【正文】 在一些特殊情況下，當(dāng)抗體檢測(cè)無法滿足HIV感染診斷的需要時(shí)，病毒分離及測(cè)定、核酸檢測(cè)、抗原檢測(cè)可作為輔助手段使用，這包括對(duì)非典型血清學(xué)反應(yīng)樣品的診斷、HIV感染的窗口期診斷、新生兒早期診斷和對(duì)特殊樣品的診斷。先用HIV1/2混合型試劑進(jìn)行檢測(cè)，如果呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應(yīng)，則報(bào)告HIV1抗體陽性；如果不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，則判為HIV抗體檢測(cè)結(jié)果不確定。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓(xùn)練的技術(shù)人員、觀察和解釋結(jié)果易受主觀因素的影響，結(jié)果不宜長(zhǎng)期保存，IFA不宜在一般的實(shí)驗(yàn)室開展和應(yīng)用。有的單位即使復(fù)檢，也沒有復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)，隨心所欲，其復(fù)檢率只有百分之幾，這顯然是不負(fù)責(zé)任的?？傊?，血細(xì)胞分析儀的結(jié)果僅僅是屬于過篩而己，不能完全代替人工鏡檢。由于沒有復(fù)檢而產(chǎn)生的漏檢白血病、異常淋巴細(xì)胞、瘧原蟲，還有EDTA依賴性血小板假性降低等己引起的醫(yī)療糾紛，應(yīng)該引起我們深思。精液常規(guī)觀察：精液總?cè)萘浚ê辽?，精子活?dòng)情況，精子密度（個(gè)/毫升），精液液化時(shí)間（標(biāo)本取出到精液液化的時(shí)間），不動(dòng)精子（個(gè)/高倍視野）等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試免疫檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血漿的鑒別方法血漿是血液的液體成分，血細(xì)胞懸濁于其中。血漿與血清的區(qū)別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，現(xiàn)在則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的工具離心機(jī)（centrifuge）是實(shí)施離心技術(shù)的裝置。通常所使用的離心機(jī)根據(jù)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速大小的不同可分為普通離心機(jī)、高速離心機(jī)和超速離心機(jī)三類2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度時(shí)，則顆粒朝向軸心方向移動(dòng)而發(fā)生漂浮。2）預(yù)制梯度等密度離心法。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：動(dòng)脈血?dú)鈽?biāo)本采集方法一、抗凝劑的配制首先推薦使用市場(chǎng)上有售的專用采血針，愿意自己配制抗凝采血針的用戶，%NS50ml+肝素鈉針劑2支（12500U）配制成肝素稀釋液備用，并做好無菌儲(chǔ)藏。用肝素化的注射器穿刺，采血部位首選小兒橈動(dòng)脈，小嬰兒可用顳淺動(dòng)脈取血，取完血一定要密封。三、采血后處理采血后針尖或毛細(xì)吸血管兩端立即用橡皮帽或橡皮泥封住，防止空氣氣泡進(jìn)入，并立即充分混勻達(dá)到抗凝目的，并立即送檢，從采血到送檢不宜超過20分鐘，以免血細(xì)胞代謝耗氧，使PO2和PH值下降PCO2升高。一天晚上急診科一患者化驗(yàn)的結(jié)果是血糖8毫克。vc的影響到底有多大？叢玉隆再次做了試驗(yàn)，一組人一天吃3片vc（每片100毫克），第二天檢測(cè)結(jié)果是每毫升尿含vc30毫克。叢玉隆進(jìn)行的另一個(gè)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，給健康人靜脈推注vc2000毫克，然后在不同時(shí)間段取尿，30分鐘后尿含vc600多毫克、1小時(shí)500多毫克、5小時(shí)后含幾十毫克（正常值），說明靜脈使用大劑量vc對(duì)糖尿病人的尿糖檢查干擾更大。染料法如孔雀綠直接顯色測(cè)定法。現(xiàn)代的火焰分光光度計(jì)的基本框圖（見圖）示意出：試樣溶液經(jīng)霧化后噴入火焰，溶劑在火焰中蒸發(fā)，鹽粒熔融，轉(zhuǎn)化為蒸氣，離解成原子（部分電離），再由火焰高溫激發(fā)發(fā)光，發(fā)射的光經(jīng)切光器調(diào)制，并由單色器（通常是光柵）分光，選擇待測(cè)波長(zhǎng)譜線，經(jīng)光電轉(zhuǎn)換和電信號(hào)放大后檢出。這是火焰光度法應(yīng)用中要選擇的關(guān)鍵條件。1935年制成第一臺(tái)火焰光譜光電直讀光度計(jì)，使得火焰光度法應(yīng)用范圍進(jìn)一步擴(kuò)大。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓標(biāo)本的采集選擇骨髓標(biāo)本的采集選擇骨髓標(biāo)本大部分采用穿刺法吸取。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓涂片的檢查骨髓涂片的檢查（1）普通光鏡低倍鏡檢驗(yàn)：判斷骨髓增生程度；估計(jì)巨核細(xì)胞系統(tǒng)增生情況；觀察涂片邊緣、尾部、骨髓小粒周圍，有無體積較大或成堆分布的異常細(xì)胞。①酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)（EMIT）：了解其基本原理，反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測(cè)定結(jié)果就可推算出標(biāo)本中半抗原的量。②固相酶免疫測(cè)定：如常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：肝硬化的臨床意義肝硬化代償期患者血清ALT可輕度增高或正常，失代償期ALT可持續(xù)升高。尿透明度還易受某些鹽類結(jié)晶的影響。（3）藥物的影響：如服用核黃素、呋喃唑酮、痢特靈、黃連素、牛黃、阿的平使尿呈黃色或深黃色；番瀉葉、山道年等使尿呈橙色或橙黃色；酚紅、番瀉葉、蘆薈、氨基匹林、磺胺藥等使尿呈紅色或紅褐色。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究腫瘤壞死因子的應(yīng)用研究：由于TNF的抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)功能，TNF療法的研究已被許多國家開展。（2）臨床意義：陽性見于鐮狀細(xì)胞貧血（HbS?。?，HbBart、HbI病可見少量鐮狀細(xì)胞。（1）腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌（ETEC）：引起霍亂樣腸毒素腹瀉（水瀉）。臨床特征為嚴(yán)重的腹痛、痙攣，反復(fù)出血性腹瀉，伴發(fā)熱、嘔吐等。臨床最常見的是大腸埃希菌。（2）最后鑒定：腸桿菌科各屬細(xì)菌的最后鑒定是根據(jù)生化反應(yīng)的結(jié)果定屬、種，或再用診斷血清做凝集反應(yīng)才能作出最后判斷。（2）細(xì)胞因子可以旁分泌、自分泌或內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。網(wǎng)織紅細(xì)胞輕度增多或正常。試管法：%瓊脂糖溶液中，注入小試管內(nèi)，上層加抗原溶液使待測(cè)抗原在凝膠中自由擴(kuò)散，在抗原抗體比例恰當(dāng)位置形成沉淀環(huán)。（3）每次測(cè)定時(shí)必須用質(zhì)控血清作質(zhì)控。試管法：在含有抗原的溶液和含有抗體瓊脂中間，加一層普通瓊脂，讓下層抗體和上層抗原向中間自由擴(kuò)散，在抗原、抗體濃度最適時(shí)形成沉淀線。一般沉淀線靠近抗原孔，提示抗體量大，沉淀線靠近抗體孔，提示抗原量大。如若兩者分子量相等，則形成直線。但甘油與膜脂質(zhì)又有親和性，可使膜脂質(zhì)減少。后者包括收縮蛋白、肌動(dòng)蛋白、錨蛋白和區(qū)帶（～）等，即骨架系統(tǒng)，起支架作用，對(duì)維持紅細(xì)胞的形狀、穩(wěn)定性和變形性有重要作用。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血紅蛋白病的定義與分類血紅蛋白病的定義與分類：血紅蛋白病是一組由于生成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈（α、β、γ、δ）的結(jié)構(gòu)異?；蚝铣呻逆溗俾实母淖?，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病。常見的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白病是因合成的珠蛋白的氨基酸序列改變而引起血紅蛋白功能或理、化性質(zhì)異常的疾病，如：引起血紅蛋白異常聚合的HbS病；不穩(wěn)定血紅蛋白癥、高鐵血紅蛋白血癥等。由于脾細(xì)胞內(nèi)的抗體生成細(xì)胞可釋放抗SRBC抗體，使其周圍的SRBC致敏，在補(bǔ)體參與下導(dǎo)致SRBC溶血，形成一個(gè)肉眼可見的圓形透明溶血區(qū)而成為溶血空斑（plaque）。如果用一定方法將SRBC用其它抗原包被，則可檢查與該抗原相應(yīng)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，這種非紅細(xì)胞抗體溶血空斑試驗(yàn)稱為空斑形成試驗(yàn)，它的應(yīng)用范圍。這種直接法所測(cè)的細(xì)胞為IgM生成細(xì)胞，其他類型Ig由于溶血效應(yīng)較低，不能直接檢測(cè)，可用間接檢測(cè)法，即在小鼠脾細(xì)胞和SRBC混合時(shí)，再加抗鼠Ig抗體（如兔抗鼠Ig），使抗體生成細(xì)胞所產(chǎn)生的IgG或IgA與抗Ig抗體結(jié)合成復(fù)合物，此時(shí)能活化補(bǔ)體導(dǎo)致溶血，稱間接空斑試驗(yàn)。也有多種基因異常導(dǎo)致的血紅蛋白病，如HbE、Hb Constant Spring、Hb Lepore等。另外，也可見獲得性血紅蛋白病。：屏障作用和可變性；半透性；免疫性；受體特性：激素類受體、遞質(zhì)類受體、丙種球蛋白受體、病毒受體、EP0受體和鐵蛋白受體等。參考值：AGLT50大于l800s（30min）（2）臨床意義：減少見于遺傳性球形細(xì)胞增多癥（25～150s）、腎功能衰竭、慢性白血病、自身免疫性溶貧和妊娠婦女?？贵w效價(jià)是抗原、抗體經(jīng)過自由擴(kuò)散形成沉淀線，出現(xiàn)沉淀線的最高抗體稀釋度為該抗體的效價(jià)。分子量小者，擴(kuò)散快，反之較慢。在相應(yīng)孔中加入抗原或抗體，待其自由擴(kuò)散后，抗原、抗體形成可見的沉淀線。（5）應(yīng)用單克隆抗體測(cè)量多態(tài)性抗原時(shí)，測(cè)定值偏低；用多克隆抗體測(cè)量單克隆病時(shí)，測(cè)定值偏高2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)免疫檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)：雙向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)：在瓊脂內(nèi)抗原和抗體各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在最恰當(dāng)?shù)谋壤幮纬煽乖贵w沉淀線，根據(jù)沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可對(duì)抗原或抗體作出定性分析。有兩種計(jì)算方法：l）Mancini曲線：適用大分子抗原的和長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)散（》48h）的結(jié)果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系c/d2=k.（其中c為抗原濃度 d為沉淀環(huán)直徑 k為常數(shù)）單向擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)時(shí)的注意點(diǎn)：（1）抗血清必須特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)，在良好條件下保存。血小板計(jì)數(shù)一般正常。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)：血象特點(diǎn)血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)指導(dǎo)血象：血紅蛋白、紅細(xì)胞均減少，以血紅蛋白減少更為明顯。主要的細(xì)胞因子有：白細(xì)胞介素、干擾素、生長(zhǎng)因子、趨化因子家族、腫瘤壞死因子、集落刺激因子、轉(zhuǎn)化因子家族以及其他細(xì)胞因子等。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床檢驗(yàn)技師考試綜合輔導(dǎo)資料：腸桿菌科的鑒定（1）初步鑒定：原則是：①確定腸桿菌科的細(xì)菌，應(yīng)采用葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)及氧化酶試驗(yàn)與弧菌科和非發(fā)酵菌加以鑒別；②腸桿菌科細(xì)菌的分群，多采用苯丙氨酸脫氨酶和葡萄糖酸鹽試驗(yàn)，將腸桿菌科的細(xì)菌分為苯丙氨酸脫氨酶陽性、葡萄糖酸鹽利用試驗(yàn)陽性和兩者均為陰性反應(yīng)三個(gè)類群；③選擇生化反應(yīng)進(jìn)行屬種鑒別。（5）腸粘附（集聚）型大腸埃希菌（EAggEC）：也是新近報(bào)道的一種能引起腹瀉的大腸埃希菌。（3）腸侵襲型大腸埃希菌（EIEC）：可侵入結(jié)腸黏膜上皮，引起志賀樣腹瀉（粘液膿血便）。且0157是4歲以下兒童急性腎功衰的主要病原菌，所以CDC提出應(yīng)將大腸埃希氏菌0157：H7列為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)血液檢驗(yàn)輔導(dǎo)：紅細(xì)胞鐮變?cè)囼?yàn)（1）原理：在低氧分壓條件下，HbS轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)后溶解度降低，從而聚合成短棒狀凝膠使紅細(xì)胞變形，呈鐮刀狀。②磷酸鹽或碳酸鹽結(jié)晶：尿呈堿性或中性時(shí)，可析出灰白色結(jié)晶。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)輔導(dǎo)：尿的生理性變化（1）代謝產(chǎn)物：生理性影響尿顏色主要是尿色素、尿膽素（URB）、尿膽原（URO）等。肝硬化病變累及線粒體時(shí)，多數(shù)AST升高程度超過ALT。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試綜合知識(shí)輔導(dǎo)：異相酶免疫測(cè)定異相酶免疫測(cè)定：又分為液相和固相酶免疫測(cè)定。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試血液檢驗(yàn)復(fù)習(xí)輔導(dǎo)：骨髓象的分析與報(bào)告骨髓象的分析與報(bào)告包括骨髓有核細(xì)胞增生程度、粒細(xì)胞與有核紅細(xì)胞比例、粒系統(tǒng)細(xì)胞改變、紅系統(tǒng)細(xì)胞改變、巨核系統(tǒng)細(xì)胞改變、淋巴系統(tǒng)細(xì)胞改變、單核系統(tǒng)細(xì)胞改變和其他血細(xì)胞改變。臨床上常用的穿刺部位包括胸骨、棘突、髂骨、脛骨等處。方法簡(jiǎn)單迅速，組分影響較小，取樣量小，用一份溶液即可進(jìn)行多種元素分析，每毫升10微克濃度的鈉溶液也可測(cè)定。并使用了參考元素技術(shù)?；鹧婀舛确ǔＳ玫幕鹧媸窃诖髿夂銐合陆?jīng)化學(xué)反應(yīng)而燃燒的。酶法是一個(gè)偶聯(lián)反應(yīng)，參與反應(yīng)的酶有糖原磷酸化酶、葡萄糖磷酸變位酶及葡萄糖6磷酸脫氫酶，反應(yīng)中使NADP+還原成NADPH，形成NADPH在340nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度，該方法不受有機(jī)磷酸酯的干擾。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷測(cè)定的參考值參考值：血清磷：～2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：血磷的測(cè)定方法血清無機(jī)磷的測(cè)定方法一般有磷鉬酸法、染料法和酶法。一組人一天吃了9片vc，第二天尿含vc是300毫克。于是檢驗(yàn)科再次對(duì)病人的血樣化驗(yàn)，結(jié)果還是8毫克，叢玉隆仔細(xì)檢查了檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)設(shè)備，都沒發(fā)現(xiàn)問題，但檢驗(yàn)結(jié)果確實(shí)與病人實(shí)際病情不符。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：VC影響血糖尿糖檢測(cè)解放軍總醫(yī)院檢驗(yàn)中心主任叢玉隆指出，維生素c（vc）可以還原尿糖檢測(cè)試劑中的酶，會(huì)導(dǎo)致尿糖檢測(cè)的結(jié)果失真，對(duì)于糖尿病患者來說，服用維生素要謹(jǐn)慎。動(dòng)脈化毛細(xì)血管采血，用不超過42～45℃的濕巾熱敷采血部位皮膚5～15分鐘，使血液增加，血流加速，達(dá)到動(dòng)脈化，然后穿刺，穿刺要深，使血流快速自動(dòng)流出，棄去第一滴血，不能擠壓，用肝素化的毛細(xì)管吸取（建議采用廠家配套提供的專用毛細(xì)管），吸滿后一定要密封，混勻后立即送檢?？鼓齽┥倭藭?huì)使血液凝集，堵塞血?dú)夥治鰞x的流路系統(tǒng)，抗凝劑多了會(huì)影響血?dú)夂碗x子的檢測(cè)結(jié)果，大劑量的抗凝劑會(huì)嚴(yán)重使離子鈣偏低，誤導(dǎo)臨床。離心后，不同密度的樣品顆粒到達(dá)與自身密度相等的梯度層，即達(dá)到等密度的位置而獲得分離。離心前，離心管內(nèi)先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質(zhì)，待分離樣品鋪在梯度液的頂部，離心管底部或梯度層中間，同梯度液一起離心，利用各顆粒在梯度液中沉降速度或漂浮速度的不同，使具有不同沉降速度的顆粒處于不同密度的梯度層內(nèi)，達(dá)到彼此分離的目的。根據(jù)離心原理，可設(shè)計(jì)多種離心方法，常見下列三大類型：。2012年醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試生化檢驗(yàn)輔導(dǎo)：離心技術(shù)的概況離心技術(shù)是利用物體高速旋轉(zhuǎn)時(shí)產(chǎn)生強(qiáng)大的離心力，使置于旋轉(zhuǎn)體中的懸浮顆粒發(fā)生沉降或漂浮，從而使某些顆粒達(dá)到濃縮或與其他顆粒分離之目的。某些密度介質(zhì)經(jīng)過離心后會(huì)自成梯度，例Percoll，可迅速形成梯度，CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間離心后也可產(chǎn)生穩(wěn)定的梯度。2）預(yù)制梯度等密度離心法。離心機(jī)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn)時(shí)，當(dāng)懸浮顆粒密度大于周圍介質(zhì)密度時(shí)，顆粒離開軸心方向移動(dòng)，發(fā)生沉降；如果顆粒密度低于周圍介質(zhì)的密度