不同類型細胞的培養(yǎng)特點-wenkub
2024-10-06 02 本頁面
【正文】 常細胞，在體外培養(yǎng)時都 不易生長，建立細胞系更難。 第四頁，共七十頁。 (一 )表皮細胞培養(yǎng) 1．特點 ： ? 在有膠原的底物上易生長 ； ? 把人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以 3T3 細胞為飼養(yǎng)層 (用射線照射后 )上時，細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現(xiàn)象。 ?【飼細胞】飼細胞 (Feeder Cells)也稱滋養(yǎng)細胞，是一層經(jīng)過射線照射或絲裂霉素傷害處理的、用作克隆細胞附著底物的細胞層。 第七頁，共七十頁。 (3) 冷消化：換入 % 胰蛋白酶中，置 4℃過夜； (4) 別離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開； 第九頁，共七十頁。 第十一頁，共七十頁。 細胞接種后一般在 16 小時內(nèi)貼壁，細胞呈多角形，成島狀或片狀生長，以后逐漸聯(lián)接成片。 1．初代組織塊培養(yǎng)： ?肝組織做組織塊培養(yǎng)效果很好。 2．初代消化法培養(yǎng)： (1) 把肝組織切成 2 ~ 4 立方毫米的小塊，用不合鈣鎂的BSS 液洗兩次； (2) 移入 1:1 的 ％胰蛋白酶和 ％膠原酶 (都用無鈣鎂 BSS 配制 ) 中， 4℃ 冷消化 10 ~ 12 小時后，通過 250 微米和 64 微米尼龍網(wǎng)或不銹鋼紗網(wǎng)濾過 (用紗布濾過亦可 )； (3) 收集細胞、 BSS 液洗 1 ~ 2 次、計數(shù)、接種培養(yǎng)； 第十六頁，共七十頁。 第十八頁，共七十頁。 2. 其它如胚胎和幼體動物的大血管，亦可用于培養(yǎng)； (2) 先用三通注射器吸 溫 PBS 液注入臍帶的臍靜脈中，洗除殘血 ；注入口處宜用線繩結(jié)扎，以防液體返流； 第二十頁，共七十頁。 ?人臍帶易于獲得，培養(yǎng)效果好；細胞生長后，一般傳 6 ~ 7 代后即衰退，難以長期維持。 ?近年毛細血管培養(yǎng)已獲成功； ?利用人的小兒包皮、人脾臟、牛腎上腺、癌組織 (如卵巢癌 ) 等均可； 第二十四頁，共七十頁。 第二十六頁，共七十頁。 第二十八頁，共七十頁。 第三十一頁，共七十頁。 第三十二頁，共七十頁。 小鼠成纖維細胞； 細胞來源： swiss小鼠胚胎 第三十四頁，共七十頁。但屬不繁殖型細胞群，難以長期生存，好的條件下僅能生活 2 ~ 3周，因之多用作初代培養(yǎng) 。 ?實驗多從動物血液、肺、脾和胸腹腔獲取，其中以從動物腹腔取材最常用。人的材料除來源不同外，培養(yǎng)方法大同小異。 第四十頁，共七十頁。 (1) 取材 ： 殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成 ~ 厘米小塊； (2)消化 ： 用不含鈣鎂離子的 Hanks 液配的 ％胰蛋白酶消化，無菌紗網(wǎng)或紗布濾過，合成培養(yǎng)基加 10％小牛 (或馬 )血清培養(yǎng)， 為促進分化可加 1％ 的胎汁； 第四十一頁，共七十頁。數(shù)日后融合停止，此時能觀察到橫紋。 ?心肌是比較容易培養(yǎng)和生長的組織，可應(yīng)用多種方法進行培養(yǎng)，如懸滴培養(yǎng)、組織塊培養(yǎng)和消化培養(yǎng)法等，主要取心室肌培養(yǎng)，均能獲得良好的生長效果。在培養(yǎng)成功時，相差顯微鏡下可觀察到橫紋；一周后便可出現(xiàn)節(jié)律性收縮現(xiàn)象。 四、神經(jīng)組織細胞培養(yǎng) 神經(jīng)組織主要由兩種神經(jīng)細胞 (神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞〕組成。 神經(jīng)膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元有共存關(guān)系。 第五十一頁，共七十頁。 第五十二頁，共七十頁。 2．生長特點： ?接種后初期，細胞可能出現(xiàn)飄浮不貼壁現(xiàn)象，貼壁后在短期內(nèi)也可能不見細胞分裂現(xiàn)象；細胞適應(yīng)環(huán)境過程較長，然而一旦生長后，即能進入較旺盛的增殖狀態(tài)。 第五十六頁，共七十頁。取材時盡量防止用退變組織，要挑選活力較好的部位。腫瘤細胞對血清的需求比正常細胞低，正常細胞培養(yǎng)不加血清不能生長，腫瘤細胞在低血清培養(yǎng)基中也能生長。 3．成纖維細胞的排除： ?成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤細胞。 成纖維細胞排除法 1．機械刮除法： 是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭 (用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲 )，或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用 (也可用特制電熱燒灼器刮除 )。 第六十一頁，共七十頁。 第六十二頁，共七十頁。 4．膠原酶消化法： 本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。 5．其它方法： 有人發(fā)現(xiàn)聚丙烯酰胺有抑制成纖維細胞生長的作用；也有人用聚蔗糖制備成比重 ~ 的密度梯度離心液，參加細胞懸液后，在 23℃ 中 800g 離心 10 分鐘。 第六十五頁，共七十頁。 3．動物體媒介培養(yǎng)： ? 為提高腫瘤細胞對體外培養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)力和增加有活力癌細胞 (干細胞 ) 的數(shù)量，可采用動物體轉(zhuǎn)嫁接種成瘤后，再從動物體內(nèi)取出進行培養(yǎng)，能提高體外培養(yǎng)的成功率。 肝癌細胞 第六十八頁，共七十頁。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成 1mm3 左右的小塊，采用貼壁培養(yǎng)法。 。動物可用小鼠或雞胚，去頭和內(nèi)臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養(yǎng)。 內(nèi)容總結(jié)
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