【正文】 在培養(yǎng)介質中 添加不同種類或不同濃度的外源激素 誘導形態(tài)發(fā)生已受到廣泛的重視。 ? 一些研究表明， ABA?對植物體細胞胚的發(fā)生與發(fā)育具有重要作用。 ? 單子葉植物和雙子葉植物誘導體細胞胚胎發(fā)生時，所要求的 2,4D的濃度不同，對單子葉植物而言，一般要求較高濃度的 2,4D，其濃度范圍為 ，通常使用濃度為 2mg/L； ? 而對雙子葉植物而言，一般要求較低濃度的 2,4D，其濃度范圍為，通常使用的濃度為 。 B: 品種 AT120，在添加 mM centrophenoxine培養(yǎng)基上 。 and F:品種VC1，在添加 mM picloram培養(yǎng)基上 . 圖 含不同種類和不同濃度生長素固體培養(yǎng)基上成熟花生胚軸體細胞胚誘導 ? ② 其它生長激素與體細胞胚發(fā)生 ? 除 2,4D外， ABA對植物體細胞胚的發(fā)生也起到重要的調(diào)控作用。 ? 在拐芹中 ABA與 NAA共同作用可誘導一些游離氨基酸含量的變化和特異蛋白的形成。 舉例說明 ： **已 發(fā)現(xiàn)胡蘿卜的胚性細胞中腐胺、精胺含量比非胚性的高， 在胡蘿卜體細胞胚發(fā)生的前胚時期多胺含量一般較低，從球形胚、心形胚到魚雷胚時期， 精胺和亞精胺逐漸升高，心形胚時期以腐胺為主，魚雷胚時期則富含亞精胺 。 **研究表明，小麥的愈傷組織一旦分化為 胚性細胞 后就有 淀粉 粒 的積累 ，在胚性細胞分化與發(fā)育的整個過程中， 淀粉的兩次合成高峰均在發(fā)育的重要轉折期， 為體細胞胚的進一步發(fā)育和分化提供必要 物質和能量基礎。 **在 小麥 愈傷組織誘導 體細胞胚 發(fā)生中也發(fā)現(xiàn) Zn2+、Cu2+、 Co2+、 Mn2+等金屬離子具有重要的 促進作用 ，不僅 可提高誘導頻率 ，而且還可以 加速胚性愈傷組織的形成 ，因此，在培養(yǎng)基中 加入適合濃度金屬離子 可提高體細胞胚發(fā)生的頻率。只有表皮下細胞具有真正細胞全能性和有能力直接產(chǎn)生體細胞胚（胚胎發(fā)生區(qū)），而不用通過愈傷組織階段的誘導。E m2 s1） 品種 Fayette（光照強度510 181。 **胡蘿卜 、 棉花 、 玉米 、 甘藍 、 萵苣 、 苜蓿等人工種子制作獲得成功 。根據(jù)使用者的目的，可向人工胚乳內(nèi)自由添加有利于胚狀體正常萌發(fā)所需的各種營養(yǎng)成分、防病蟲物質、植物激素等，也是人工種子優(yōu)越于天然種子之處。 ? （ 2）人工種皮包裹的繁殖體。 （ 2）固定雜種優(yōu)勢，使 Fl雜交種可多代利用，使優(yōu)良的單株能快速繁殖成無性系品種，從而大大縮短育種年限。 ( 6 )與試管苗相比成本低，運輸方便 (體積小 )，可直接播種和機械化操作。 人工胚乳的研制。 ***人工種子制備包括胚狀體的誘導與同步化、人工種子的包埋、人工胚乳的制作、人工種皮的制作、人工種子貯藏等步驟內(nèi)容。 滲透壓分選：基于體細胞胚不同發(fā)育階段滲透壓明顯變化，選擇比較一致的同一發(fā)育時期的體細胞胚。 阻斷和解除法：適當阻斷細胞循環(huán)過程，使培養(yǎng)細胞同步化，然后解除阻斷，以控制體細胞胚發(fā)育同步化。 3 包埋方法： 經(jīng)研究認為 藻酸鹽所形成的膠囊 是目前最好的凝膠包埋材料，所采用的主要方法是 滴注和裝膜 兩種。一般藻酸鈉的濃度控制在 2％－ 3%，在CaCl2中停留實踐不要超過 10min，以免膠囊太硬而影響發(fā)芽。 用 Elvax作為人工種皮的具體操作程序為： （ 1）、將 4g藻酸鈣膠囊置于 20mL含 甘油的氫氧化鈉溶液中攪拌 1min； （ 2）、在 50mL環(huán)乙烷中加入 10%的 Elvax4260。 轉換方法 **轉換的方法可分為無菌條件下的轉換和土壤條件下的轉換。 如麥芽糖代替蔗糖 ， 有利于體細胞胚的萌發(fā)和轉換 。 b、土壤試驗：人工種子的土壤轉化試驗報道較少。 b、 ％（ W/V）的麥芽糖有利于提高轉化率。人工種子的壽命，其最理想的狀態(tài)是能夠與真正的合子胚種子的壽命一樣長，只有這樣，才有利于人工種子的儲藏和萌發(fā)。 ? 干燥法和低溫法是目前應用最多的方法。 ? 如茶枝柑 ( C itrusreticu la ta 的人工種子 ,儲存 1個月仍具很高轉化率。 ? 馬鈴薯芽尖在 MS培養(yǎng)基上培養(yǎng) 2 d后 ,用海藻酸鈉包被 ,儲藏 270 d、 360 d和 390 d 后在 MS培養(yǎng)基上的萌發(fā)率分別是 100%、 70. 8%和 25%。并發(fā)現(xiàn)液體石蠟對幼苗的呼吸和光合作用有一定的阻礙作用。 ? （ 3） 超低溫儲藏技術 ? 超低溫一般是指 80℃ 以下的低溫 , 如超低溫冰箱 ( 80～ 150℃ ) 、液氮 ( 196℃ )等。 ? 脫落酸 (ABA)是一種植物逆境激素 ,可以誘導產(chǎn)生蛋白質、多胺、脯氨酸和淀粉等物質的增加 ,使體細胞胚在干燥處理中受到保護。 ? （ 4）干燥法 ? 干化的人工種子更像天然種子，具有更長的儲藏壽命。 人工種子的應用目前存在的問題 （ 1） 許多有價值的基因作物 ， 特別是那些不易獲得種子和自然增殖率極低的植物 ， 目前尚未顯示出較好的體細胞胚發(fā)生能力 ， 或胚的生活力差； （ 2） 有些作物雖然可以誘導出體細胞胚 ， 但胚胎發(fā)生機制研究不夠 ， 而且同步化等技術尚未解決 ， 因而難以達到大量控制同步化的目的； （ 3） 人工種子的成本遠高于自然種子； （ 4） 人工種子貯藏 、 運輸和加工以及機械化播種 ， 尚未完全解決 ， 許多問題尚待進一步研究和探索 。 。 例如：多年生名貴藥材，高質量的木材和橡膠樹或優(yōu)質果樹以及珍惜瀕危植物等。 Hammatt等（ 1987）把大豆體細胞胚干化到原體積的 40%50%后再吸水，萌發(fā)率仍達到 31%。結果發(fā)現(xiàn)存活的體細胞胚是由 ABA處理的胚 ,而用 JA處理不能達到此效果。所以 ,植物繁殖體在超低溫過程中不會引起遺傳性狀的改變 ,也不會丟失形態(tài)發(fā)生的潛能。干燥后的人工種子 ,在 2℃ 的液體石蠟中 , 2個月后只有 2%萌發(fā)。美國已有報道 ,把人工種子放在液體石蠟中 ,保存時間可達 6 個月以上。 ? 非體細胞胚人工種子可以在 4℃ 下儲藏更長的時間 ,Mandal等 ( 2022對 4 種羅勒屬 ( Ocim um )的植物腋芽進行包被 ,可保存 60 d,并使植物耐寒性提高。 ? 常用的溫度一般是 4℃ 。因此，儲藏和萌發(fā)是人工種子研制的主要難點之一。 因此，必須在人工種子中貯藏必需的養(yǎng)分或供給外源營養(yǎng)物質。 （ 5）、土壤條件的轉換人工種子轉化率低的主要限制因子 a、研究無機鹽在轉換中的重要性時表明，沒有硝酸鉀、硫酸鎂、氯化鈣時就不會發(fā)生轉換，缺乏磷酸銨，轉化率從 30%降至 5%。人工種子真正目的是直接播種于土壤，即在活體條件下，使轉換成功。 一般是將新制成的人工種子播種在 1/4MS培養(yǎng)基 ， 附加 %麥芽糖 、8g/L的瓊脂中 ， 培養(yǎng)后統(tǒng)計人工種子形成完整植株的數(shù)目 ，即人工種子的轉化率 。如此重復 4－ 5次，最后用石油醚沖洗干凈，經(jīng)尼龍布過慮后在空氣中風干即可。 滴注法 人工種子包埋過程示意圖 （ 2）裝膜法 制備人工種子是把體細胞胚混合到一個溫度較高的膠液中，然后滴注到一個有小坑的微滴板上，隨著溫度降低變?yōu)槟z而形成膠丸。體細胞胚包在膠囊中的位置不宜處在中央，宜偏在一邊以利萌發(fā)。 化學方法 物理方法 體細胞胚誘導與同步化控制 體細胞胚誘導與同步化控制 a 成熟的體細胞胚；