高二生物血紅蛋白的提取和分離(文件)
【正文】 mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時(shí)。 注意事項(xiàng) ： 底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。 （ 2）凝膠色譜柱的裝填 ① 凝膠的選擇： A、材料： 交聯(lián)葡聚糖凝膠（ G75）。 ③ 凝膠色譜柱的裝填方法： A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上。 ④ 洗滌平衡： 裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用 300ml的 20mmol/l的 磷酸緩沖液（ pH為 ） 充分洗滌平衡 12小時(shí) 。 ②滴加透析樣品： 吸管吸 1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，同時(shí)注意不要破壞凝膠面。 （在分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說明色譜柱制作成功） ⑥ 注意： 正確的加樣操作： 不要觸及并破壞凝膠面。貼壁加樣。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。 ： ：（略） 觀察你處理的血液樣品離心后 是否分層 （見教科書圖 518）， 如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。 A分子的大小 B相對(duì)分子質(zhì)量的大小 C帶電荷的多少 D溶解度 2．緩沖液的作用是：在一定范圍內(nèi)，抵制外界的影響來維持（ ）基本不變。 A白細(xì)胞 B血小板 C紅細(xì)胞 D淋巴細(xì)胞 6．為防止血液凝固，在采血容器中要預(yù)先加入抗凝血?jiǎng)? ）。 A相同 B相反 C相對(duì) D相向 4. 哺乳動(dòng)物和人的成熟的紅細(xì)胞中的（ ）與氧氣的運(yùn)輸有關(guān)。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出； 如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià) 你是否完成了對(duì)血液樣品的處理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？ 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到 血紅蛋白溶液 ，即 :樣品的處理；再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后 通過凝膠色譜法 將相對(duì)分子質(zhì)量較大的 雜質(zhì)蛋白除去 ，即 :樣品的純化；最后經(jīng) 聚丙烯酰胺凝膠電泳 進(jìn)行純度鑒定。 思考下面的問題： 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范
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