué) 號(hào) 學(xué)生姓名 專業(yè)（班級(jí)） 設(shè)計(jì)題目 卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響 設(shè) 計(jì) 主 要 內(nèi) 容 對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟的影響 設(shè) 計(jì) 要 求 ， ,設(shè)計(jì)合理的操作方式 總結(jié)與分析 工 作 量 15篇以上的相關(guān)科技文獻(xiàn) 15000字以上 工 作 計(jì) 劃 查閱資料 整理文獻(xiàn) 設(shè)計(jì)方案 撰寫(xiě)說(shuō)明書(shū) 檢查內(nèi)容準(zhǔn)備答辯 參 考 資 料 [1] 陳大元 . 受精生物學(xué) [M]. 北京 科學(xué)出版社 , 2020, 51: 147148. [2] 王海 , 曾申明 , 朱士恩 . 培養(yǎng)介質(zhì)、卵丘細(xì)胞和卵泡直徑對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響 [J]. 中國(guó)畜牧雜志 , 2020, 38: 1516. [3] 錢(qián)云 , 丁家桐 , 劉紅林 . 卵母細(xì)胞成熟的形態(tài)學(xué)特征及 其調(diào)控 [J]. 國(guó)外畜牧科技 , 2020, 26: 2630. 指導(dǎo)教師簽字 基層教學(xué)單位主任簽字 說(shuō)明：學(xué)生、指導(dǎo)教師、基層教學(xué)單位各一份。 實(shí)驗(yàn)用的儀器 .................................................................錯(cuò)誤 !未定義書(shū)簽。核成熟是核膜破裂，同源染色體分離和排出第一極體；胞漿成熟是胞漿內(nèi)各種蛋白組成達(dá)到一定水平及線粒體的有效重排。 不同的國(guó)家和地區(qū)之間，豬的品種必定存在著遺傳因素、飼養(yǎng)環(huán)境和氣候條件等等的因素而帶來(lái)品質(zhì)上的差異，從而影響豬卵母細(xì)胞的質(zhì)量進(jìn)而對(duì)體外成熟培養(yǎng)也產(chǎn)生一定的影響。排卵之前，卵丘細(xì)胞擴(kuò)展，合成大量胞外基質(zhì)，并富含透明質(zhì)酸（ Hyaluronic： HA），有利于排卵后進(jìn)入輸卵管，同時(shí)保證了卵母細(xì)胞正常的受精和胚胎發(fā)育潛力，所以，卵丘細(xì)胞的擴(kuò)張對(duì)卵母細(xì)胞成熟，特別是卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟起著重要作用。 Sosnowki 等研究發(fā)現(xiàn)培養(yǎng) 40~48 h 與 30~36 h 對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟率差異顯著，但是分析染色體核型發(fā)現(xiàn)，隨著體外培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，染色體異常率會(huì)隨之增加。但彭禮繁等卻認(rèn)為 LH 對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的促進(jìn)效果要強(qiáng)于 FSH。 Abeydeera 的研究表明， EGF 能提高卵母細(xì)胞成熟過(guò)程中蛋白質(zhì)的合成，從而提高卵母細(xì)胞胞質(zhì)的質(zhì)量， IGF 對(duì)細(xì)胞具有促分裂、分化及促代謝等生物學(xué)功能，是一個(gè)具有多種生理功能的生長(zhǎng)因子，因此，同樣能促進(jìn)豬卵母細(xì)胞的成熟，并能提高所得胚胎的發(fā)育能力。卵母細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)依賴卵丘細(xì)胞提供，兩者間通過(guò)縫隙連接進(jìn)行信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而調(diào)節(jié)卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)和成熟。m）； ,級(jí)成熟卵為“卵丘細(xì)胞中等擴(kuò)展”，卵丘細(xì)胞向外擴(kuò)展約 ,倍于裸卵直徑（ 200181。 李榮鳳等實(shí)驗(yàn)，以皮層顆粒（ CG）單層分布于質(zhì)膜下做為卵母細(xì)胞質(zhì)成熟的指標(biāo)，分別于成熟培養(yǎng)前后觀察各類卵子的 CG分布情況。目前認(rèn)為，這可能是由于體外成熟的卵母細(xì)胞胞質(zhì)成熟不充分造成的。每個(gè)液滴 50μL并覆蓋石蠟油，每滴放COCs10~15枚。 本次課程設(shè)計(jì)我選的題目是《卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響》，回想起這些天緊張而又充實(shí)，正如趙老師說(shuō)的，此次設(shè)計(jì)時(shí)間緊任務(wù)重。本研究結(jié)果表明，包裹卵母細(xì)胞的卵丘細(xì)胞層的存在與其層數(shù)對(duì)卵母細(xì)胞的體外成熟和孤雌激活后胚胎發(fā)育的能力具有重要作用。 C級(jí)：裸卵或卵丘細(xì)胞雖為 1～ 2層或多層，但是不完整，部分裸露 。 燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 11 第二部分 課程設(shè)計(jì)部分 卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟的影響 獲取高質(zhì)量的體外成熟卵母細(xì)胞是成功進(jìn)行人類體外受精、動(dòng)物胚胎生產(chǎn)和克隆的關(guān)鍵。這些結(jié)果與 Abdoon的報(bào)道一致，他也發(fā)現(xiàn)大部分的卵母細(xì)胞有 5層或更多層的卵丘細(xì)胞，并且具有均勻致密的卵質(zhì)。卵丘細(xì)胞是否成熟是卵母細(xì)胞成熟的重要標(biāo)志，只有兩者均成熟時(shí)，精子才能有效地穿透卵子并進(jìn)而發(fā)生卵裂燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說(shuō) 明 書(shū) 9 ［ 10］ 。卵泡中的縫隙連接使壁層顆粒細(xì)胞、卵丘細(xì)胞和卵母細(xì)胞共同形成一個(gè)結(jié)構(gòu)和功能上的合胞體 [1]。 與卵母細(xì)胞體外成熟相關(guān)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子主要包括表皮生長(zhǎng)因子(Epidermal growth factor， EGF)，胰島素樣生長(zhǎng)因子 (insulinlike growth factors，IGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (Fibroblast Growth Factor， FGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(transforming growth factor， TGF )及神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (nerve growth factor， NGF)等，這些細(xì)胞生長(zhǎng)因子之間相互作用，對(duì)卵母細(xì)胞的成熟、受精與卵裂起著重要作用。在豬卵 母細(xì)胞體外成熟研究中，許多學(xué)者都選擇添加 PMSG,有人還認(rèn)為添加 PMSG 和 hCG 的組合對(duì)豬卵母細(xì)胞核成熟的促進(jìn)作用優(yōu)于添加 FSH 和 LH。另外，要保證所用氣體的無(wú)毒。但在特別大的卵泡中有些卵母細(xì)胞有嚴(yán)重退化的現(xiàn)象。 2. 影響豬卵母細(xì)胞體外成熟的因素 卵巢來(lái)源豬的年齡、品種及健康狀況 同一種動(dòng)物在不同年齡段其卵母細(xì)胞在體外成熟的情況也有所不同。 參考文獻(xiàn) ..................................................