膠體金生產(chǎn)工藝配方原則(ppt78頁)(文件)
【正文】 PVP， PVA 4）惰性蛋白： BSA 、 OVA、 Casein。 Made by： QS HLJ 51 影響抗原抗體反應(yīng)的外部因素 ?電解質(zhì) 抗原與抗體發(fā)生結(jié)合后，由親水膠體變?yōu)槭杷z體的過程中須有電解質(zhì)參與才能進(jìn)一步使抗原抗體復(fù)合物表面失去電荷，水化層破壞，復(fù)合物相互靠攏聚集，形成大塊的凝集或沉淀。 Made by： QS HLJ 52 ?酸堿度 蛋白質(zhì)具有兩性電離性質(zhì)，因此每種蛋白質(zhì)都有固定的等電點(diǎn)。某些特殊的抗原抗體反應(yīng)，對溫度有一些特殊的要求，例如冷凝集素在 4℃ 左右與紅細(xì)胞結(jié)合最好， 20℃ 以上反而解離。 ?解決方法：檢查標(biāo)記過程， BSA封閉 Made by： QS HLJ 58 電荷作用 ?膠體金顆粒帶有負(fù)電荷，當(dāng)遇上帶有正電荷的蛋白，易發(fā)生非特異性結(jié)合反應(yīng)，導(dǎo)致假陽。 Made by： QS HLJ 60 抗原抗體作用 ?此類作用是指標(biāo)本里面含有能和標(biāo)記材料 /包被材料發(fā)生免疫反應(yīng)的非目標(biāo)物的其他物質(zhì)導(dǎo)致的假陽結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有：類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig(s)抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其他物質(zhì)等。 解決的方法是： (1)用 EDTA稀釋標(biāo)本； (2)用53℃ 、 10min加熱血清使 Clq滅活。 解決的方法是：測定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠 Ig(s)，從而克服由于上述原因造成的假陽性。 解決的辦法是：測定前需用理化方法將其解離后再測定。 Made by： QS HLJ 71 其他因素 ?血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過高等，均對膠體金測定結(jié)果有干擾作用。 產(chǎn)品穩(wěn)定性試驗(yàn)和有效期的轉(zhuǎn)化 3年 2年 1年 70℃ 3~4個(gè)星期 2個(gè)星期 1個(gè)星期 60℃ 2個(gè)月 1個(gè)月 2個(gè)星期 50℃ 6個(gè)月 2~4個(gè)月 1個(gè)月 40℃ 1年 5~7個(gè)月 2~3個(gè)月 Made by： QS HLJ 76 提高穩(wěn)定性的一些思路 ①減少或者增加表面活性劑的量 ②減少或者增加聚合物 ③改變 Ph值或者 buffer ④ 增加或者減少糖的含量 ⑤在金子墊里改變糖的種類 Made by： QS HLJ 77 上樣問題和吸樣量的問題 ?使用親水材料才能加快速度和減少吸樣量，但上樣過快會(huì)帶來顯色偏淺等問題，需要慎重對待。 Made by： QS HLJ 72 （二）假陰問題 Made by： QS HLJ 73 ?以上原因主要強(qiáng)調(diào)了膜和金子的影響，在膠體金反應(yīng)體系中，靜電作用力，疏水作用力，共價(jià)鍵起了關(guān)鍵的作用，假陰的產(chǎn)生，在體系里的每一個(gè)配方優(yōu)化中，需要充分考慮這幾個(gè)作用力，同時(shí)以和假陽相反的思路進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。在用多抗測定抗原時(shí)對測定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測定抗原時(shí)，如果交叉抗原測定簇正好是所用單克隆抗體相對的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。 Made by： QS HLJ 67 為了消除嗜異性抗體的影響，可通過在樣品墊中加入正常的動(dòng)物血清或純化的鼠 IGg，又或者在膜上噴有鼠 IGg A線，金子中加有正常的動(dòng)物血清或純化的鼠 IGg等等方式將嗜異性抗體排斥在 T線前，消除這方面的假陽。 解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物 Ig(s)，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。 解決該情況的辦法是： (1)用 F(ab)2替代完整的 IgG； (2)標(biāo)本用預(yù)先熱變性 (63℃ ，10min)IgG的固相吸附劑處理 (將熱變性 IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效 )； (3)檢測抗原時(shí)，可以用 2巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使 RF降解。 解決方法：在樣品墊或金子墊或硝酸纖維素膜上加入相應(yīng)的抗體，將這類物質(zhì)在 T線前消除掉。 ?解決方法：改變 pH和鹽度 Made by： QS HLJ 59 疏水作用 ?抗原抗體結(jié)合以及和
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