20xx年醫(yī)學專題—免疫細胞的分離與檢測-wenkub
2024-11-04 23 本頁面
【正文】 (c237。,第九頁，共七十五頁。 T細胞得率為2030%左右。nf249。u)，單核細胞和粒細胞均貼于平皿壁上，而未貼壁的非粘附細胞幾乎為純淋巴細胞，繼用橡皮刮下貼壁的細胞即為純單核細胞群。)抗凝血,淋巴細胞分離液,血漿,單個核細胞,粒細胞,紅細胞,第七頁，共七十五頁。,第六頁，共七十五頁。ng)大，離心后沉于管底；淋巴細胞和單核細胞的比重(bǐzh242。bāo)的分離技術(shù),密度梯度離心法 黏附分離法 熒光(y237。,NK cells,吞噬(tūnsh236。bāo)的特征,免疫細胞的形態(tài)學特征 理化性狀 生物學特性(t232。x236。)溶酶體,第三頁，共七十五頁。ngguāng)激活分離法 磁性分離法 其他分離法,第五頁，共七十五頁。ng)小于或等于分層液比重(bǐzh242。,離心(l237。,黏附(ni225。因B細胞也有貼壁現(xiàn)象，用本法分離的淋巴細胞群中B細胞有所損失。)分離法：淋巴細胞亞群的分離,尼龍毛法：混合(h249。 親和板法：利用親和層析法分離淋巴細胞亞群，其原理是各種淋巴細胞亞群具有不同的抗原性，將相應抗體結(jié)合于塑料平板上，繼加細胞懸液，凡抗原陽性的細胞則與相應抗體結(jié)合，抗原陰性的細胞可從未吸附的細胞懸液中獲取。,熒光(y237。x236。MACS微珠是與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒。用緩沖液沖洗分選柱，所有未標記的細胞被沖洗掉。ngx236。,第十五頁，共七十五頁。bāo)分層液分離細胞(x236。 作為臨床診斷工具，定量檢測外周血及組織中抗原特異性CTLs的比率，并進行表型及功能分析。n)肽MHC分子四聚體技術(shù),第十八頁，共七十五頁。向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。n)在130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。,細胞(x236。)的原理與類型,以抗體識別(sh237。)細胞膜分子的主要檢測方法,免疫標記檢測(jiǎn c232。,SmIg的酶免疫檢測法,,第二十六頁，共七十五頁。n)：利用T細胞膜上的異種動物紅細胞受體,T細胞(x236。,EA花環(huán)：B淋巴細胞表面有Fc受體，能與免疫球蛋白的Fc段結(jié)合(ji233。,第三十一頁，共七十五頁。,淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗：刺激物分為非特異性（如植物血凝素、刀豆素A等）和特異性刺激因子（如抗原）；檢測方法為形態(tài)學檢測法和3HTdR摻入法及MTT法等。,一、轉(zhuǎn)化(zhuǎnhu224。d236。)試驗原理示意,小淋巴細胞在轉(zhuǎn)化為原始母細胞過程中，合成DNA增加，能夠吸收胸腺嘧啶核苷（3H）,第三十五頁，共七十五頁。)試驗,第三節(jié) 免疫細胞(x236。ng),細胞毒試驗(sh236。ng)細胞,分離上清,第三十七頁，共七十五頁。)免疫也有直接的關(guān)系。,（1）原理(yu225。n)K細胞活性的高低。 抗體對照管：標記的靶細胞和亞凝集單位的抗體各0.1ml，加完全培養(yǎng)基1.8ml（未加效應細胞）。ng)各管均置37℃5～20h后，2500g離心10min ，分別取各管上清夜1.0ml置于5支試管中，用γ計數(shù)儀測各管上清和沉淀中的cpm值。n)和計算,51Cr實驗釋放(sh236。bāo)活性測定,NK細胞是具有天然殺傷靶細胞活性的淋巴樣細胞，其殺傷作用(zu242。 NK細胞活性測定多采用51Cr釋放法試驗，其原理同細胞毒性T細胞試驗中所采用的51Cr釋放法試驗。,（1）試劑 小鼠脾細胞懸液:分離單個脾臟細胞裂解(li232。,（2）方法 試驗組孔：脾細胞懸液(淋巴細胞) ：標記的靶細胞懸液100:1左右； 對照組：單純加標記的靶細胞。 待濾膜干燥后用γ液閃計數(shù)儀測定cpm值。n) 間接溶血空斑試驗 SPASRBC溶血空斑試驗,三、抗體(k224。,間接溶血(r243。nɡ xu232。,第五十頁，共七十五頁。 sh249。n)試驗,原理(yu225。n)試驗,方法(fāngfǎ)：,抗凝血 + 硝基藍四氮唑（NBT），37。,正常值：,NBT陽性細胞 7.515%,第五十三頁，共七十五頁。,一、細胞凋亡(diāo w225。bāo)凋亡（apoptosis）,細胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下
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