transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法(文件)
【正文】 ] 計數(shù),取平均數(shù)。眾所周知,胎牛血清中有趨化因子,我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實驗中發(fā)現(xiàn)用胎牛血清和用NIH3T3 細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實驗效果是一樣的,兩組遷移的細胞數(shù)很接近。如果細胞活力小,就會造成細胞穿透能力下降,影響實驗結(jié)果。在研究粉防己堿對HUVEC 人類臍靜脈內(nèi)皮細胞遷移能力的抑制作用沒有將多余蘇木素洗去,直接脫水、透明,造成細胞圖片背景模糊,細胞不清楚。尤其是同時操作多個樣本時,時間過長就會造成部分聚碳酯膜從上室基底部自動脫落下來,上室間粘連在一起,造成樣本混淆,實驗失敗。內(nèi)容總結(jié)
（1）Transwell是檢測細胞侵襲能力的檢測方法
我們所使用的是Chemicon公司的ECM554,基質(zhì)膠已經(jīng)包被好了,買來就可以用,很方便,而且我們算過,跟自己買膠來包被價格相差不大
（2）(即染成紫紅色的點,未著色的多為細胞碎屑計數(shù)并拍照留念
Transwell細胞體外侵襲實驗
概述
目的:總結(jié)并改進細胞體外侵襲實驗的操作經(jīng)驗
。2. 6 細胞計數(shù)當(dāng)實驗用的細胞為圓形時,實驗人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認為細胞進行計數(shù)。這樣做出的細胞圖片背景干凈,細胞清楚。尤其是細胞為圓形的時候,就會分辨不出是穿過去的細胞還是沒穿過去的細胞,對于長梭形細胞來說,穿過去的細胞為長梭形,沒穿過去的細胞多為圓形。因此認為可以用胎牛血清來代替NIH3T3 細胞制備的趨化因子。注意事項2. 1NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清趨化因子是能使細胞產(chǎn)生趨化運動的一類細胞因子[2 ] 。梯度乙醇脫水(80 % ,95 % ,100 % ,二甲苯透明。Transwell 培養(yǎng)板下室加入500μl 趨化因子,37℃,5 %CO2 培養(yǎng)24 h。1. 4Matrigel 侵襲實驗(Matrigel Invasion Assay刺激后的各組細胞用PBS 漂洗3 次。20℃保存的Matrigel 在冰上保2℃~8℃過夜融化。4 ℃,12 000rpm 離心,10 min ,取上清。Tanswell plate:Costar ,USA , 3422 ,聚碳酯膜微孔直徑為8μm。結(jié)果:改進后侵襲試驗定位準確,結(jié)果清晰。(即染成紫紅色的點,未著色的多為細胞碎屑計數(shù)并拍照留念Transwell細胞體外侵襲實驗概述目的:總結(jié)并
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