蛋白質(zhì)與dna的相互作用(文件)
【正文】 七頁(yè)。,1X107細(xì)胞(x236。n),用不含NP40的裂解液洗一次,100ul提取緩沖液,干冰異丙醇速凍，反復(fù)凍融3次,離心,沉淀 —800C保存,第二十二頁(yè)，共三十七頁(yè)。,1.蛋白質(zhì)和DNA結(jié)合復(fù)合物半衰期短 電泳緩沖液低離子強(qiáng)度 凝膠的籠效應(yīng) 2.探針以20200bp 為宜。,DNA足跡(zj236。) 5.DNA序列是固定的,第二十七頁(yè)，共三十七頁(yè)。)試驗(yàn)：蛋白質(zhì)和DNA結(jié)不結(jié)合， 不能確定結(jié)合的序列 DNA足跡分析：蛋白質(zhì)結(jié)合DNA的序列 不能確定序列鹼基變化對(duì) 結(jié)合的影響 隨機(jī)PCR:結(jié)合序列鹼基變化對(duì)結(jié)合的影響,第二十九頁(yè)，共三十七頁(yè)。,探針(t224。,特異(t232。jiāo)試驗(yàn),確定(qu232。h233。 xie),第三十六頁(yè)，共三十七頁(yè)。伸展β—折疊Cβ間距離是0.7nm。pH 7.9。n) —800C保存。,。1.AAGAATTC—NNNNNNNNN—GGATCCAA。沉淀(ch233。Lys和Gly,Lys在螺旋兩側(cè)，Gly夾在中間。ir243。)DNA能否和蛋白質(zhì)結(jié)合 足跡法，測(cè)序確定DNA序列 合成DNA 制備親和層析柱 蛋白過(guò)親和柱純化,第三十五頁(yè)，共三十七頁(yè)。ng)與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)分子量 蛋白質(zhì)進(jìn)行SDSPage 轉(zhuǎn)移硝酸纖維素膜 與核酸探針雜交,第三十四頁(yè)，共三十七頁(yè)。)結(jié)合序列的克隆和序列分析： 酶切隨機(jī)核苷酸序列與質(zhì)粒重組 用引物對(duì)質(zhì)粒序列進(jìn)行分析 N1 N2 N3 N4 N5 A 14/0.32 13/0.30 4/0.11 5/0.11 14/0.32 C 9/0.21 12/0.27 23/0.52 26/0.59 7/0.16 G 4/0.01 6/0.1
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