【正文】 鼠卵母細(xì)胞存在體外受精障礙的原因之一。因 此，本研究通過對(duì)機(jī)械裸卵和 COCs進(jìn)行體外成熟，經(jīng)體外培養(yǎng)而探討卵丘細(xì)胞存在和不同形態(tài)卵 丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟與孤雌發(fā)育能力的影響。 B級(jí)：卵丘細(xì)胞為 1～ 2層；或卵丘細(xì)胞雖在 3層或 3層以上，但是不完整，部分為 1～ 2層。 3. 設(shè)計(jì) 去除卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞成熟的影響 先將包裹 3層以上卵丘細(xì)胞且包裹緊密的 COCs隨機(jī)分為 2組 ： A組 , COCs經(jīng)機(jī)械吹打 脫除卵丘細(xì)胞成為機(jī)械裸卵 (Dos)， B組 , 包裹卵丘細(xì)胞 3層以上的且包裹緊密的卵丘一卵母細(xì)胞復(fù)合體記為 (COCs)，各自單獨(dú)培養(yǎng)。 不同類型 COCs的孤雌胚胎發(fā)育能力卻不同，這可能是包 裹卵丘細(xì)胞較少的卵母細(xì)胞在體外成熟后已有老化的趨勢(shì)，卵裂后發(fā)育至囊胚的能力下降，但包裹 3層以上卵丘細(xì)胞及附帶 FSP的 COCs在體外成熟后孤雌激活時(shí)正處于發(fā)育的較佳時(shí)期，能夠很好的發(fā)育至囊胚期。最后，感謝趙紅衛(wèi)老師嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度和孜孜不倦的教導(dǎo)，他豐富的學(xué)識(shí)給了同學(xué)們很大的幫助。這些天尋找資料，思考設(shè)計(jì)方案，穿梭于東西校區(qū)之間，不僅鍛煉了身體，也鍛煉了我們的心智，每個(gè)人都很認(rèn)真的學(xué)習(xí)、準(zhǔn)備，老師的嚴(yán)格要求是對(duì)我們最好的磨練與監(jiān)督。這可能是因?yàn)樵诼涯讣?xì)胞成熟過程中，卵丘細(xì)胞通過與卵母細(xì)胞間的緊密縫隙連接為卵母細(xì)胞的成熟發(fā)育提供物質(zhì)和能量，促進(jìn)卵母細(xì)胞發(fā)育成熟。液滴預(yù)先在二氧化碳培養(yǎng)箱中平衡 2h以上。然后用帶有 18G針頭的一次性注射器，抽吸直徑 2 ~10 mm卵泡中的 卵泡液 。研究表明，卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)系統(tǒng)與受精率和囊胚發(fā)育率有強(qiáng)相關(guān)性。 去除卵丘細(xì)胞的卵母細(xì)胞在體外成熟過程中的超微結(jié)構(gòu)變化 去除卵丘細(xì)胞會(huì)降低小鼠卵母細(xì)胞的成熟質(zhì)量。結(jié)果證實(shí)裸卵燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說 明 書 10 成熟培養(yǎng)后 CG完全消失或卵子本身形態(tài)出現(xiàn)異常。至少與細(xì)胞質(zhì)進(jìn)一步成熟無直接關(guān)系。m）； 級(jí)成熟卵為“卵丘細(xì)胞輕度擴(kuò)展”，卵丘細(xì)胞仍緊緊地粘貼在透明帶上。 盡管如此，據(jù)報(bào)道卵 母細(xì)胞成熟過程中卵丘細(xì)胞對(duì)卵母細(xì)胞受精后至囊胚的發(fā)育是必不可少的。裸卵僅能夠利用周圍介質(zhì)中的丙酮酸和三羧循環(huán)的中間產(chǎn)物，不能直接利用葡萄糖卵丘細(xì)胞可將葡萄糖轉(zhuǎn)化為丙酮酸，為卵母細(xì)胞的生長和發(fā)育提供能量。此時(shí)卵母細(xì)胞處于第一次減數(shù)分裂前期，以后隨著卵母細(xì)胞 開始生長，卵泡細(xì)胞迅速增殖，由單層變?yōu)槎鄬印?TGFα，在結(jié)構(gòu)上和功能上與 EGF 相似，因而也可以與EGF受體結(jié)合，誘導(dǎo)豬卵丘細(xì)胞的擴(kuò)散，促進(jìn)卵母細(xì)胞核成熟。因此，尋找比較適宜的血清替代品成為當(dāng)前的一大研究 熱點(diǎn)，目前用來代替血清的替代品有牛血清白蛋白 (Bovine SerumAlbumin ， BSA) 、聚乙烯醇 (Polyvinyl Alcohol ， PVA) 、聚乙烯毗咯烷酮 (polyvinylpyrrolidone， PVP)等大分子有機(jī)物質(zhì)。 在早期的研究中 ，促性腺激素多數(shù)存在于整個(gè)體外培養(yǎng)過程，但 1994 年，F(xiàn)unashi 等的研究表明，在豬卵母細(xì)胞 IVM 時(shí)，培養(yǎng)前 20 h 加入 PMSG、 hCG、E2，而在培養(yǎng)后 20 h 去除，可增加卵母細(xì)胞的成熟率，同時(shí)可以促進(jìn)卵母細(xì)胞減數(shù)分裂和胞質(zhì)的成熟，而且有利于卵母細(xì)胞的發(fā)育和受精。 Wang等人的研究顯示在 NCSU23 中成熟的卵母細(xì)胞 IVF 后囊胚發(fā)育率顯著高于在 TCM199 和改良 Whitten39。 目前，常用的豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)方式有微滴培養(yǎng)法、套皿培養(yǎng)法及普通的單皿培養(yǎng)法。通常在培養(yǎng)基上面覆蓋一層石蠟油或礦物油，以使在培養(yǎng)箱內(nèi)或離箱操作時(shí)維持培養(yǎng)基的氣相、濕度與 pH 值。根據(jù)卵母細(xì)胞外 面包裹的卵丘細(xì)胞的層數(shù)將其分成三級(jí) 。文國藝等 [xxvii]研究認(rèn)為，豬卵巢離體時(shí)間越短，其卵母細(xì)胞的卵裂率越高，并且隨著離體時(shí)間的延長而降低。 而即使是從同一品種和統(tǒng)一地區(qū)的豬種所獲得的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，其培養(yǎng)效果也會(huì)因豬的健康情況和卵巢質(zhì)量等的影響而有很大的不同，比如，處在育齡盛期的健康母豬，其卵巢的體積大，表面卵泡多而且直徑在 36mm 的卵泡相對(duì)比例就會(huì)較高，抽得的卵母細(xì)胞形態(tài)完好，裸卵少，相對(duì)體外成熟培養(yǎng)效果也好。胞質(zhì)成熟一個(gè)非常重要的特點(diǎn)是積累一些穩(wěn)定的 mRNA，并在卵母細(xì)胞成熟到一定階段進(jìn)行蛋白質(zhì)翻譯。 卵母細(xì)胞體外成熟（ IVM）是指在體外人工給定的條 件下，哺乳動(dòng)物次級(jí)卵母細(xì)胞經(jīng)過一系列的生長發(fā)育最終形成有受精能力的成熟卵母細(xì)胞的過程。 ........................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 實(shí)驗(yàn)試劑 ........................................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 成熟的生理機(jī)理 .........................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 年 月 日 燕山大學(xué) 課程設(shè)計(jì) 成績?cè)u(píng)定表 設(shè)計(jì)者姓名 : 學(xué)號(hào) : 設(shè)計(jì)題目 : 說明書成績?cè)u(píng)定（滿分 100分）： 得分 設(shè)計(jì)內(nèi)容的切題程度：滿分 20分 （ ） 設(shè)計(jì)內(nèi)容立題合理性：滿分 10分 （ ） 設(shè)計(jì)內(nèi)容的規(guī)范程度：滿分 10分 （ ） 設(shè)計(jì)書前后內(nèi)容完整：滿分 20分 （ ） 設(shè)計(jì)說明說排版成績：滿分 20分 （ ） 設(shè)計(jì)說明書的工作量：滿分 10分 （ ） 設(shè)計(jì)過程平時(shí)成績： 滿分 10分 （ ） 總分成績： 指導(dǎo)教師： 年 月 日 答辯成績?cè)u(píng)定：（滿分 100分） 得分 儀表成績：滿分 20分 （ ） 口語表達(dá)：滿 分 20分 （ ） 幻燈質(zhì)量：滿分 20分 （ ） 設(shè)計(jì)分析：滿分 40分 （ ） 總分 ： 教師： 年 月 日 設(shè)計(jì)撰寫成績 （ 70%） 答辯成績 （ 30%） 合計(jì) 教師簽字： 年 月 日 20202020 秋 季學(xué)期 生物工程專業(yè)課程設(shè)計(jì) 結(jié)題論文 卵丘細(xì)胞對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟影響的設(shè)計(jì) 學(xué)院（系）： 年級(jí) 專業(yè)： 學(xué) 號(hào)： 學(xué)生 姓名： 指導(dǎo) 教師： 教師 職稱： 摘 要 卵丘細(xì)胞是影響卵母細(xì)胞成熟的重要因素，尤其是包裹在卵母細(xì)胞周圍的卵丘細(xì)胞。為提高卵母細(xì)胞的質(zhì)量，使體外受精、細(xì)胞核移植、轉(zhuǎn)基因及胚胎干細(xì)胞等技術(shù)研究的順利進(jìn)行，而作為這些研究基礎(chǔ)環(huán)節(jié)的卵母細(xì)胞體外成熟技術(shù)尤為重要。 ................................................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說 明 書 卵母細(xì)胞的成熟觀察 ................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。 參考文獻(xiàn) .......................................................................................錯(cuò)誤 !未定義書簽。高爾基復(fù)合體最初位于核的周圍，成熟過程中移向皮質(zhì)，皮質(zhì)顆粒完全形成后，高爾復(fù)合體在皮質(zhì)中消失。 2. 影響豬卵母細(xì)胞體外成熟的因素 卵巢來源豬的年齡、品種及健康狀況 同一種動(dòng)物在不同年齡段其卵母細(xì)胞在體外成熟的情況也有所不同。彭輝等研究表明，在牛卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)中，有著同樣的燕 山 大 學(xué) 課 程 設(shè) 計(jì) 說 明 書 3 結(jié)果，即卵泡期卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)結(jié)果要高于黃體期 [xxvi]。但在特別大的卵泡中有些卵母細(xì)胞有嚴(yán)重退化的現(xiàn)象。 目前，常用的采集豬卵母細(xì)胞的方法有三種即抽吸法、切割法和刺破法，相對(duì)于刺破法和切割法而言，抽吸法較為常用，但是所獲得的卵母細(xì)胞質(zhì)量較