【正文】 括病毒蛋白與宿主蛋白相互作用及形成的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)在病毒感染過程中的結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能；其對宿主免疫反應(yīng)的調(diào)控；宿主天然防御因子的分子作用機制及結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究；以及宿主因子在艾滋病易感性、病程進展及耐藥性發(fā)生中的作用。課題1．病毒與宿主蛋白相互作用及其蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的功能與結(jié)構(gòu)生物學(xué)的研究。1． VifF1是否調(diào)節(jié)HIV1 Vif在細胞內(nèi)的分布。⑸. VifF1是否能夠誘導(dǎo)HIV1 Vif構(gòu)象變化，提高與Cul5ElonginBElonginC E3連接酶的結(jié)合。⑴．HIV病毒蛋白 Vpx的分子作用機制。新的細胞內(nèi)抗病毒因子的鑒定。⑴ HIV1 Vif蛋白結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。課題目標：1） 完善病毒蛋白形成的E3泛素化連接酶的模型；2） 確定新調(diào)控因子在HIV1病毒感染中的作用機制；3） 確定HIV Vpr和Vpx的生物學(xué)功能和分子作用機制；4） 鑒定和定義新的宿主細胞內(nèi)抗病毒因子；5） 獲得兩種復(fù)合物的高質(zhì)量、適合X射線衍射的單晶體及其他關(guān)鍵蛋白質(zhì)相關(guān)結(jié)構(gòu)域的晶體并且解析，通過晶體結(jié)構(gòu)解析病毒重要蛋白及其復(fù)合物的結(jié)構(gòu)；6） 發(fā)表SCI研究論文1518篇，其中IF＞10的研究論文12篇，IF＞5的研究論文810篇；7） 申請23項專利；8） 培養(yǎng)35名博士后，1015名博士研究生。2. 研究宿主因子遺傳多態(tài)性與艾滋病易感性及病程進展的相關(guān)性。5) 探索通過抑制APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力降低病毒變異和耐藥性發(fā)生頻率的新防治策略6) 發(fā)表相關(guān)SCI文章1215篇，力爭在Nature、Cell等頂級雜志發(fā)表文章1篇；7) 申請相關(guān)專利35項，其中國際專利12項；8) 培養(yǎng)中青年研究骨干3人，研究生15名。3 Tetherin影響病毒感染性的機制。宿主天然防御因子結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。A3G的分子作用機制研究顯示它特異性結(jié)合RNA形成核酸蛋白復(fù)合物，在體外表達體系中加入此共因子以輔助A3G N端蛋白的正確折疊和可溶性表達，以便于在體外條件下進行結(jié)晶條件篩選、優(yōu)化，最終獲得A3G N端蛋白晶體結(jié)構(gòu)的解析。課題目標：1）確定宿主防御因子Tetherin、A3G的抗病毒作用機制；2）鑒定新的宿主細胞因子；3）確定病毒蛋白與宿主限制因子相互作用的生物學(xué)功能；4）用結(jié)構(gòu)生物學(xué)手段解析宿主限制因子Tetherin、A3G及其復(fù)合物的結(jié)構(gòu)；5）培養(yǎng)中青年研究骨干5人以上，研究生10名；6）申請抗HIV病毒創(chuàng)新藥物靶點的專利12項；7）在SCI收錄雜志上發(fā)表論文810篇，力爭在國際頂尖雜志發(fā)表文章。特別是HIV Gag基因突變株對病毒出芽能力的作用和機理。3 TSG101功能結(jié)構(gòu)域的修飾和蛋白降解調(diào)控。6 建立高通量篩選HIV1感染潛伏期和重激活系統(tǒng)。1 關(guān)鍵宿主細胞因子調(diào)節(jié)HIV1前病毒的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。1 HIV1 蛋白與關(guān)鍵宿主細胞因子相互作用和功能結(jié)構(gòu)域。⑴ 關(guān)鍵宿主細胞因子對干擾素和淋巴因子的調(diào)節(jié)作用。6 基于關(guān)鍵宿主細胞因子HIV1感染潛伏期和重激活藥物篩選系統(tǒng)。（這些蛋白或者截短體及復(fù)合物下面簡稱為目標蛋白）；純化分離上述目標蛋白。發(fā)表SCI文章34篇。第四年繼續(xù)研究VifF1的調(diào)節(jié)作用；通過免疫共沉淀以及對抗病毒因子抑制作用等實驗研究VifF1與HIV1 Vif的分子作用功能區(qū)，為創(chuàng)新藥物開發(fā)提供新靶點；繼續(xù)研究SAMHD1的廣譜抗病毒能力和作用機理；繼續(xù)研究Vpr分子中行使不同功能的功能區(qū)；通過沉默、免疫共沉淀等技術(shù)對新的病毒因子進行功能研究；繼續(xù)對于獲得晶體的蛋白開展結(jié)構(gòu)解析工作；對于已經(jīng)完成結(jié)構(gòu)解析的蛋白開展相關(guān)的功能研究。全面總結(jié)病毒蛋白Vif、Vpx、 Vpr及其形成的蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的相互作用、作用機制；提出新的病毒宿主相互作用的分子機理；完成46種以上目標蛋白的三維結(jié)構(gòu)解析；發(fā)表SCI文章56篇。對HIV感染者（包括長期非進展和進展者）的CD4計數(shù)和病毒載量進行定量，確定宿主因子遺傳多態(tài)性與艾滋病毒感染、發(fā)病及疾病進展之間的相關(guān)性。3. 克隆并表達暴露未感者和長期非進展者中的宿主因子突變體。2. 研究不同物種來源的APOBEC3超家族成員在其相應(yīng)的逆轉(zhuǎn)錄病毒中引入非致死性突變的能力，對病毒基因組突變頻率的影響；3. 闡明APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力與HIV1耐藥性形成的相關(guān)性。2. 闡明APOBEC3超家族成員的非致死性突變能力與HIV1耐藥性形成的相關(guān)性（繼續(xù)）。第五年1. 探索以宿主因子遺傳多態(tài)性為分子標志物預(yù)測HIV1易感人群和病程進展的可行性。(1) Tetherin在細胞膜病毒裝配和出芽過程中的作用。(1) Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。(2) Tetherin抑制HIV1病毒顆粒的細胞間傳播機制。3. 宿主天然防御因子結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。第三年1. 宿主限制因子Tetherin的抗病毒作用機制。(2) Vpu介導(dǎo)的CD4和Tetherin降解途徑的關(guān)系。(2) A3G及其復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析。(3) Tetherin影響病毒感染性的機制。3. 宿主天然防御因子結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。2）明確是否存在病毒與抗病毒因子（Vpu/Tetherin）復(fù)合物中的新細胞因子。(1) Tetherin在細胞膜病毒裝配和出芽過程中的作用。(1)Vpu結(jié)合Tetherin后在細胞內(nèi)的運轉(zhuǎn)過程。(1) Tetherin蛋白及形成的蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)研究。4）發(fā)表文章34篇年度課題四 研究內(nèi)容課題四 預(yù)期目標第一年1．構(gòu)建綠色熒光蛋白標記的艾滋病毒株；2. 建立艾滋病毒感染巨噬細胞/T細胞系統(tǒng)；3. 構(gòu)建具有基因調(diào)控系統(tǒng)的巨噬細胞/T細胞系。；，相當于23倍的全基因組基因突變。第四年；；； ；；。；。；4. 發(fā)表文章12篇。第二年。1）闡明宿主限制因子Tetherin抗病毒作用機制2） 明確Vpu/Tetherin相互作用關(guān)系。(3)鑒定病毒與抗病毒因子（Vpu/Tetherin）復(fù)合物中的新細胞因子。(3) Tetherin影響病毒感染性的機制。4）發(fā)表文章34篇。(2)A3G及其復(fù)合物結(jié)構(gòu)解析。(2) Vpu介導(dǎo)的CD4和Tetherin降解途徑的關(guān)系。2）明確Vpu和Tetherin相互作用位點及運轉(zhuǎn)命運3）初步解析Vpu和Tetherin的結(jié)構(gòu)4）發(fā)表文章23篇第四年1. 宿主限制因子Tetherin的抗病毒作用機制。3. 宿主天然防御因子結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究。(3) Tetherin影響病毒感染性的機制。1）繼續(xù)深入各研究方向工作，總結(jié)分析試驗結(jié)果。(1)Vpu結(jié)合Tetherin后在細胞內(nèi)的運轉(zhuǎn)過程。第二年1. 宿主限制因子Tetherin的抗病毒作用機制。(1) Vpu結(jié)合Tetherin后在細胞內(nèi)的運轉(zhuǎn)過程。2) 明確降低非致死性突變對預(yù)防耐藥性突變的意義。1) 明確APOBEC3超家族成員在逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組變異和耐藥性形成中的作用。2) 發(fā)表文章34篇。2) 發(fā)表文章34篇。2) 發(fā)表文章12篇第二年1. 宿主因子遺傳多態(tài)性的研究（繼續(xù)）。定性和定量地研究艾滋病毒感染者和艾滋病人（特別是暴露未感者和長期非進展者）的外周血單核細胞中APOBEC3超家族成員、Tetherin、TSG101等關(guān)鍵宿主因子的轉(zhuǎn)錄水平，蛋白表達及基因多態(tài)性。發(fā)表SCI文章34篇。確定VifCul5EloB/C E3連接酶的形成模型；獲得一系列不同SAMHD1的突變體，確定SAMHD1中的主要功能區(qū)；同時確定SAMHD1對其它逆轉(zhuǎn)錄病毒HBV的作用，評價它的廣譜抗病毒能力；確定Vpr誘導(dǎo)細胞凋亡的分子機制；通過質(zhì)譜鑒定和分析，篩出23個重要的特異性結(jié)合蛋白質(zhì)；獲得總共4種以上目標蛋白的晶體，同時完成其中2種以上蛋白的晶體結(jié)構(gòu)研究。發(fā)表SCI論文12篇；第二年應(yīng)用VifF1 shRNA沉默的穩(wěn)定表達細胞系，研究VifF1對HIV1 Vif的磷酸化修飾作用；用限制性蛋白水解法研究VifF1是否能夠誘導(dǎo)HIV1 Vif的構(gòu)象變化；研究Vpx蛋白對不同種屬SAMHD1的抑制及不同種屬SAMHD