實驗10雙縮脲法測定蛋白質(zhì)含量(文件)
【正文】 二、原理 一 、 分光光度法的基本原理及方法 （ 一 ） 利用吸收光譜對物質(zhì)進行定性分析 維生素 B12溶液的吸收光譜 主要方法： （ 1） 比較吸收光譜曲線 （ 2） 比較最大吸收波長 蛋白質(zhì)的最大吸收波長為 280nm； 核酸的最大吸收波長為 260nm。 微量凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)總含量 被測的天然含氮化合物與濃硫酸共熱時分解出氨 ， 氨與硫酸反應(yīng)生成硫酸銨 。 Folin酚試劑法 (Lowry法 )測定蛋白質(zhì)濃度 蛋白質(zhì)含有兩個以上的肽鍵 (—CO—NH—)，因此有雙縮脲反應(yīng) ， 在堿性溶液中 ， 能與 Cu2+形成絡(luò)合物 。 其不足之處是此反應(yīng)受多種因素干擾 。 利用紫外吸收法測定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點是迅速 、簡便 、 不消耗樣品 、 可回收利用 、 低濃度鹽類不干擾測定 。 Coomassie DyeBased 蛋白質(zhì)定量 PROTEIN + Amax = 595nm BLUE Acid Coomassie G250 Protein Dye Complex O CH 2 CH 3 NH C CH 3 CH 3 N CH 2 SO 3 CH 3 CH 2 N CH 2 CH 2 CH 3 SO 3 Na + 雙縮脲法測定蛋白質(zhì) * 雙縮脲反應(yīng)： 雙縮脲在堿性條件下與銅離子結(jié)合生成紫紅色化合物 ， 顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比 。 根據(jù)樣品的 OD540從標準曲線上查得樣品的蛋白質(zhì)含量（ mg/mL），再根據(jù)樣品的體積算出樣品的濃度。 返回 722型分光光度計的外形 光路 光路 。 2.*樣品蛋白
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