1-2dna重組技術(shù)的基本操作程序(文件)
【正文】 基因組文庫(kù)與 cDNA文庫(kù)的比較文庫(kù)類(lèi)型 cDNA文庫(kù) 基因組文庫(kù)文庫(kù)大小基因中啟動(dòng)子（具有啟動(dòng)作用的 DNA片段）基因中內(nèi)含子(位于編碼蛋白質(zhì)序列的非編碼 DNA片段）基因多少 物種間的基因交流小 大無(wú) 有無(wú) 有某種生物的部分基因 某種生物的全部基因可以 部分基因可以（二）利用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因1 概念：PCR全稱(chēng)為 _______________，是一項(xiàng)在生物_____復(fù)制 ______________的核酸合成技術(shù)。2 基因表達(dá)載體 的組成：復(fù)制原點(diǎn) +啟動(dòng)子 +目的基因 +終止子 +標(biāo)記基因表達(dá)載體啟動(dòng)子： 位于基因的首端的一段特殊的 DNA片斷，它是 RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位 ，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出 mRNA， 最終獲得蛋白質(zhì)。表達(dá)載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動(dòng)子、終止子 三部分結(jié)構(gòu)② 用到的工具酶： 限制酶和 DNA連接酶，兩種酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵③ 啟動(dòng)子、終止子 對(duì)于目的基因表達(dá)必不可少④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去。2目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法（ 1）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 ① 農(nóng)桿菌特點(diǎn)： 易感染雙子葉植物和裸子植物，對(duì)大多數(shù)單子葉植物沒(méi)有感染能力。，是否都能穩(wěn)定維持和表達(dá)？ 不一定，需要檢測(cè)思考四、目的基因的檢測(cè)與鑒定探針15N15N轉(zhuǎn)基因生物的 DNA14N14N（ 1）檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的 DNA上是否插入 了 目的基因基因探針： 放射性同位素等標(biāo)記的 含目的基因DNA分子方法 —— DNA分子雜交技術(shù)變性變性變性變性檢測(cè) ——分子水平的檢測(cè)變性變性方法 —— 分子雜交技術(shù)（ 2）檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA探針15N15N轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA14N檢測(cè) ——分子水平的檢測(cè)提取（（ 3）檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)）檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)方法 —— 抗原 抗體雜交蘇云金桿菌 將 Bt毒蛋白注射小鼠體內(nèi)從小鼠血管抽出血液分離出抗 Bt毒素的抗體抗體蛋白質(zhì) 出現(xiàn)雜交帶脫分化組織培養(yǎng)Bt毒素蛋白檢測(cè) ——分子水平的檢測(cè)鑒定 ——個(gè)體水平的鑒定抗蟲(chóng)、抗病接種實(shí)驗(yàn)，活性比較實(shí)驗(yàn) 例：用棉鈴飼喂棉鈴蟲(chóng)，如蟲(chóng)吃后不出現(xiàn)中毒癥狀，說(shuō)明未導(dǎo)入目的基因或?qū)肽康幕蛭幢磉_(dá)。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互的。課堂練習(xí) 有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是 ( ) A、 DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來(lái) B、限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1