《酶的分離和純化》ppt課件(文件)
【正文】 其優(yōu)點是實驗裝置簡單 ， 測定也較為準確；缺點是要求蛋白樣品純度高 ， 否則測出的將是溶液中各種蛋白的平均分子量 。 經(jīng)過一系列純化步驟以后得到的 4mL酶制品 （ 含有 白 ） ， 總活力為 288單位 。 ⑴．從表中給出的信息計算每一純化步驟得到的酶溶液的比活； ? ⑵ ． 哪一純化步驟最有效 （ 即相對純度增加最大 ） ； ? ⑶ ． 哪一純化步驟效率最低 ？ ? 按照表中的 6個步驟純化的酶是純化的酶 ， 表中結(jié)果是否有指示 ？ 有沒有別的方法評價酶的純度 ？ 作 業(yè) ? 請說明酶純化過程中常用的分離技術(shù) 。 為了測定蛋白質(zhì)的分子量 ， 分別取幾個不同的蛋白質(zhì)濃度 c， 測出對應(yīng)的滲透壓 π， 然后以 π/c對 c作圖 ， 并作延長線外推至 c=0， 得到的 y軸截距即為 limπ/c的值 ， 代入上式可求得分子量 M。 g） 洗脫：更高親和力的物質(zhì)置換；劇烈改變環(huán)境條件 親和層析原理 Affinity chromatography 二、 超離心技術(shù) 利用物質(zhì)的沉降系數(shù)、質(zhì)量、浮力因子等方面的差別用強離心力進行分離 ? F = w2r （ F — 相對離心力 RCF； RCF以 g的倍數(shù)表示 ） ? RCF = w2r/980 w = π(轉(zhuǎn)數(shù) /分 ） / 30 ? RCF = 105 r(轉(zhuǎn)數(shù) /分 )2 ? 離心機： ? a) 桌式： 3000轉(zhuǎn) /分 紅血球 、 酵母細胞等粗沉淀物 ? b) 高速離心機： 20220 – 25000轉(zhuǎn) /分 一般實驗使用但病毒 、 小細胞器或單個分子不能沉降 ? c) 超速離心機： 75000轉(zhuǎn) /分 分子生物學必備；能分級只有在電鏡下才能看得見的亞細胞器 二、電泳（ electrophoresis）技術(shù) ? 1） 原理： M =d L / E t M: 遷移率 L: 顆粒泳動距離 t: 通電時間 E: 電勢差 ? 遷移率與下列因素有關(guān)： a） 樣品帶電狀態(tài) 、 分子形狀與大小 b） 電場強度 c） 緩沖液 pH的和離子強度 d） 支持介質(zhì)的阻力 、 吸附作用 ? 2） 電泳類型： a） 紙電泳 b） 醋酸纖維薄膜電泳 c） 瓊脂糖電泳 d） 聚丙烯酰胺凝膠電泳 PAGE和 SDSPAGE ? 聚丙烯酰胺凝膠電泳： Acr+Bis； TEMED， %；過硫酸胺 ,%； ? 等電聚焦 (isoelectric focusing)：兩性電解質(zhì)在電場作用下建立一個 pH梯度分
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