《基因與基因工程》ppt課件(文件)
【正文】 核 酸內(nèi)切限制酶。 c. 最佳連接溫度： 4～ 16℃ 。 （ 3） 質(zhì)粒 DNA的分子構(gòu)型 a. sc構(gòu)型 …… 即 cccDNA所呈現(xiàn)的超螺旋構(gòu)型， 走在凝膠的最前面； b. OC構(gòu)型 …… 即開環(huán) DNA（ OC DNA）的構(gòu)型，其中一條 DNA鏈保持完整的環(huán)形結(jié)構(gòu)，另一條鏈則出現(xiàn)一至數(shù)個(gè)缺口，走在凝膠的最后面； c. L構(gòu)型 …… 發(fā)生雙鏈斷裂形成的線性 DNA的構(gòu)型。 (a) 將硝酸纖維素濾膜鋪放在生長著轉(zhuǎn)化菌落的平板表面，使其中的質(zhì)粒 DNA轉(zhuǎn)移到濾膜上； (b) 取出濾膜，作溶菌、堿變性、酸中和等處理后，置 80℃ 下烤干； (c) 帶有 DNA印跡的濾膜同 32P標(biāo)記的適當(dāng)探針雜交，以檢測帶有重組質(zhì)粒（含有被研究的 DNA插入片段 )的陽性菌落； (d) 將放射自顯影的 X光底片同保留下來的原菌落平板對照，從中挑出陽性菌落，供進(jìn)一步的分析研究。 …… 供外源基因的插入構(gòu)建重組體 分子。 （ 2）基因工程在工業(yè)生產(chǎn)上的應(yīng)用： ；； ； 的開發(fā)。 謝謝大家 再見！ 。 （ 4）基因工程在環(huán)境衛(wèi)生上的應(yīng)用： 質(zhì)； 。 8. 克隆的真核基因在大腸桿菌中表達(dá) cDNA序列； 序列取向的條件下，克隆在大腸桿菌表達(dá)載體的適當(dāng)?shù)奈稽c(diǎn)上； ，從而能夠在大腸桿菌細(xì)胞中正確地轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯，并表達(dá)出所克隆的真核目的基因的蛋白質(zhì)。 b. 標(biāo)記基因 …… 抗菌素抗性基因。 （ 4）質(zhì)粒載體必須具備的條件 a. 一般具有 l個(gè)復(fù)制區(qū)或復(fù)制因子； l到 2個(gè)抗生素抗性基因（供選擇重組子）； （供外源 DNA片段的插入）； （質(zhì)粒載體的克隆能力約 56kb）。 （ b）質(zhì)粒的一般特性 共價(jià)、閉合、環(huán)形雙鏈的 DNA分子（ covalently closed circuler DNA,cccDNA） 除了酵母殺傷質(zhì)粒 RNA外，所有的質(zhì)粒都是 DNA。 （ 2）連接條件： a. 被連接的兩條 DNA片段，一條鏈的 3’末端具有一個(gè)游離的 OH集團(tuán)；另一條的 5’末端存在一個(gè)磷酸集團(tuán)（ P）。 339。 339。 （ 2） 幾種常用限制酶的識別序列 BamH I 5’GGATCC3’ 3’CCTAGG5’ EcoR I 5’GAATTC3’ 3’CTTAAG5’ Hind III 5’AAGCTT3’ 3’TTCGAA5’ Pst I 5’CTGCAG3’ 3’GACGTC5’ （ 3） DNA分子的體外切割 ―― 在體外的反應(yīng)體系中，在一定溫度下保溫（一般是 37℃ ），核酸內(nèi)切限制酶便可以對雙鏈 DNA分子進(jìn)行切割作用。 3. 核酸內(nèi)切限制酶 DNA分子的“剪刀” （ 1） 定義：核酸內(nèi)切限制酶（ Restriction endonuclease），又叫做限制酶（ Restriction enzyme），是一類能夠識別雙鏈 DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割雙鏈 DNA分子的核酸內(nèi)切酶。例如從同一個(gè)受精卵分裂而來的同卵雙生子（ monozygotic twins），便是屬于同一克??； ? 細(xì)胞水平 ┈ 從同一個(gè)祖細(xì)胞分裂而來的一群遺傳上同一的細(xì)胞群體。 （ 2） “ 克隆 ” 一詞的概念 在中文中 “ 克隆 ” 一詞兼具名詞、動詞和形容詞三種不同詞義。 （ 1）基因克隆與 DNA克隆 ? a. 在 DNA克隆中插入載體的 DNA片段，絕大多數(shù)是不含有 基因編碼序列的，或者說是不含有完整的基因編碼序列的。 （ c） “ 中心法則 ” 、 “ 操縱子學(xué)說 ” 和遺傳密碼的破譯， 從而解決了遺傳信息的流向和表達(dá)問題。 b. 在上一世紀(jì) 50年代揭示了 DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理， 從而解決了基因的自我復(fù)制和遺傳傳遞的問題。而諸如高等植物和動物，細(xì)胞中的染色體被核膜包圍成一種有形的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)，屬于真核生物。 （ 3）通用遺傳密碼表 第一位字母（ 5’ 末端） 第二位字母 第三位字母（ 3’ 末端） U U C A G U C A G Phe Phe Leu Leu Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr Stop Stop Cys Cys Stop Trp C Leu Leu Leu Leu Pro Pro Pro Pro His His Gln Gln Arg Arg Arg Arg U C A G A Ile Ile Ile Met Thr Thr Thr Thr Asn Asn Lys Lys Ser Ser Arg Arg U C A G G Val Val Val Val A
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