【正文】 助研究成果，在 XXXX 化學(xué)合成及功能研究、低劑量 XXX抗肝纖維化作用和機(jī)制的前期 工作基礎(chǔ)上 ，提出的 多途徑、 互補(bǔ)協(xié)同與靶向 治療肝纖維化的新探索。 (2)分組及處理 XXXXXXXXXXXXXX。 第五部分 XXXXXXXXXXXX (1) XXXXXXXX 在肝纖維化 大鼠體內(nèi)的器官分布 XXXXXXXXXX。新鮮分離的 HSC，體外培養(yǎng) 48 h 后，作為靜止期HSC 用于下游實(shí)驗(yàn)，或培養(yǎng) 1 w 后消化傳代，繼續(xù)培養(yǎng) 24 h 后，作為活化的 HSC用于下游實(shí)驗(yàn)。 (3) 競爭抑制 XXXXXXXXXX。 第三部分 XXXXX 修飾 長循環(huán) 脂質(zhì)體與 HSC 體 外結(jié)合活性 采用兩步膠原酶灌注和密度梯度離心法分離大鼠 HSC，選擇靜止態(tài)和激活態(tài)的 HSC，接種于 6孔板上 (細(xì)胞密度為 105/mL)。 具體方法如下： XXXXXXXXXX。 XXXXXXXXXXXX。應(yīng)用 XXXXXXXXXX。 擬解決的關(guān)鍵問題： 高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定 XXXXXXXX 制備。 XXXXXXXX 對 膽總管結(jié)扎和 CCl4大鼠肝纖維化防治作用。 不同類型脂質(zhì)體的制備、技術(shù)參數(shù)優(yōu)化、物理性質(zhì)鑒定和脂質(zhì)體藥物包封率、載藥量、配體結(jié)合率鑒定與提高。29(11 Suppl):121S131S. 4 Dooley S, Hamzavi J, Breitkopf K, et al. Smad7 prevents activation of hepatic stellate cells and liver fibrosis in rats. Gastroenterology 2021。 XXXXXXXXXX 可以設(shè)想， 如能取得預(yù)期效果， 經(jīng)過良好設(shè)計的基礎(chǔ)研究后，這一 XXXXXX 應(yīng)用于臨床 的時間不會太久， 前景廣闊。 迄今為止，尚未見到 XXXXXXXXXXX。結(jié)合我們對 Tet 藥理作用的分 子機(jī)制的研究結(jié)果，不難發(fā)現(xiàn)， XXXXXXXX。 RGD在抑制 TGFβ 激活同時，還可阻止 HSC 與 ECM 結(jié)合，阻斷整合素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。③XXXXXXXXX。 Smad 7 是 HSC TGFβ 信號通路的 最 主要負(fù)反饋調(diào)節(jié)信號分子 ， 上調(diào) Smad 7 是 抑制 TGFβ 對 HSC 不良生物效應(yīng)的有措施之一 [4]。部分最新研究成果已經(jīng)整理成文發(fā)表在本領(lǐng)域有一定影響力的 SCI 索引源 期刊上 ，并被 SCI 收錄 (收錄號 IDS Number: 963XN )[2]（ 相關(guān)文章參 詳見 申請人 簡歷及附件 二、三 ）。然而，由于 Tet 的劑量安全范圍較小，以往研究發(fā)現(xiàn)的抗肝纖維化有效劑量與中毒劑量比較接近， 故 成為限制其臨床應(yīng)用的重要因素。目前國內(nèi)外絕大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，肝星狀細(xì)胞（ hepatic stellate cell， HSC）激活是肝纖維化的關(guān)鍵，抑制 HSC的激活對肝纖維化的防治有重要 價值 [1]。： 院科教部從我院申報國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目中挑選了一份嚴(yán)格按照 報告正文撰寫提綱要求撰寫，并在撰寫的整體布局、寫作方法上比較適宜的申請書作為樣板申請書，提供給其他申請人在撰寫申請書時參考。 粉防己堿 （ tetrandrine，又名漢防己甲素）是中藥粉防己（ Stephania tetrandra S Moore）的主要有效生物堿成分，具有廣泛的藥理作用。近年國內(nèi) Tet 抗肝纖維化研究也由此逐漸走向低谷。這些全新研究成果進(jìn)一步增強(qiáng)了我們開發(fā)這一傳統(tǒng)中藥的信心。在肝纖維化過程中， TGFβ 信號通路 還 與整合素信號通路存在密切聯(lián)系。 綜上所述， XXXXXXX， 如能 XXXXXX， 可 進(jìn)一步實(shí)現(xiàn) XXXXX 治療。研究還發(fā)現(xiàn) ， M6P 能提高 RGD 作用于 HSC 的靶向性，增加其局部濃度，使RGDM6P 顯示出 較 RGD 更強(qiáng)的抑制作用 [14]。基于以上 系列研究基礎(chǔ) 與設(shè)想 ，緊跟國內(nèi)外 在 制劑學(xué)方面的進(jìn)展，我們擬設(shè)計XXXXXXXXXXX。 結(jié)合國內(nèi)外同行的研究報道與我們的研究基礎(chǔ)，不難推斷，XXXXXXXXXXXXXXXXX。 參考文獻(xiàn) 1 Friedman SL. Mechanisms of disease: Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2021。125(1):17891. 5 Ludbrook SB, Barry ST, Delves CJ, et al. The integrin alphavbeta3 is a receptor for the latencyassociated peptides of transforming growth factors beta1 and beta3. Biochem J 2021。 大鼠 HSC 分離培養(yǎng)， XXXXXXX 修飾脂質(zhì)體 與肝星狀細(xì)胞體外結(jié)合活性研究。 研究目標(biāo)： 研究構(gòu) 建 XXXXXXXX， 為抗肝纖維化藥物新劑型開發(fā)提供新型靶向載體。 放射性計數(shù)法測定 XXXXXX 與 HSC 結(jié)合活性，有效抑制 HSC 活化的劑量、時間參數(shù)等。合成反應(yīng)圖示如下。 合成反應(yīng)圖示如下。 (2) 性質(zhì)鑒定 XXXXXXXXXXXXXXXX。待貼壁后， 1%胎牛血清 DMEM培養(yǎng)過夜，細(xì)胞同步化。 (4) 細(xì)胞熒光定位、配體表面結(jié)合率與內(nèi)吞率測定 XXXXXXXXXX。 (1) XXXXXXX 對 HSC 活化狀態(tài)影響 XXXXXXXXX。 (2) XXXXXXX 大鼠體內(nèi) 藥代動力學(xué) 采用 XXXXXXXX。 (3)治療效果檢測 主要比較以下指標(biāo)： XXXXXXXXXXXXXXX。掌握 了 國內(nèi) 外 在 受體調(diào)節(jié)藥物靶向 、 低毒性高效中藥新劑型開發(fā) 和 以HSC的靶標(biāo)的肝纖維化靶向治療 中的最新研究動態(tài)， 借鑒“雙靶向”干預(yù)的最新 研究成果，并與自身實(shí)踐相結(jié)合 ，在理論上、實(shí)踐上均有可靠基礎(chǔ)。 人員配備合理，具有扎實(shí)的相關(guān)工作基礎(chǔ)和完善的實(shí)驗(yàn)設(shè)備及技術(shù)支持 。新華醫(yī)院消化內(nèi)科系 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（原 上海第二醫(yī)科大學(xué) ）國家級重點(diǎn)學(xué)科 和“ 211”工程重點(diǎn)建設(shè)學(xué)科的 組成單位之一，長期從事肝纖維化防治研究，先后承擔(dān)包括國家自然科學(xué)基金在內(nèi)的各級各類科研項(xiàng)目 20余項(xiàng)。將新型配體人工化學(xué)合成、受體調(diào)節(jié)藥物靶向技術(shù)與新型脂質(zhì)體載藥技術(shù)三者結(jié)合應(yīng)用于肝纖維化防治， 有很強(qiáng)的原始創(chuàng)新性 。 體外研究證實(shí) XXXXXXXX。 自 1981 年以來，我們 研究室 長期從事肝纖維化防治研究，先后對鈣拮抗劑、鈣調(diào)蛋白拮抗劑、大黃素、激活素、腎素 血管緊張素系統(tǒng)及卵泡抑素等在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用進(jìn)行了 系列 的研究，積累 了較 豐富 的 理論 ，掌握了相關(guān)研究技術(shù)。近兩年，我們在上海市教委基金項(xiàng)目“ 粉防己堿影響肝星狀細(xì)胞活化信號分子研究（編號 02BK14） ”資助下完成了小劑量粉防己堿抗肝纖維化效果與機(jī)制的研究，在國內(nèi)外首次報道小劑量粉防己堿可通過影響 TGFβ Smads信號通路抑制 HSC 活化，相關(guān)研究論文被 SCI 收錄 (收錄號 IDS Number: 963XN)。 細(xì)胞及動物學(xué)實(shí)驗(yàn)均證實(shí)pCIRGDSmad7 和 RGDM6P 可減輕 ECM 沉積，并影響 TGFβ1和整合素表達(dá)強(qiáng)度和分布 。由于以上的工作基礎(chǔ)，我們擁有豐富的生物分子合成經(jīng)驗(yàn)，成熟的生物分子構(gòu)建技術(shù)和良好的人員與設(shè)備支持。實(shí)驗(yàn)室擁有本項(xiàng)目研究相關(guān)的 大部分 生化、細(xì)胞生物學(xué) 及 分子生物學(xué)等方面的各種儀器設(shè)備，如倒置顯微鏡攝影設(shè)備、 γ計數(shù)儀、 CO2培養(yǎng)箱、酶聯(lián)免疫測定儀、電轉(zhuǎn)膜儀、 低溫冰箱、低溫超速離心機(jī)及 其它 分子生物學(xué)設(shè)備 等。主任醫(yī)師、 研究員、 教授 和 博士生導(dǎo)師 。 本項(xiàng)目負(fù)責(zé)人長期從事 肝纖維化防治研究 ，在抗肝纖維化中藥篩選與機(jī)制研究、生物小分子合成、脂質(zhì)體藥物傳遞和基因轉(zhuǎn)染、基因重組及基因治療等方面有豐富研究經(jīng)驗(yàn)。近五年 發(fā)表的與本課題相關(guān)論文 （第一作者或通訊作者），其中一篇與本課題設(shè)計密切相關(guān)的重要論著 2021 年發(fā)表于 SCI 索引源期刊“ Journal of Ethnopharmacology”并被 SCI 收錄（收錄號 IDS Number: 963XN）（見附件二、三） ： 1 李定國 , 陳穎偉。粉防己堿對大鼠肝星狀細(xì)胞跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。中國藥理學(xué)通報 2021； 21(5):5637。 （論著） 7 王志榮 , 李定國 , 陳錫美 , 魏紅山 , 黃新 , 展玉濤 , 徐芹芳 , 陸漢明。 RGDM6P 對原代肝星狀細(xì)胞的影響。放射免疫學(xué)雜志 2021； 17(6):4335。 （論著） 11 陳源文 , 吳建新 , 李定國 , 陸漢明。 RGDS 肽對 TGFβ 刺激肝星狀細(xì)胞分泌細(xì)胞外基質(zhì)的影響。上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報 2021；21(3):2102。 （論著）