南農(nóng)傳染病實(shí)習(xí)報(bào)告(文件)
【正文】 細(xì)胞，在接種三天后可以明顯見到陽性樣品的細(xì)胞空泡病變，但是并沒有進(jìn)行病毒基因組的提取以及PCR基因擴(kuò)增的鑒定，因此只能初步定為藍(lán)耳病病毒的感染。在第一天TSA配制過程中，相關(guān)負(fù)責(zé)的同學(xué)沒有將TSA搖勻，導(dǎo)致最后倒出來的液體特別粘稠，剛從高壓鍋拿出來，還沒來得急倒，平板就凝固了。輕輕劃線，一定要利用腕力，很多同學(xué)將平板劃破了，同時(shí)注意劃線時(shí)盡量靠近酒精燈。a) 操作前，要先帶手套，然后開啟風(fēng)扇，開始操作前要用70％酒精擦拭手套，然后是實(shí)驗(yàn)用品，特別是一些瓶口，管口，蓋子。c) 進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)菌接種時(shí)，特別要細(xì)心，動(dòng)作要熟練準(zhǔn)。有些是實(shí)驗(yàn)結(jié)果，有些是關(guān)鍵的操作步驟，倘若結(jié)果又問題，可以迅速的聯(lián)想到可能出錯(cuò)的地方。實(shí)習(xí)單位考核意見評(píng)語（在校內(nèi)實(shí)習(xí)本欄不用填）：考核等級(jí)（五級(jí)記分制）：實(shí)習(xí)單位指導(dǎo)教師（簽名）：實(shí)習(xí)單位（蓋章）年 月 日指導(dǎo)教師考核意見評(píng)語：考核等級(jí)（五級(jí)記分制）：指導(dǎo)教師（簽名）：年 月 日備注１４。在此很感謝王老師全稱為我們講解，出現(xiàn)問題的時(shí)候也沒有顯得很不高興，而是說出錯(cuò)是好事，這樣能讓大家加深印象，況且也在學(xué)校里，爭取以后不再重犯就好了。王老師另外介紹了培養(yǎng)PRRS用肺泡巨噬細(xì)胞PAM，分離PCV‖用PK15，分離PRV可用PK1PHA21，分離PPV可用ST，分離豬瘟可用vero、PK1ST等。b) 小心取用無菌之實(shí)驗(yàn)物品，勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。甚至是，有同學(xué)用副豬嗜血桿菌進(jìn)行陽性對(duì)照劃線培養(yǎng)后依舊沒有長菌，說明接種環(huán)還未冷卻就接觸了病料。3. 對(duì)豬剖檢前，要將豬放血處死，在豬頸部把血管隔斷時(shí)，還要注意不能將氣管割破，不然豬會(huì)將血嗆到肺中，影響后繼檢查。特別是掌握了豬細(xì)菌與病毒混合感染的病原分離與鑒定。確認(rèn)分離到的是一種未知的球菌和副豬嗜血桿菌。有些部位的淋巴結(jié)腫脹，肺臟和脾臟有一些病變，其中脾臟病變類似圓環(huán)病毒感染。蔗糖果糖半乳糖D核糖麥芽糖脲酶試驗(yàn) + + + 氧化酶接觸酶+硫化氫+鳥氨酸未知乙胺酰胺未知注：“＋”表示產(chǎn)酸；“○”表示產(chǎn)氣；“”表示既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣；“－”表示不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣。陽性對(duì)照組的衛(wèi)星現(xiàn)象很明顯，陽性菌菌落很大，金葡菌養(yǎng)分被吸收未長菌。(二) 鏡檢將1號(hào)樣進(jìn)行染色鏡檢油鏡觀察。后面一棟是備用豬舍，選取體型良好的作為后備種母豬或種公豬，發(fā)酵床養(yǎng)豬在東北地區(qū)推廣較好，但參觀時(shí)發(fā)現(xiàn)江浦農(nóng)場豬舍并沒有使用發(fā)酵床，可能是由于南京地區(qū)夏天比較熱，發(fā)酵床發(fā)酵會(huì)產(chǎn)生大量的熱量，倒不利于豬的生活。首先參觀的是保育舍，每個(gè)保育床上有10頭左右的保育豬。由于近年來牛奶行業(yè)食品問題頻發(fā)，比如三聚氰胺等添加劑的曝光，使得大家對(duì)中國本土奶業(yè)的質(zhì)疑聲日益升高。牛舍內(nèi)設(shè)一個(gè)清糞通道，路面要防止奶?；?。奶牛場：養(yǎng)殖中國荷斯坦奶牛奶牛場里牛舍的主要設(shè)施主要有牛床、飼槽、走道、糞尿溝。有禽場8幢，其中3幢為鵝場，可按家系飼養(yǎng)；4幢為雞場，規(guī)?；瘶?biāo)準(zhǔn)化雞籠和喂食喂水采蛋衛(wèi)生設(shè)施一應(yīng)俱全；1幢為人工孵化室，全自動(dòng)控溫控光。但由于沒有做陰性對(duì)照，所以降低了此次試驗(yàn)的科學(xué)性。(五) 鏡檢參照第一天顯微鏡檢查細(xì)菌的方法進(jìn)行操作將接于TSB液體培養(yǎng)基24h生長的細(xì)菌用接種環(huán)涂布于玻片進(jìn)行染色鏡檢，用油鏡觀察。有大量氣泡產(chǎn)生者為陽性。加鹽酸二甲基對(duì)苯二胺溶液一滴，陽性者呈現(xiàn)粉紅色，并逐漸加深，再加α萘酚溶液一滴，陽性者于半分鐘內(nèi)呈現(xiàn)鮮藍(lán)色。陰性反應(yīng)，不變色。b) 脲酶試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解尿素產(chǎn)生兩分子氨，培養(yǎng)基pH升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證明細(xì)菌有脲酶。2. 同時(shí)進(jìn)行脲酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)和接觸酶試驗(yàn)。2. 藥敏試紙片種類：頭孢噻肟、頭孢曲松、阿米卡星、青霉素G、氨芐西林、頭孢唑啉、諾氟沙星、環(huán)丙沙星、阿莫西林、阿奇霉素、慶大霉素、新霉素、氯霉素、紅霉素、林可霉素、復(fù)方新諾明。2. 接種陽性病料的板子長了三個(gè)菌落，一個(gè)較大，可能是雜菌，另外兩個(gè)較小，疑似副豬嗜血桿菌，所以就用這兩個(gè)菌落接入TSB液體培養(yǎng)基中3. 另外一塊板子上長得菌落稍大，并且在光下，45度角，可見藍(lán)色熒光，所以也來接種鑒定一下。2． 細(xì)胞接種a) 鏡檢觀察待細(xì)胞板上細(xì)胞鋪滿單層，棄去細(xì)胞板中的營養(yǎng)液；b) 在細(xì)胞板中加入過濾后的組織上清液200μL，同時(shí)設(shè)定陰陽性對(duì)照。肺組織細(xì)胞豬肺組織涂片鏡檢（X40）副豬嗜血桿菌陽性副豬嗜血桿菌涂片鏡檢（X40）第三天：病毒的分離接種（病料過濾和接種細(xì)胞）；分離細(xì)菌鏡檢和增殖（一）細(xì)菌菌落觀察，并且挑取單個(gè)菌落到TSB液體培養(yǎng)基中
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