【正文】 Microtox、 Beckman 公司的LUMIStox、 Merck 公司的 TOXAlert、 HACH 公司的 Eclox 等。 此外，許多 微生物受到毒性物質(zhì)侵害后，會表現(xiàn)為活性下降、呼吸活性變?nèi)?，生理狀態(tài)發(fā)生變化等。毒性物質(zhì)對細(xì)胞膜造成傷害，一方面允許細(xì)胞外的物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞，另一方面也會允許細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)流出。通過檢測鉀離子濃度的變化，就可以實(shí)現(xiàn)對毒性的檢測。 1998 年 Periasamy 等人系統(tǒng)的研究了卟啉分子與表面活性劑分子之間的相互作用，指出了表面活性劑分 子對卟啉熒光的增強(qiáng)機(jī)理 [30]。 2 實(shí)驗部分 化學(xué)物質(zhì) 長春工程學(xué)院（畢業(yè)論文） 6 試劑 公司 備注 氯化鈉 北京化學(xué)試劑公司 用來配制培養(yǎng)基 蛋白胨 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司 用來配制培養(yǎng)基 YEAST EXTRACT OXOID 有限公司 用來配制培養(yǎng)基 大腸桿菌 中國普通微生物菌種保藏管理中心（ CGMCC） 4℃ 冰箱中保藏 KH2PO4 北京化學(xué)試劑公司 用來配制磷酸鹽緩沖溶液 Na2HPO4 北京化學(xué)試劑公司 用來配制磷酸鹽緩沖溶液 HCl 北京化學(xué)試劑公司 用來配制磷酸鹽緩沖溶液 NaOH 北京化學(xué)試劑公司 4℃ 冰箱中保藏 卟啉（ 1mmol/L） 北京化學(xué)試劑公司 4℃ 冰箱中保藏 DCP（ 10g/L） 阿拉丁試劑公司 4℃ 冰箱中保藏 磷酸鹽緩沖溶液（ PBS）是自制的。 15℃ 下離心 5 分鐘，轉(zhuǎn)速 5000rpm，用 1%NaCl 洗滌兩次。在實(shí)驗中，樣品包含 400ul微生物懸浮液， 100ul有毒化學(xué)物質(zhì)和 500ul PBS。而毒性檢測的原理是對比健康的微生物細(xì)胞和受到毒性物質(zhì)損害的細(xì)胞對卟啉熒光增強(qiáng)的峰值的差異。 結(jié)果和討論 原理 圖 1 是本論文 基于微生物的代謝物對卟啉熒光的增強(qiáng)作用原理進(jìn)行檢測 。 此外，實(shí)驗最終現(xiàn)象是無毒性物質(zhì)的熒光增強(qiáng)作用要比有毒性物質(zhì)的高。 圖 2A 和圖 4B 是兩種不同的 DNA， 圖 2B 中的 DNA 是實(shí)驗初期一直 使 用的。 在實(shí)驗過程設(shè)計完成后，我們需要改變實(shí)驗過程中的單一變化條件 （改變微生物的濃度和反應(yīng)時間） ，以便 得到優(yōu)化的實(shí)驗條件，如圖 2C、 D、 E、 F和 G。此外，值得一提的是，選用 DNA 是因為其可以增強(qiáng)卟啉的熒光作用。從而在實(shí)驗的過程中，我們應(yīng)該考慮用吹氮?dú)獾姆椒▉砜疾爝策陨淼男再|(zhì)對實(shí)驗的影響。然而，如圖 3B 所示，隨著時間的增長，吹氮后 的卟啉熒光性質(zhì)表現(xiàn)得極為 穩(wěn)定。 H 長春工程學(xué)院（畢業(yè)論文） 15 圖 3A 新稀釋的卟啉隨放置時間的變化 圖 3B 吹氮后的新稀釋卟啉隨時間的變化 A B 長春工程學(xué)院（畢業(yè)論文） 16 圖 3C 搖床時間為 30min 時放置一夜的卟啉復(fù)合物熒光光譜圖 圖 3D 搖床時間為 60min 時放置一夜的卟啉復(fù)合物的熒光光譜圖 C D 長春工程學(xué)院（畢業(yè)論文） 17 圖 3E 搖床時間為 120min 時放置一夜的卟啉復(fù)合物的熒光光譜圖 對實(shí)驗條件進(jìn)行優(yōu)化 由 和 分別對實(shí)驗過程進(jìn)行了優(yōu)化和排除可能干擾實(shí)驗結(jié)果的因素后，我們通過改變微生物的濃度和反應(yīng)時間來進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗條件。然而，不同濃度的 DCP 對微生物細(xì)胞的抑制作用是不同的，因而我們需要考察 100ppm， 50ppm，25ppm, 和 八組不同濃度的 DCP 對微生物代謝物和卟啉作用所產(chǎn)生的影響。n A., Timedependent oxidative stress responses after acute exposure to toxic cyanobacterial cells containing microcystins in tilapia fish (Oreochromis niloticus) under laboratory conditions. Aquatic Toxicoogy, 20xx, 84: 337345 18. Abbott P., Flewelling L I., Landsberg H., Saxitoxin monitoring in three species of Florida puffer fish. Harmful Algae, 20xx, 8: 343348 19. Lecy J L., Stauber J L., Jolley D F., Sensitivity of marine microalgae to copper: the effect of biotic factors on copper adsorption and toxicity. Science of the Total Environment, 長春工程學(xué)院（畢業(yè)論文） 20 20xx, 387: 141154 20. Drost W., Matzke M., Backhaus T., Heavy metal toxicity to Lemna minor: studies on the time dependence of growth inhibition and the recovery after exposure. Chemosphere, 20xx, 67: 3643 21. Wollenberger L., S248。 Yong, Daming。 Weller, Ulrich。 Palmer, Michael, A guide to the use of poreforming toxins for controlled permeabilization of cell membranes. Med. Microbiol. Immunol 1993, 182 (4), 167175. 29. Zhai, Junfeng。在此感謝兩位老師的辛勤培養(yǎng)和諄諄教誨，與兩位老師的學(xué)習(xí)過程我會永遠(yuǎn)的銘記在心的，這樣的學(xué)習(xí)給我的大學(xué)生活也畫上了完美的句號。從設(shè)計實(shí)驗初期的毫無頭緒到后期的實(shí)驗得心應(yīng)手進(jìn)行的整個過程中，花費(fèi)了翟老師很多的寶貴時間和精力，在此向翟老師表示衷心地感謝！盡管我不能把幫助過我的師兄師姐一一的列舉出來，但是在這里與各位的學(xué)習(xí)時光會成為我大學(xué)中一段美好的回憶。謝謝您！ 四年的生活中，感謝我的老師，朋友和同學(xué)給予我的幫助和鼓勵！希望今后的我們都不斷地向上奮進(jìn)，加油！ 感謝各位專家在百忙中審閱我的論文！ 感謝長春工程學(xué)院理學(xué)院各位老師對我的栽培！ 。在我遇到問題時，給我提出合理的建議，幫我分析問題的利弊。 大學(xué)生活的最后一個實(shí)習(xí)學(xué)習(xí)是在 中國科學(xué)院 長春應(yīng)用化學(xué)研究所度過的，在這里的工作和生活得到了老師、師兄和師姐的熱心幫助和親切關(guān)懷。 Li, Jing。 Martin, Edith。 Dong, Shaojun, Neutral red based colorimetric microanism bioassay for direct toxicity assessment of toxic chemicals in water. Anal. Methods 20xx, 4, 38493854. 27. 楊生玉；王剛；沈永紅 , 微生物生理學(xué) . 化學(xué)工業(yè)出版社 : Beijing, 20xx。 Biotechnology, 20xx, 24(4): 267274 26. Zhai, Junfeng。n A., Acid and alkaline phosphatase activities and pathological changes induced in Tilapia fish (Oreochromis sp.) exposed subchronically to microcystins from toxic cyanobacterial blooms under laboratory. Toxicon, 20xx, 46: 725735 17. Prieto I., Pichardo S., Jos 193。 OD 值 時間 /min 8 16 24 30 60 120 圖 4 不同微生物濃度和反應(yīng)時間下測得毒性物質(zhì)對微生物代謝物的抑制率 由 圖 4 可得，最為理想的實(shí)驗條件是 OD 值為 8 和反應(yīng)時間為 60分鐘。 如圖 2E， F 和 G 為不同搖床時間加入新稀釋的卟啉的熒光光