20xx年醫(yī)學(xué)專題—免疫細(xì)胞的分離與檢測(已修改)
2024-11-04 23:07 本頁面
【正文】 一、免疫細(xì)胞(x236。bāo)的特征,免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征 理化性狀 生物學(xué)特性(t232。x236。ng) 免疫細(xì)胞的膜分子特征 CD分子,第一頁，共七十五頁。,第二頁，共七十五頁。,NK cells,吞噬(tūnsh236。)溶酶體,第三頁，共七十五頁。,第四頁，共七十五頁。,二、免疫細(xì)胞(x236。bāo)的分離技術(shù),密度梯度離心法 黏附分離法 熒光(y237。ngguāng)激活分離法 磁性分離法 其他分離法,第五頁，共七十五頁。,密度梯度離心法,聚蔗糖(Ficoll)泛影葡胺(Urografin)(F/H)分層液 Ficoll是蔗糖的多聚體，呈中性，親水性高，平均分子量為400,000，當(dāng)密度為1.2g/ml仍未超出正常生理性滲透壓，也不穿過生物膜。 紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重(bǐzh242。ng)大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重(bǐzh242。ng)小于或等于分層液比重(bǐzh242。ng)，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個核細(xì)胞。,第六頁，共七十五頁。,離心(l237。xīn)前,離心(l237。xīn)后,稀釋(xīsh236。)抗凝血,淋巴細(xì)胞分離液,血漿,單個核細(xì)胞,粒細(xì)胞,紅細(xì)胞,第七頁，共七十五頁。,黏附(ni225。nf249。)分離法純淋巴細(xì)胞群的分離,貼壁法：將已制備的單個核細(xì)胞懸液傾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃溫箱靜置1h左右(zuǒy242。u)，單核細(xì)胞和粒細(xì)胞均貼于平皿壁上，而未貼壁的非粘附細(xì)胞幾乎為純淋巴細(xì)胞，繼用橡皮刮下貼壁的細(xì)胞即為純單核細(xì)胞群。因B細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象，用本法分離的淋巴細(xì)胞群中B細(xì)胞有所損失。,第八頁，共七十五頁。,黏附(ni225。nf249。)分離法：淋巴細(xì)胞亞群的分離,尼龍毛法：混合(h249。nh233。)單個核細(xì)胞懸液在通過尼龍毛柱時，B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞和一些輔助細(xì)胞被選擇性粘附于尼龍毛上，而多數(shù)T細(xì)胞則通過尼龍毛柱，這是獲得富含T細(xì)胞群的有效方法。 T細(xì)胞得率為2030%左右。 親和板法：利用親和層析法分離淋巴細(xì)胞亞群，其原理是各種淋巴細(xì)胞亞群具有不同的抗原性，將相應(yīng)抗體結(jié)合于塑料平板上，繼加細(xì)胞懸液，凡抗原陽性的細(xì)胞則與相應(yīng)抗體結(jié)合，抗原陰性的細(xì)胞可從未吸附的細(xì)胞懸液中獲取。 吸附柱法：將單個核細(xì)胞懸液注入裝有玻璃纖維或葡聚糖凝膠SephadexG10的柱層中，凡有粘附能力的細(xì)胞絕大部分被吸附而粘滯在柱層中，從柱上洗脫下來的細(xì)胞主要是淋巴細(xì)胞。此法簡單易行，對細(xì)胞極少損害。,第九頁，共七十五頁。,熒光(y237。ngguāng)激活分離法（FACS）,第十頁，共七十五頁。,流式細(xì)胞儀,第十一頁，共七十五頁。,磁性(c237。x236。ng)分離法,（1）磁鐵吸引法：利用單核細(xì)胞具有吞噬的特性，在單個核細(xì)胞懸液中加直徑為3μm的羰基鐵顆粒，置37℃溫箱內(nèi)短時旋轉(zhuǎn)搖動，待單核細(xì)胞充分吞噬羰基鐵顆粒后，用磁鐵將細(xì)胞吸至管底，上層液中含較純的淋巴細(xì)胞。 （2）磁激活細(xì)胞分離術(shù)MACs：是一種特異性細(xì)胞分選技術(shù)，其高度特異性來自抗體對抗原的特異性識別。主要組成成分為MACS微珠、MACS分選柱和MACS分選器。MACS微珠是與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒。MACS分選柱置于一個永久性磁場—MACS分選器中，可以將磁力增強1000倍，足以滯留(zh236。li)僅標(biāo)記極少量微珠的目的細(xì)胞。用緩沖液沖洗分選柱，所有未標(biāo)記的細(xì)胞被沖洗掉。分選柱離開磁場，即可獲得被標(biāo)記的細(xì)胞組分。,第十二頁，共七十五頁。,MACS (陽性(y225。ngx236。ng)選擇法）,,N,S,第十三頁，共七十五頁。,MACS (陰性(yīnx236。ng)選擇法）,,N,S,第十四頁，共七十五頁。,第十五頁，共七十五頁。,第十六頁，共七十五頁。,其他(q237。tā)分離法,花環(huán)沉降法：本法是將淋巴細(xì)胞與一定比例的綿羊紅細(xì)胞混合，待淋巴細(xì)胞形成E花環(huán)后，繼用淋巴細(xì)胞(x236。bāo)分層液分離細(xì)胞(x236。bā
合同協(xié)議相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1