【正文】 學(xué)的奠基人。 10．伍連德(18791960) 我國廣東香山人，著名公共衛(wèi)生學(xué)家，我國海港檢疫創(chuàng)始人。 12．SARS Severe Acute Respiratory Syndrome的簡稱，嚴(yán)重急性呼吸道綜合征，即我國稱為的非典型肺炎，也簡稱為非典。4．微生物包括： 細(xì)胞結(jié)構(gòu)不能獨立生活的病毒、亞病毒(類病毒、擬病毒、朊病毒)；具 細(xì)胞結(jié)構(gòu)的真細(xì)菌、古生菌；具 細(xì)胞結(jié)構(gòu)的真菌(酵母、霉菌、蕈菌等)、單細(xì)胞藻類、原生動物等。8．19世紀(jì)中期，以法國的 和德國的 為代表的科學(xué)家，揭露了微生物是造成腐敗發(fā)酵和人畜疾病的原因，并建立了分離、培養(yǎng)、接種和滅菌等一系列獨特的微生物技術(shù)，從而莫定了微生物學(xué)的基礎(chǔ)，同時開辟了醫(yī)學(xué)和工業(yè)微生物學(xué)等分支學(xué)科。3大類微生物主要是 、 及 。 (1)少數(shù) (2)非常少數(shù) (3)不太多 (4)絕大多數(shù)3．微生物學(xué)的不斷發(fā)展，已形成了基礎(chǔ)微生物學(xué)和應(yīng)用微生物學(xué)，它又可分為( )的分支學(xué)科。 (1)I／10 (2)2／3 (3)1／20 (4)1／37．巴斯德為了否定“自生說”，他在前人工作的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了許多試驗，其中著名的( )無可辯駁地證實：空氣中確實含有微生物，它們引起有機(jī)質(zhì)的腐敗。 (1)鼠疫桿菌 (2)沙眼病原體 (3)結(jié)核桿菌 (4)天花病毒是非題 1．微生物是人類生存環(huán)境中必不可少的成員，有了它們才使得地球上的物質(zhì)進(jìn)行循環(huán)，否則地球上的所有生命將無法繁衍下去。 5．巴斯德不僅用曲頸瓶實驗證明微生物非自然發(fā)生，推翻了爭論已久的“自生說”，而且做了許多其他重大貢獻(xiàn)，例如：證明乳酸發(fā)酵是由微生物引起的，首次制成狂犬疫苗，建立了巴氏消毒法等。9．在基因工程的帶動下，傳統(tǒng)的微生物發(fā)酵工業(yè)已從多方面發(fā)生了質(zhì)的變化，成為現(xiàn)代生物技術(shù)的重要組成部分。問答題1．用具體事例說明人類與微生物的關(guān)系。由于一般情況下只有純培養(yǎng)物才能提供可以重復(fù)的結(jié)果，因此從混雜的天然微生物群中分離獲得某特定的微生物純培養(yǎng)，是研究和利用微生物的最重要的環(huán)節(jié)之一。 3．微生物個體微小，通常必須通過顯微鏡才能觀察到其個體形態(tài)，而進(jìn)行顯微觀察時，分辨率和反差是決定顯微觀察效果的兩個最重要的因素。二、重點、難點剖析 1．無菌技術(shù)是最基本的微生物學(xué)實驗操作技術(shù)，其核心是無菌概念的建立，以及正確而嚴(yán)格地按實驗教材和實驗課的要求，掌握在各種情況下的具體應(yīng)用原則和操作規(guī)范。但操作相對麻煩，熱敏感┃這3種方法可用于所有能在固體培 ┃┃ ┃板法┃菌有時易被燙死。但有時會因涂布不均勻使某些部位的┃罐或厭氧手套箱技術(shù)結(jié)合，這3種方┃┃培養(yǎng)┃平板┃菌落不能分開，進(jìn)行微生物計數(shù)時需對┃法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養(yǎng)┃┃基分┃法 ┃稀釋和涂布過程的操作特別注意，否則┃ ┃ ┃ ┃ ┃不易得到準(zhǔn)確的結(jié)果 ┃ ┃┃離 ┣━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━┫ ┃┃ ┃平板┃操作簡單，多用于對已有純培養(yǎng)的確認(rèn)┃ ┃┃ ┃劃線┃和再次分離 ┃ ┃┃ ┃法 ┃ ┃ ┃┃ ┣━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃稀釋┃稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于┃在缺乏專業(yè)的厭氧操作設(shè)備的情況 ┃┃ ┃搖管┃菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取┃ ┃┃ ┃法 ┃都相對困難 ┃下對嚴(yán)格厭氧菌進(jìn)行分離和觀察 ┃┣━━╋━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃稀釋┃工作量大，是否獲得純培養(yǎng)需依靠統(tǒng)計┃不能或不易在固體培養(yǎng)基上生長的 ┃┃ ┃法 ┃學(xué)的推測 ┃微生物進(jìn)行純培養(yǎng)分離或數(shù)量統(tǒng)計 ┃┃ ┣━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃ ┃一般不能直接獲得微生物的純培養(yǎng)，在┃1)根據(jù)某種微生物的特殊生長要求，┃┃液體┃富集┃通過富集培養(yǎng)使原本在自然環(huán)境中占少┃按照意愿從自然界中對這種微生物 ┃┃培養(yǎng)┃ ┃數(shù)的微生物的數(shù)量大大提高后，需再通┃進(jìn)行有針對性的有效分離；2)分離培┃┃基分┃培養(yǎng)┃過平板法進(jìn)行相應(yīng)微生物純培養(yǎng)的分離┃養(yǎng)出由科學(xué)家設(shè)計的特定環(huán)境中能 ┃┃離 ┃ ┃和檢測 ┃生長的微生物，盡管我們并不知道什┃┃ ┃ ┃ ┃么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長┃┣━━╋━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃單細(xì)┃分離過程直觀，可靠，但對儀器和操作┃從樣品中直接分離所需的微生物細(xì) ┃┃顯微┃胞(孢┃技術(shù)要求較高，多限于高度專業(yè)化的 ┃胞或孢子，獲得其純培養(yǎng) ┃┃操作┃子)挑┃科學(xué)研究。 培養(yǎng)基傳代：斜面、半固體性、平板等 生活態(tài) 寄主傳代常用的保藏技術(shù)術(shù) 冷凍：低溫冰箱、夜氮罐 休眠態(tài) 干燥：沙土管、冷凍真空干燥 值得指出的是，由于微生物的多樣性，不同的微生物往往對不同的保藏方法有不同的適應(yīng)性，迄今為止尚沒有一種方法能被證明對所有的微生物均適宜。5．樣品制備和顯微觀察也是微生物學(xué)的基本操作之一，應(yīng)按實驗教材和實驗課的要求，掌握在各種情況下微生物樣品制備和顯微觀察的基本原理和操作規(guī)范，了解各微生物類群在顯微鏡下的基本形態(tài)特征。其英文名稱是為紀(jì)念其發(fā)明者Julius Richard：Petri。 7．培養(yǎng)平板(culture plate) 常簡稱為平板，指固體培養(yǎng)基倒入無菌平皿，冷卻凝固后所形成的培養(yǎng)基平面。保溫培養(yǎng)后，在固體培養(yǎng)基表面得到生長分離的微生物菌落。 14．二元培養(yǎng)物(two—ponent culture) 由兩種具有特定關(guān)系（例如寄生或捕食）的微生物組成的混合培養(yǎng)物。觀察時通過激光器或載物臺掃描，計算機(jī)處理，最終獲得反差鮮明、高分辨率的三維立體數(shù)字圖像。為光學(xué)顯微鏡的最基本 ┃體形態(tài)的觀察 ┃┃ ┃ ┃配置，價格便宜、容易使用 ┃ ┃┃ ┣━━━╋━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃ ┃ ┃明視野顯微鏡下不易看清的活細(xì)胞┃┃ ┃暗視野┃通過特殊的聚光器實現(xiàn)斜射照 ┃的觀察；不易被染色或易被染色過┃┃ ┃顯微鏡┃明，亮物像形成于暗背景中 ┃程破壞的細(xì)胞的觀察（例如對梅毒┃┃ ┃ ┃ ┃密螺旋體的檢測）；觀察活細(xì)胞的 ┃┃ ┃ ┃ ┃運動性 ┃┃ ┣━━━╋━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃光學(xué)顯┃相差顯┃通過特殊的聚光器和物鏡提高樣┃活細(xì)胞及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)的觀察 ┃┃ ┃微鏡 ┃品不同部位間的反差(明暗差異)┃ ┃┃微鏡 ┣━━━╋━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃熒光顯┃經(jīng)熒光染料染色或熒光抗體處理┃環(huán)境微生物的直接觀察；病灶或 ┃┃ ┃微鏡 ┃的樣品在紫外線照射下激發(fā)出各┃醫(yī)學(xué)樣品中特定病原微生物的直 ┃┃ ┃ ┃種波長的可見光，在黑暗的背景┃接檢測（使用特定的熒光抗體） ┃┃ ┃ ┃中形成明亮的彩色物像 ┃ ┃┃ ┣━━━╋━━━━━━━━━━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃共聚焦┃激光作為光源，每次照明樣品的┃對完整細(xì)胞的細(xì)微立體結(jié)構(gòu)進(jìn)行 ┃┃ ┃顯微鏡┃一個點，連續(xù)掃描后經(jīng)計算機(jī)處┃觀察和分析 ┃┃ ┃ ┃理獲得樣品的二維或三維圖像。分 ┃一般用于觀察樣品的表面立體結(jié)構(gòu)┃┃ ┃鏡 ┃辨率遠(yuǎn)高于光學(xué)顯微鏡。 22．掃描電子顯微鏡(scanning electron microscope。 25．透射電子顯微鏡(transmission electron microscope) 這種顯微鏡用電子束透射樣品，用磁透鏡使散射的電子聚焦成像。 29．負(fù)染色(negative staining) 染料使背景顏色加深而樣品沒有著色的染色法。 33．球菌(COCCUS) 細(xì)胞大致呈球狀的細(xì)菌。 37．柄細(xì)菌(prosthecate bacteria) 細(xì)胞上有柄、菌絲、附器等細(xì)胞質(zhì)伸出物，細(xì)胞呈桿狀或梭狀，并有特征性細(xì)柄的細(xì)菌。 41．藻類(algae) 能進(jìn)行光合作用的真核微生物。4．用培養(yǎng)平板進(jìn)行微生物純培養(yǎng)分離的方法包括： 、 和 。7．一般說來，采用冷凍法時，保藏溫度越 ，保藏效果越 。11．在 的照射下，發(fā)熒光的物體會在黑暗的背景下表現(xiàn)為光亮的有色物體，這就是熒光顯微技術(shù)的原理。許多菌絲交織在一起，稱為 。它們個體微小，大多數(shù)都需要顯微鏡才能看見。冷凍真空干燥法可以長期保藏微生物的原因是微生物處于( )的環(huán)境，代謝水平大大降低。 (1)波長 (2)顏色 (3)相位 (4)振幅9．( )不是鑒別染色。4．直接挑取在平板上形成的單菌落就可以獲得微生物的純培養(yǎng)。8．與其他電子顯微鏡相比，掃描隧道顯微鏡在技術(shù)上的最大突破是能對活樣品進(jìn)行觀察。問答題 1．一般說來，嚴(yán)格的無菌操作是一切微生物工作的基本要求，但在分離與培養(yǎng)極端嗜鹽菌時常在沒有點酒精燈的普通實驗臺上傾倒培養(yǎng)平板、在日常環(huán)境中直接打開皿蓋觀察和挑取菌落，而其研究結(jié)果并沒有因此受到影響，你知道這是為什么嗎?2．如果希望從環(huán)境中分離得到厭氧固氮菌，你該如何設(shè)計實驗?3．為什么光學(xué)顯微鏡的目鏡通常都是15?是否可以采用更大放大倍率的目鏡(如30)來進(jìn)一步提高顯微鏡的總放大倍數(shù)?4．為什么透射電鏡和掃描電鏡對樣品厚度與大小的要求有如此大的差異?能否用掃描電鏡來觀察樣品的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，而用透射電鏡來觀察樣品的表面結(jié)構(gòu)?5．試論電子顯微鏡在進(jìn)行生物樣品制備與觀察時應(yīng)注意的問題。真菌、顯微藻類和原生動物等屬于真核微生物類，它們的特點是細(xì)胞直徑較大，細(xì)胞核有核膜包裹，染色質(zhì)由DNA和組蛋白構(gòu)成，細(xì)胞以有絲分裂或減數(shù)分裂方式繁殖，細(xì)胞內(nèi)有多種功能專一的細(xì)胞器等。原核微生物。革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁很厚，主要含肽聚糖和磷壁酸兩種成分；革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁雖然薄，但層次較多、成分復(fù)雜，除由肽聚糖組成的一薄層內(nèi)壁外，還有一層稱為外膜的外壁層。其每一單體由肽（四肽尾和肽橋）和聚糖（N乙酰葡糖胺和N乙酰胞壁酸交替排列）兩種成分構(gòu)成。2．真核微生物。由細(xì)胞骨架等組成的細(xì)胞間質(zhì)支撐著真核微生物的細(xì)胞質(zhì)，其內(nèi)包含著各種有一定結(jié)構(gòu)、執(zhí)行重要生理功能的細(xì)胞器，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、容酶體、微體、線粒體和葉綠體（僅存在于光合生物中）等。表3—1 G+ 和G－細(xì)菌肽聚糖單體的比較項目G+G——聚糖鏈—（G+M）n——（G+M）n—肽鏈四肽尾L—Ala︱D—Glu︱L—Lys︱D—AlaL—Ala︱D—Glu︱m—DAP︱D—Ala肽橋—（Gly）5—等無注：G：N—乙酰葡糖胺，M：N乙酰胞壁酸，m—DAP：內(nèi)消旋二氨基庚二酸 2．G－ 細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖構(gòu)造。 3．缺壁細(xì)菌。 表3—2 4類缺壁細(xì)菌的比較項目支原體L型細(xì)菌原生質(zhì)體球狀體形成原因自然進(jìn)化實驗室中自發(fā)突變?nèi)斯こ谌斯こ谥苽浞椒ā芫溉ケ诨蚯?