【正文】 XXXXXX 體內(nèi) HSC 靶向性、抗肝纖維化效果比較與評價。應用 XXXXXXXXXX。高效液相（ HPLC）、質(zhì)譜等方法鑒定合成產(chǎn)物純度及分子量。 XXXXXXXXXXXX。高效液相（ HPLC）和質(zhì)譜分析法進物產(chǎn)物純化與鑒定。 具體方法如下： XXXXXXXXXX。 (3) 均勻設計優(yōu)化處方 根據(jù)實驗結果及文獻，確定影響包封率的主要因素。 第三部分 XXXXX 修飾 長循環(huán) 脂質(zhì)體與 HSC 體 外結合活性 采用兩步膠原酶灌注和密度梯度離心法分離大鼠 HSC，選擇靜止態(tài)和激活態(tài)的 HSC，接種于 6孔板上 (細胞密度為 105/mL)。 (1)配體結合的濃度 效應關系 XXXXXXXXXXX。 (3) 競爭抑制 XXXXXXXXXX。 (5) 平衡解離常數(shù) (Kd )和細胞最大結合位點數(shù) (Bmax) XXXXXXXXXXX。新鮮分離的 HSC，體外培養(yǎng) 48 h 后，作為靜止期HSC 用于下游實驗，或培養(yǎng) 1 w 后消化傳代，繼續(xù)培養(yǎng) 24 h 后，作為活化的 HSC用于下游實驗。 (2)XXXXXX 對 TGFβ1效應影響 XXXXXXXXXXXX。 第五部分 XXXXXXXXXXXX (1) XXXXXXXX 在肝纖維化 大鼠體內(nèi)的器官分布 XXXXXXXXXX。 (3)XXXXXXX 在肝纖維化大鼠肝臟內(nèi)分布 采用 XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX。 (2)分組及處理 XXXXXXXXXXXXXX。 技術路線圖（略）。本研究是參閱大量文獻并結合 自身以往深厚的 肝纖維化防治 研究基礎 ，特別 是結合 近四 年國家自然科學基金資助研究成果，在 XXXX 化學合成及功能研究、低劑量 XXX抗肝纖維化作用和機制的前期 工作基礎上 ，提出的 多途徑、 互補協(xié)同與靶向 治療肝纖維化的新探索。 相關實驗技術成熟，實驗結果可信 。本課題組 由 掌握以上技術的成員 組成 ，相關技術已應用于科研工作。 申請人長期從事 肝纖維化防治研究 ， 先后承擔包括國家自然基金在內(nèi)的各類科研項目 15項，指導或協(xié)助指導博士后、博士生及碩士生 70余名。 實驗 設計 指導者、熟練技術人員及輔助人員等各司其職， 可 保障 研究 有條不紊的進行。2021年 7月，原上海第二醫(yī)科大學與原上海交通大學合并，組建新的上海交通大學。 4 本項目 的特色與創(chuàng)新之處 本課題 首次嘗試利用 XXXXXXX 構建 HSC 特異性受體調(diào)節(jié)藥物靶向載體。 本課題 首次研究 XXXXX生物小分子通過 XXXXX與中藥粉防己堿相聯(lián)合，多途徑、互補與協(xié)同防治肝纖維化。 5 年度研究計劃及預期研究結果 年度研究計劃： 略 預期研究成果 獲得快速、有效和大量合成 XXXXXXX 和 高藥物包封率、高配體修飾率的穩(wěn)定 XXXXXXXX 的技參數(shù)，并合成足量研究相關產(chǎn)物。 在體內(nèi) XXXXXXXXX，有效 降低有效劑量、提高療效和 降低副作用 。 （二）研究基礎與工作條件 1 研究 基礎 既往肝纖維化防治理論和技術。承擔了包括國家自然科學基金在內(nèi)的各類科研項目 20 多項，先后獲省部級以上科技進步獎 10 項。 項目負責人率先在我國 開展鈣拮抗劑尤其是中藥 粉防己堿 對肝纖維化防治研究， 取 得豐富的粉防己堿抗肝纖維化基礎和臨床研究成果，在國內(nèi)外期刊發(fā)表相關論文 50 余篇，獲省部級以上科技進步獎 5 項。該研究為指導粉防己堿在肝纖維化防治中應用有重要價值。 近四年 來，申請人承擔 并完成了國家自然科學基金項目 “RGD 修飾細胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究（編號 30170412） ”， 化學合成了 RGDM6P， 分子克隆構建pCIRGDSmad7 并成功通過脂質(zhì)體進行基因轉染， 通過體內(nèi)外實驗觀察 了RGDM6P 和 pCIRGDSmad7 的生物學效應 。主要研究工作由本項目組成員參與并完成。 得益于此，他（她）們分別熟練掌握了 生物小分子的化學合成相關技術（多肽合成、 固相化反應、納米 技術、高效分離技術 等）、 免疫組織與細胞化學技術、 RTPCR 和定量 PCR、蛋白印跡 、高效液相分析、質(zhì)譜分析、肝纖維化動物模型 及生物信息學方法等與 本課題相關的關鍵技術與方法 （相關論文參見申請人簡歷）。已經(jīng)構建成功的 RGDM6P 及相關技術要領，可直接用于本課題。 2 工作條件 新華醫(yī)院消化內(nèi)科設有校 屬的 上海 交通大學醫(yī)學院 消化系疾病第三研究室。 上海 交通大學醫(yī)學院（原上海第二醫(yī)科大學）附屬 新華醫(yī)院 科研 中心與設立在新華醫(yī)院的 “211”工程重點建設單位上海市兒科醫(yī)學研究所為本項目開展提供了儀器、 技術支持和 信息服務平臺。 3 申請人簡歷 李定國，男， 1946 年 9 月出生。1981 年和 1989 年分別獲 原 上海第二醫(yī)科大學醫(yī)學碩士和醫(yī)學博士學位。兼任 上海市內(nèi)科學會委員 和 上海市消化病學會委員 等職 。 率先 在我國 開展鈣拮抗劑尤其是中藥 粉防己堿 對肝纖維化防治研究， 取得豐富的粉防己堿抗肝纖維化基礎 和臨床研究成果，在國內(nèi)外期刊發(fā)表相關論文 50 余篇。 近四年主持了國家自然科學基金 項目 “RGD 修飾細胞生物信息調(diào)控分子和綴合基因的功能研究 (編號 30170412） ”和 “人 卵泡抑素防治肝纖維化的實驗研究 (編號 30170411)”的 肝纖維化防治 研究工作 （以上 2項目均已經(jīng)順利結題），指導完成 上海市自然科學基金 項目“ Smad7 和 uPA雙基因共表達對實驗性肝纖維化的影響 (編號 03ZR14050)” 和上海市教委基金項目“粉防己堿影響肝星狀細胞活化信號分子研究（編號 02BK14）” 。肝纖維化研究現(xiàn)狀及展望。 （述評） 2 Chen YW, Li DG, Wu JX, Chen YW, Lu HM. Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factorbeta in vitro via upregulation of Smad 7. J Ethnopharmacol 2021； 100(3):299305.（論著SCI 收錄號 IDS Number: 963XN） 3 Chen YW, Wu JX, Chen YW, Li DG, Lu HM. Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells in vitro via transforming growth factorbeta signaling. World J Gastroenterol 2021； 11(19):29226. （論著） 4 陳源文 , 李定國 , 吳建新 , 陳穎偉 , 陸漢明。中華肝臟病雜志 2021； 13(8):60910。粉防己堿上調(diào) Smad7 表達抑制大鼠肝星狀細胞活化。 （論著） 6 王志榮 , 陳錫美 , 李定國 , 魏紅山 , 黃新 , 展玉濤 , 汪余勤 , 陸漢明。上海醫(yī)學 2021；26(5):3326。聯(lián)合應用粉防己堿與甘草酸抗肝 纖維化的實驗研究。 （論著） 8 王連升 , 陳穎偉 , 張建華 , 李定國 , 陸漢明。上海第二醫(yī)科大學學報 2021； 25(2):1125。 人 工合成 RGD 小肽對肝星狀細胞付泌細胞外基質(zhì)的影響。 （論著） 10 程計林 , 周欣 , 高志剛 , 霍玉青 , 徐芹芳 , 李定國。中華醫(yī)學雜志 2021；82(2):1113。轉化生長因子 β 與轉基因治療肝纖維化。 （綜述） 12 程計林 , 周欣 , 李定國 , 魏紅山 , 黃新 , 王志榮 , 展玉濤 , 張晶 , 徐芹芳 , 陸漢明。臨床肝膽病雜志 2021； 17(3):1735。精 甘 天冬 絲氨酸肽對肝纖維化鼠血清 Ⅲ 型膠原水平的影響。 （論著） 15 陳穎偉 , 李定國。上海第二醫(yī)科大學學報 2021； 25(2):1323。 Smad7 基因過表達對 L02 肝細胞株增殖的影響。 （論著） 17 陳穎偉 , 陳源文 , 尤漢寧 , 李定國。中華消化雜志 2021； 25(7):40912。 血管緊張素Ⅱ 對肝星狀細胞表達轉化生長因子 βⅠ 、 Ⅱ 型受體及其功能的影響。 （論著） 19 Zhou X, Li D, Li X, Lu H, Zhang W. A bination of Ang II and carbon tetrachloride accelerates process of hepatic fibrosis. Chin Med J 2021；116(1):625.（論著） 20 陳穎偉 , 衛(wèi)新革 , 展玉濤 , 張文竹 , 徐芹芳 , 李定國。中華消化雜志 2021； 23(8):47