【正文】 紅細胞自凝：冷凝集素增高是最為常見的原因。 14 參考文獻 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ09 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒定 （微柱凝膠法 DiMed） 生效日期： 20210211 第 32 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 33 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 血型鑒定（微柱法 ORTho） ：為了進一步提高 ABO和 RH血型鑒定的檢測水平，以最大程度保障臨床輸血的安全性。紅細胞中缺少 A 和 /或 B 血型抗原的正常成人個體，通常在其血清中含有相應(yīng)的抗體。因此，在進行輸血和抗 D免疫球蛋白治療中選擇血液時，通常會抗慮 D抗原測定 使用這些試劑的操作步驟基于柱凝集原理。 5 標本 ：新抽取的抗凝血 ： 抗凝劑： EDTA（濃度 15g/L）或枸櫞酸鈉（濃度 32g/L）抗凝 采血量：至少不低于 3ml的靜脈血（加入試管后注意 與 抗凝劑混勻） 離心要求：轉(zhuǎn)速必須大于 3500轉(zhuǎn) /分，時間必須大于 15分鐘 標本采集要求 采血時，一定要認真核對病室、床號和病人姓名，無誤后再抽血。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 34 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 采血時要防止溶血及多量組織液混入 （多發(fā)生在靜脈穿刺不順利勉強抽血時）在病人輸液時采集標本，必須從未輸液的一側(cè)肢體抽取，絕不允許在輸液管接頭處采集。 6. 試劑 試劑名稱： ORTho BioVue血型診斷試劑 卡、 （ 3 %） 試劑生產(chǎn)廠家： ORThoClinical Diagnostics,Inc。 9. 結(jié)果判斷模式 陽性結(jié)果（ +）：紅細胞凝集為陽性結(jié)果，表明紅細胞存在相應(yīng)的抗原。用戶需要進一步檢查以確定質(zhì)控反應(yīng)性的血清學基礎(chǔ)。 3+反應(yīng) 發(fā)生凝集的大部分紅細胞停留在玻璃珠的上半部分。柱的底部也可看到一些紅細胞 +反應(yīng) 大部分凝集的紅細胞穿過玻璃珠的縫隙，在微柱的底部形成一個粗糙（而非平整）到紅細胞聚集帶。 可節(jié)省樣品紅細胞和血漿； 靈敏度高、特異性高、重復(fù)度好； 客觀性好， 避免主觀判讀結(jié)果的影響； ； 操作者更少接觸血液標本。 13 方法局限性： 變質(zhì)的或受到細菌等物污染的樣品，試劑可能會帶來錯誤的陰或陽性結(jié)果； 因為儲運不當?shù)脑?，有時會發(fā)現(xiàn)在微管的頂部存有小水珠或在膠泡，在使用類似的玻珠 卡前先離心，消除這類問題，如果無法消除，請棄之不用； 如果發(fā)現(xiàn)有管內(nèi) 夜體 量不足或干裂，請不要 使用 ； 如果所用的紅血球的懸液濃度與建議使用的濃度不符，可能會引起錯誤結(jié)果； 使用非原廠的稀釋液來配制紅血球懸液可能會導致不良結(jié)果； 質(zhì)控結(jié)果必須 是 陰性，如果是陽性，檢測無效，用生理鹽水清洗紅細胞并重新配制懸液重新檢測，如果得到陰性質(zhì)控結(jié)果，則可以判讀結(jié)果； 為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，實驗在室溫 25℃ 中進行。 血標本容器要清潔干燥并事先貼好標簽，加血標本前要認真核對、無誤后再將血液注入。 ，應(yīng)事先采取血標本作血型鑒定，填寫在輸血申請單上，以便核對。 。 標本儲存 待測標本在 28℃ 下的保存時間為 72小時 ，已檢測標本 28℃ 冰箱保存 7天。 采血者要在申請單和標本標簽上簽名，寫清采血時間，及時送檢。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ11 版本 /修訂號 ： A/0 主題內(nèi)容 疑難配血操作程序 生效日期： 20210808 第 37 頁 共 2 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 疑難配血操作程序 ： 規(guī)范疑難配血操作流程 ,保證配血安全 . ： 適合血庫所有工作人員及值班人員 . ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。用 3740℃ 生理 鹽水洗滌紅細胞可去除紅細胞表面附著的導致紅細胞凝集的冷凝集素，可獲得可靠的正定型。 10. 臨床意義 ： ABO、 Rh血型鑒定不合出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)。柱的地步也可看到少量紅細胞。部分溶血時，有可能出現(xiàn)（或不出現(xiàn)）凝集。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK –CZ10 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒 定 （微柱 法 ORTho） 生效日期： 20210211 第 35 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 陰性結(jié)果（ ）：紅細胞未凝集或無 溶血為陰性結(jié)果，表明紅細胞表明不存在相應(yīng)抗原。 (一卡 1人 ) 用 10ul加樣槍在第 6管中分別加 10ulA1,B標準反定細胞； 用 40ul加樣槍，分別吸40ul病人血清加入第 6管。 . 標本運輸 室溫保存 . 標本拒收標準 溶血 、 受污染，或者含有凝塊的樣品。 血標本標簽填寫必須與申請單上的病人姓名、科別、床號、編號完全一致。 ORTho BioVue血型診斷系統(tǒng)采用柱凝集技術(shù)，柱內(nèi)有玻璃珠和試劑。 D抗原能夠在缺乏 D抗原的人體內(nèi)刺激產(chǎn)生抗 D抗體。 ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 正反定型結(jié)果不一致原因 自身免疫性溶血性貧血引起的紅細胞被自身抗體包被； 紅細胞 A或 B抗原的弱化； 紅細胞懸液濃度過濃或過淡； 紅細胞抗原位點過少或抗原性減弱； 病人感染細菌或病毒后，細菌或病毒產(chǎn)生的酶使紅細胞上掩蔽的 T抗原暴露激活，由于正常人血漿中 都含有抗 T抗體，因此可于正常人血漿中產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型實驗假陽性； 嚴重感染的病人，其血漿中白細胞過多，堵塞凝膠篩間隙，影響紅細胞的沉降，引起假陽性。 11. 操作性能 凝膠微柱法 為國際安全輸血檢查的推薦方法； 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ09 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 血型鑒定 （微柱凝膠法 DiMed） 生效日期： 20210211 第 31 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 操作簡 單方便。 記錄。準備樣本，標記達亞美血型卡。 . 標本儲存 待測標本在 28℃ 下的保存時間為 72 小時 ，已檢測標本 28℃ 冰箱保存 7天。 血標本容器要清潔干燥并事先貼好標簽，加血標本前要認真核 對、無誤后再將血液注入。 Rh 血型系統(tǒng)有 5 種抗血清，即抗 C 、抗 C 、抗 D 、抗 E 、抗 e，可以檢出 18 種不同的型別，但由于臨床實驗室很難得到這 5 種抗血清，況且在 Rh抗原中，抗原性最強，出現(xiàn)頻率最高，臨床上影響最大的是 D 抗原，所以臨床上一般只作 D 抗原的鑒定，受檢者紅細胞能與抗 D 血清凝集者為 Rh 陽性，不凝集者為陰性。 ：適用于目前輸血科所有血型檢測標本。 SOP常規(guī)操作 ：陽性質(zhì)控出現(xiàn)相應(yīng)的強度的凝集，陰性質(zhì)控不出現(xiàn)凝集，否則為失控。 結(jié)果分析： IgM 類抗體質(zhì)控反應(yīng)結(jié)果與預(yù)期一致， IgG 組陽性質(zhì)控主側(cè)凝集，次側(cè)不凝。 ：每次檢測出血型結(jié)果必須是一致并與質(zhì)控品原來血型一致，凝集強度正鑒定無誤差，否則為失控。 、 RhD血型鑒定質(zhì)控 質(zhì)控品來源：本實驗室 內(nèi)檢測出的 A型 Rh陰性 EDTA抗凝血全血標本及 B 型 Rh陽性 EDTA抗凝血全血標本。詳細操作見凝聚胺法交叉配血 SOP。 IgM類抗體質(zhì)控品 :3個 ABO血型互不相同的 EDTA抗凝血全血標本，其中一個作為受者，另外 2個作為供者。 ：每新一批次，同批次新開瓶時檢測效價；每日開始試驗時按常規(guī)操作檢測陰陽質(zhì)控。 ：特異性：抗 A只能和 A細胞發(fā)生凝集，抗 B只能凝集 B細胞，凝集強度4+。 4 具體程序 ：抗 A抗 B 血清試劑要進行抗體效價、特異性、親和 力的測定， ABO 紅細胞懸液要進行特異性檢測。如果可能，可以增大稀釋稀釋容量。 1份血清重復(fù)測定，結(jié)果可能不一樣，如果只有一個稀釋度的差別，是正常誤差范圍。 15分鐘。同樣操作，再配制以上濃度 10支小試管，已作對照操作。 將被檢抗血清用生理鹽水作倍比稀釋后，加入一定量的抗原紅細胞，觀察凝聚強度。 13. 參考文獻 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 23 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二 人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ07 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗血清效價測定 生效日期： 20210211 第 24 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗血清效價測定 抗體效價測定是一種半定量檢測抗體濃度的方法。 纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應(yīng)將血樣充分離心。即使自動化判讀機也很難將微弱的血細胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。也就是說在 1萬例交叉配血試驗中，如果沒有抗體篩選 /鑒定檢測，可能會有一例漏檢。準備樣本，標記達亞美卡。急診搶救輸血，未能事先采血檢測血型，則要求注明急診字樣由專人核對、貼標簽、采取血標本送檢。 、科別、床號、編號完全一致。 微柱凝膠檢測法是凝膠分子篩技術(shù)和免疫學抗原抗體反應(yīng)相結(jié)合的產(chǎn)物，通過調(diào)節(jié)凝膠（葡聚糖）的濃度，控制凝膠間隙大小，只允許游離紅細胞通過，從而達到分離游離紅細胞和凝集紅細胞的目的。 12 參考文獻 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第三版） 黃德明 《現(xiàn)代醫(yī)學檢驗新技術(shù)與操作規(guī)程全書》 DiaMed 血型配血微量定 型系統(tǒng)（ DiaMedID Micro Typing System）操作技術(shù)手冊 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXKCZ06 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 抗體篩查試驗 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 20 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 抗體篩查試驗（微柱凝膠法） ： 發(fā)現(xiàn)有臨床意義的不規(guī)則抗體 ,避免因 ABO 以外的血型不合引起的輸血反應(yīng) ,以 保證患者用血安全 ： 輸血前檢查 產(chǎn)前檢查 新生兒溶血癥（ HDN） ：輸血科主任負責對該標準化操作規(guī)程監(jiān)督執(zhí)行。 成都市第二人民醫(yī)院檢驗科 血庫 SOP 文件編號： CDEYLABXK CZ05 版本 /修訂號 ： B/0 主題內(nèi)容 交叉配血 （微柱凝膠法） 生效日期： 20210211 第 19 頁 共 48 頁 Laboratory of Chengdu People’s Hospital 纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應(yīng)將血樣充分離心。即使自動化判讀機也很難將微弱的血細胞凝集與陰性反應(yīng)區(qū)別開來。 9. 結(jié)果判斷模式 如果紅細胞沉積在凝膠管底部，表明紅細胞未發(fā)生凝集，即凝集實驗陰性 ，供受者血液相合； 如果紅細胞聚集在凝膠上部或中部，表明紅細胞發(fā)生凝集， 即 凝集實驗陽性 ，供受者血液不相合 。 6 試劑 試劑名稱： DiaMed低離子 /抗人球蛋白 卡 試劑生產(chǎn)廠家： DiaMed（ 瑞士達亞美 ） 試劑說明 ： 每張 DiaMed凝膠卡由 6個微孔管組成 ： 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