【正文】 可親的老師們 ，感謝我們班所有的同學，感謝所有信任我、幫助我的人，感謝你們，你們給我的 情 誼我會永遠珍惜 ! 五 月維夏，山有嘉卉。 十年樹木，百年樹人。在一個人 漫長的生 長過程中，需要的不 僅 僅是知識 方面 的積累，還需要正確的思想 態(tài)度 和積極樂 觀 的人生觀、價值觀 、世界觀 。 四年的大學生活是我人生這條線上的一小段， 卻 是 最 閃閃發(fā)光 、值得回味 的一段 。 還有許多 不知名字的 人，也許他們只是我生命中 的 匆匆過客，但他們對我的支持和幫助依然在我 的心 中留 下 了深刻的印象。 此外， 我的試驗和論文 最終 能夠 得以順利完成，也 要感謝所 有授我以業(yè)的大學 老師 。 在論文完成之際，我要特別感謝我的指導老師 老師雖身負 教學 、科研 重任， 但 仍 百忙之中 抽出時間，耳提面命，殷殷之情盡在諄諄教誨中。 通過 對 各個操作因素 進行了合理的 研究 分析并進行 試驗 設計，在單因素試驗和正交試驗之后 ，得出如下結論： 在 加酶量為 20xxu/g， pH值為 10，溫度50℃ ，反應時間 2h的條件下 ， 蛋白質 提取率可以達到 最高 %。 在設定的反應溫度和 pH 范圍內，蛋白的提取率 在反應時間 2h時最高 ， 在此條件下其蛋白提取率為 ％。本試驗的指標是越大越好，即蛋白質提取率也越高。 根據(jù) 上述 分析，在單因素實驗的基礎上 ， 將 采用 ? ?493L 正交表進行 試 驗，以蛋白質提取率為指標，研究加酶量 (A)、 pH(B)、溫度 (C)、時間 (D)四因素對 黃 酒糟蛋白提取率的影響，以便得出其最優(yōu)化的因素水平組合。 因此 最適宜的 料液比是 1:8。因此，正交試驗中反應時間定為 3h。 黃酒糟蛋白提取工藝研究 11 反應時間對蛋白提取率的影響 圖 5 反應時間對蛋白質提取率的影響 由圖 5 可 知 ，在反應的前 3h， 隨著時間的延長， 蛋白質的提取率 穩(wěn)步上升 ；在 3h之后，蛋白提取率增長緩慢。 反應溫度對蛋白提取率的影響 圖 4 反應溫度對蛋白質提取率的影響 由圖 4 可 知 ，在 45~50℃ 的范圍內 ， 隨著溫度的上升， 蛋白質提取率 有明顯的提高 ；當溫度為 50℃ 時 ， 蛋白提取率最高。 原因是 在底物濃度不斷被酶完全飽和前 ， 加酶量的增大提高了堿性蛋白酶對酒糟中蛋白的作用能力。故可以用該方法測量蛋白質的含量。然后再用標準酸溶液進行滴定，滴定所用無機酸的量相當于被測樣品中的氨的量（滴定）， 根據(jù) 所測得的氨量即 可計算 出 樣品 的 氮含量。反應結束后在沸水浴中加熱 15min 進行酶滅活處理， 然后調整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 ??3 。 用 紫外分光光度法 測定上清液的 吸光值， 進而算得 蛋白質含量 ，最后計算蛋白提取率 。 （ 4） 反應時間對蛋白提取率的影響 準確稱取 經(jīng)處理過的黃 酒糟 ，按照 1:8 的料水比加水， 于 50℃ 的水浴鍋內保溫，而后調整 pH 值到 11(采用 1mol/L的 NaOH 調整 )。按照 20xxu/g的加酶量添加堿性內切 蛋白酶， 在 40℃ 、 45℃ 、 50℃ 、 55℃ 的溫度下 下 水浴振蕩 2h，在反應過程中不斷加酸或堿，維持反應 液中 pH 在設定值 11177。0 .1 范圍 內。反應結束后在沸水浴中加熱 15min 進行酶滅活處理， 然后 調整 pH 至 7，以 4000r/min 的速度離心 10min，收集上清液 ??3 。以蛋白質濃度和對應的吸光值為對應坐標，繪制標準曲線。標準蛋白質溶液配制的濃度為 。 該測定法具有簡單靈敏快速 、 高選擇性 、 干擾易消除 、 不消耗樣品，且穩(wěn)定性好 、 不干擾測定等優(yōu)點 ??16 。 （ 2）工藝流程 名稱 型號 生產廠家 電子天平 BS210S 北京賽多利斯天平有限公司 高速 萬能 粉碎機 FW100 北京中興偉業(yè)儀器有限公司 電熱恒 溫振蕩水槽 SHC28 鄭州杜甫儀器廠 電熱 恒溫 干燥箱 CS101A 北京市永光明醫(yī)療儀器廠 電熱恒溫水浴鍋 HHS 鞏義設備有限公司 721 分光光度計 721 上海精密儀器廠 低溫高速離心機 TDL40B 北京中興偉業(yè)儀器有限公司 自動純水蒸餾器 SZ96 上海亞榮生化儀器廠 氣流烘干器 KQB 長城科工貿有限公司 精密 pH 計 pH S25 上海精科雷磁 黃酒糟蛋白提取工藝研究 6 準確稱重 g 處理 后的 黃 酒糟 → 加水 → 調 整 適當 pH 值和溫度 → 酶解 → 滅酶(100℃ ， 15 min)→ 離心 (4000r/min， 10 min)→ 收集上清液 → 紫外分光光度法 測定 吸光值→ 根據(jù)吸光值計算蛋白質含量 。 之內。 ? 纖維素酶水解 經(jīng)過水洗之后， 黃 酒糟中還有一些 粗纖維等 不溶性物質 未能 有效除去，只 能通過酸法或酶法來降解。 黃酒糟蛋白提取工藝研究 4 2 試驗材料與方法 試驗材料 試驗原料 表 1 試驗 原料 原料名稱 采購時間 產地 黃酒糟 20xx 年 4 月 河南省南陽市 試驗試劑 表 2 試驗所用主要試劑 試劑 生產廠家（產地） 纖維素酶 15000u/g 堿性內切蛋白酶 20xx00u/g 混合指示劑 濃硫酸 上海撫生實業(yè)有限公司 河南金源生物科技有限公司 天津市科密歐化學試劑有限公司 天津致遠化學試劑有限公司 過氧化氫 天津致遠化學試劑有限公司 氫氧化鈉 硫酸鉀 天津市德恩化學試劑有限公司 國藥集團化學試劑有限公司 硼酸 北京化學試劑公司 鹽酸 中平能化集團開封東大化工有限公司 CuSO4 除此之外，由于 堿性 內切 蛋白酶是微生物酶，來源廣、成本低 、 適合工業(yè)化生產 ， 是 比 較理想的工業(yè)用酶。其最適溫度范圍為 40~55℃ ，添加量一般為 500~2500u/g。所以說酶法提取蛋白質 是植物蛋白提取乃至未來食品 與生化 工藝發(fā)展方向 的指標 ??3 。堿溶酸沉法，是一種簡單易行的提取方 法 ， 比如 在大豆蛋白等分離提取中 就 有著 十分 廣泛的應用。 黃酒 糟蛋白提取工藝的可行性分析 黃酒糟蛋白屬于植物蛋白的一種， 植物蛋白的提取方法 有 很多，最常用的是 酸法、堿溶酸沉法以及酶法。 黃酒糟營養(yǎng)價值豐富，研究其蛋白提取工藝不但能夠降低黃酒企業(yè)的生產成本，還能 有效 地 減少環(huán)境污染 ??12 。 黃酒糟蛋白質含量豐富、質量較 好 ， 水不溶性的 谷蛋白 是其中含量最大的 ； 而且和 大米蛋白 相比較 ，黃酒糟中的蛋白 具有 堿溶解性較低 的優(yōu)點 。 開辟新的蛋白質資源，增加飼用蛋白質產量 的問題 迫在眉睫。還有國 外學者通過黃酒糟制得甘油，或者生產淀粉酶和纖維素酶，制取糖用活性碳，外敷治療關節(jié)炎等疾病 ??10 。谷海先等 人研究 生產特鮮醬油的技術 時 應用 了 復合風味蛋白酶及麩曲酸性蛋白酶、麩曲糖化酶水解黃酒糟 ??6 。 而且 在這么多的酒糟研究中， 啤 酒糟的研究占了 絕大 多數(shù) 。 雖然 黃酒的生 產已經(jīng)有幾千年的歷史， 但是黃酒糟的研究卻始于八十年代末期 。 在釀制黃酒所選的原料 為 大米 時 ， 其 蛋白質含量 在 8％左右 ； 若以 小麥 作為原料 ， 則 蛋白質含量高達 12％。因為從原料到酒精經(jīng)過了一系列的糖化、發(fā)酵等生物化學的復雜變化，而產生了一些新的物質成分。 黃酒糟的各種成分主要來自釀酒原料。 經(jīng)過蒸料，拌以麥曲、米曲或酒藥，進行糖化和發(fā)酵釀制而 制成的釀造酒 ，享有 “ 國酒 ” 之美譽。 本課題的研究內容 .......................................................................................................... 3 2 試驗材料與方法 .................................................................................................................... 4 試驗材料 ......................................................................................................................... 4 試驗原料 ................................................................................................................... 4 試驗試劑 ................................................................................................................... 4 試驗儀器 ................................................................................................................... 5 試驗 方法 ...........................................................