《電泳分離技術(shù)》ppt課件(文件)
【正文】 首先運用雙向電泳技術(shù)將大腸桿菌總蛋白分離出 1100多個蛋白點 。 雙向電泳具有一些明顯的優(yōu)點 可在不同電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上構(gòu)建雙向電泳 雙向電泳的應(yīng)用 低豐度蛋白質(zhì)的檢測 蛋白質(zhì)檢測和分析 蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué) 毛細管電泳 毛細管電泳（ capillary elecrophoresis, CE）是 以高壓電場為驅(qū)動力，以毛細管為分離通道， 依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離分析的液相分離方法。 制備電泳綜述 制備等點聚焦 自由流動電泳 梯度流系統(tǒng) 多通道流動電泳 。 電極槽和進樣系統(tǒng) 清洗系統(tǒng) 毛細管 檢測器 鉑電極 電極槽 恒溫系統(tǒng) 記錄和數(shù)據(jù)處理 毛細管電泳的特點 柱效高，可達 105～ 106/m 分離速度快，幾十秒～幾十分鐘 溶劑和試樣消耗極少 沒有高壓泵，儀器成本比 HPLC更低 選擇性強 檢測器 紫外 /可見光檢測器 安培檢測器 MS 應(yīng)用 測序 基因治療與基因診斷 刑事偵查 單細胞分析 手性分離 小分子和離子分離 親和毛細管電泳 指在電泳過程中具有生物專一性親和力的兩種分子間，發(fā)生了特異性相互作用，形成受體 配體復(fù)合物，通過對比親和作用發(fā)生前后的電泳圖譜，可獲得有關(guān)受體 配體親和力大小、結(jié)構(gòu)變化、作用產(chǎn)物等方面的信息。 目前 ， 隨著蛋白組工程的發(fā)展 ， 雙向電泳技術(shù)越來越廣泛的用于發(fā)現(xiàn)未知蛋白 。 在電場存在下的一定 pH溶液中 ， 帶正電的蛋白分子將向負極移動而帶負電的蛋白分子將向正極移動 ， 在某一 pH時 ， 蛋白分子在電場中不再移動 ， 此時的 pH值即為該蛋白質(zhì)的等電點 。 由于無電荷濃度的影響，因此凝膠濃度選擇成為關(guān)鍵因素。 用 SDS凝膠電泳法測定分子量，每次測定樣品必須同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，而不得利用另一次電泳的標(biāo)準(zhǔn)曲線。排除了電泳過程中電荷的影響，使 SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳時，蛋白質(zhì)遷移率的差異僅是相對分子質(zhì)量的函數(shù)。顯色約 10分鐘，蛋白帶出現(xiàn)。 染色分為雙胺銀染和非雙胺銀染。 蛋白質(zhì)的染色程度與蛋白質(zhì)上的特殊基團有關(guān)， 堿性和含硫氨基酸 的存在對染色有貢獻。 理想顯色劑的 7S 安全 （ safety） 靈敏 （ sensitivity） 簡單 （ simplicity） 特異性 （ specificity） 快速 （ speed） 穩(wěn)定 （ stability） 兼容性 （ synergy） 考馬斯亮藍 R250：靈敏度是氨基黑 10B的 5倍，但不適用與酸溶蛋白、醇溶蛋白。 主要性能指標(biāo) 電內(nèi)滲 膠凝溫度 熔化溫度 凝膠強
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