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【正文】 也可通過條帶的密度大小來進(jìn)行特異性蛋白的半定量 實(shí)驗(yàn)操作大致流程圖 SDSPAGE電泳 轉(zhuǎn)膜（ PVDF或硝酸纖維素膜） 封閉 一抗 洗滌 酶標(biāo)二抗反應(yīng) 洗滌 顯色或化學(xué)發(fā)光顯影 操作過程 , 準(zhǔn)備 2個(gè)干凈的小燒杯 (放好密封條和隔離板 ) *固定玻璃板時(shí)，兩邊用力一定要均勻，防止夾壞玻璃板 分離膠 (10% 10ml) 濃縮膠 (5% 10ml) ddH2O 30%Acr Buffer TrisHCl TrisHCl 10%SDS 100181。因此蛋白質(zhì)在含有強(qiáng)還原劑的 SDS溶液中與SDS分子結(jié)合時(shí)，可形成 SDS蛋白質(zhì)復(fù)合物。這種復(fù)合物由于結(jié)合大量帶負(fù)電荷的 SDS，好比蛋白質(zhì)穿上帶負(fù)電的 “ 外衣 ” ，蛋白質(zhì)本身帶有的電荷則被掩蓋了。l 100181。l 10181。l + 2 上樣 buffer 10181。當(dāng)樣品液和濃縮膠選 Tris/HCL緩沖液，電級液選 Tris/甘氨酸?？赡苡捎谀z緩沖系統(tǒng)和電級緩沖系統(tǒng)地 PH選擇錯(cuò)誤，即緩沖系統(tǒng)地 PH和被分離物質(zhì)的等電點(diǎn)差別太小，或緩沖系統(tǒng)的離子強(qiáng)度太高 ? （指示劑前沿呈現(xiàn)向上的曲線形），說明凝膠的不均勻冷卻，中間部分冷卻不好，導(dǎo)致分子有不同的遷移率所致 ? （指示劑前沿呈現(xiàn)向下的曲線形），由于電泳槽的裝置不合適，尤其是凝膠和玻璃板組成的 “ 三明治 ” 底部有氣泡或靠近隔片得凝膠聚和不完全 ? 。如果凝的太快，可能是 APS和 TEMED用量過多，此時(shí)膠太硬易裂 試劑配制 (1) 30%丙烯酰胺（ Acr）：稱 Acr30g，甲叉雙丙烯酰胺（ Bis） ，加蒸餾水至 100ml，過濾后置棕色瓶中。 SDS電泳的樣品緩沖液離子強(qiáng)度較低，通常是 10～ 100mmol/L 轉(zhuǎn)膜 1 帶手套切 2張（ L： ， W： ）尼龍膜和 12張（ L：， W： ）的濾紙，并用去離子水浸泡（浸泡時(shí)要讓水從下往上慢慢濕透）過午。 4 在模具的黑色板上先鋪一塊海綿，接著依次放 3張浸濕的濾紙，對齊后，用玻璃棒趕凈氣泡（很關(guān)鍵）。然后，在膜上加一點(diǎn)緩沖液，用玻璃棒盡量使之鋪平 3 在膜上依次放好三張濾紙和海綿后 ， 即可夾好轉(zhuǎn)膜模具 。 紅對紅 ， 黑對黑接好轉(zhuǎn)膜裝置 （ 及電泳裝置 ） 。 注避免產(chǎn)生氣泡 ， 如有氣泡 ， 可用鑷子將膜的四角輕輕提起 ， 排出氣泡 4 蓋上玻璃平皿 ， RT下孵育 2hours 5 TBST 10min 2 ； TBS 10min 1 二 抗 ， 加 1： 1000 的二抗1000ul（ 1ul mouse 抗人
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